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ZengChangjin曾长金（AsherCharles）ShanghaiTofflonScienceandTechnologyCo.,Ltd.Companyname2Contents目录1第一节概述2第二节光阻法与膜显微镜法介绍3第三节光阻法测试4第四节膜显微镜法测试5第五节总结Companyname第一节概述1、微粒检查介绍2、不溶性微定义3、微粒检查的意义4、微粒检查的要求5、微粒评估Companyname4一、微粒检查介绍在美国标准USP中，就静脉注射液和滴眼液进行微粒检查，主要涉及光阻法和膜显微镜法。这些方法并不是最好的，不一定对每一种配方和剂型都最合适（乳剂就不合适），但是它代表了微粒测定的基础和标准的方法，可以理解成最常用的方法。就这些方法而言，许多公司积累了许多宝贵的和丰富了经验和历史数据。此外，分析方法和限度是随着技术进步而演化，标准和规定并不是不变的，但是方法和限度的改变受监管机构、市场、商业等方面的影响。Companyname5二、什么是不溶性微粒？subject不溶性微粒是指在注射剂或溶液中不应该出现的、外来的、流动的物质（不是气泡）。任何半固体或固体，无论软硬、透明与否，都可被作为微粒来计算。本质：1、不溶的、流动的固体或半固体；2、单体或集合物；3、单品种或多品种；4、化学作用形成。来源：1、工艺中的外来物；2、工艺或产品中的一部分（渣、屑）；2、配方中固有的（如：蛋白质产品在一定温度下的沉降，或本身就有）。Companyname6三、微粒检查的意义微粒检查是在可见异物检查符合规定后，用以检查静脉用注射剂（溶液型注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液）及供静脉注射用无菌原料药中不溶性微粒的大小及数量。微粒的定量检测对于产品的质量分析和控制是非常必要的。通过膜显微镜法对产品中出现的微粒进行定性分析，可以有利于产品的质量跟踪和控制。此外，通过微粒分析可以对配方的稳定性进行研究。Companyname7微粒来源反映产品配方的不稳定性：1、过程控制的失败；2、配方的设计不好，影响了产品的使用、储存和相容；3、就生物制剂而言，特别考虑产品的稳定性；4、容器和密封系统的问题；5、包装的问题（有的包装随时间的增加，会改性产生污染）；6、泄露或过量的气体泄露；7、不可控或未知的辅料因素；8、活性成分（某些成分分解）。Companyname8四、微粒检测要求静脉注射液和滴眼液都是无菌液体，在产品放行前，在物理外观和稳定性应该符合一定的要求，它们在放行前必须符合两个关于微粒限度的测试。1、可见微粒必须‘基本没有’；2、显微可见微粒含量必须很低。Companyname9方法1：光阻法（LO）方法2：显微镜法注射液体积≥10μm≥25μm≥10μm≥25μm小容量注射液（体积小于100ml）6000个（每个容器）600个（每个容器）3000个（每个容器）此主要针对研发和有实力的单位。300个（每个容器）大容量注射液（体积大于100ml）25个（每ml）3个（每ml）12个（每ml）2个（每ml）Companyname10五、微粒评估1、终产品100%通过目视检查（微粒的限度：50~100μm）2、容器含有的显微可见微粒应受控并满足最低标准（主要通过光阻法&膜显微镜法）。结合目视检查和不溶性微粒的限度检查可以检查：1、产品的物理性状的改变（色彩改变，混浊，沉淀，聚集，结晶，透明度改变）；2、悲剧性的微粒增加。Companyname11测试方法目视法光阻法膜显微镜法Companyname121、目视检查法目视法是单借助人眼粗略的观察产品是否变色，混浊，沉淀，聚集，结晶来估计产品的质量。目视检查法所能见的微粒大小位于光阻法的检测上限，有许多局限性，带有主观性，重复性较差。光阻法检测属于仪器分析，有局限性（容易误判），但重复性较好。Companyname132、限度检查光阻法和膜显微镜法当光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法进行测定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。光阻法不适用于黏度过高和易析出结晶的制剂，也不适用于进入传感器时容易产生气泡的注射剂。对于黏度过高，采用两种方法都无法直接测定的注射液，可用适宜的溶剂经适当稀释后测定。Companyname143、双重法不溶性微粒检查的两种方法均适用于批放行检验或者稳定性试验检测，一般说来，首先采用光阻法，如果必要才采用膜显微镜法，每次检查可以结合两种方法一起用。条件：1、必需保证供试品溶液不被污染；2、通过药品的生产进度建立合适的批取样检测计划；3、在整个试验过程中采用纯水清洗容器、纯水稀释样品和纯水作为空白；4、不溶性微粒检查可以适用于大容量和微量注射液；Companyname15第二节光阻法与膜显微镜法简述内容Others可见度visuality光阻法LightObscurationParticleCountTest膜显微镜法MicroscopicParticleCountTest对比contrastCompanyname16一、微粒的可见度影响可见度的因素：1、实验人员的视力/实验仪器的灵敏度；2、微粒的物理特性；3、实验环境（背景和光线设置）。许多药品生产企业采用仪器和人联合进行系列检查，同时培训质量控制内审人员，以提高检验的可靠性。Companyname17二、光阻法原理：当液体中的微粒通过一窄小的检测区时，与液体流向垂直的入射光，由于被微粒阻挡而减弱，因此由传感器输出的信号降低，这种信号变化与微粒的截面积大小相关，光阻法检查注射剂中不溶性微粒即依据此原理。Companyname18Companyname19光阻法1、显微可见的固体微粒、液体和气体微粒都被计数（缺点：造成测定值比较大）；2、样品测试液需被量化(严格的取样程序)；3、有相应的日常校准和取样程序（仪器系统化标准化测试）；4、测试人员数目和环境要求受控；5、要有空白对照；6、有专门的测试供应系统（水，专用的器皿工具，稀释和汇集系统，文件化系统等）；7、某些物质不能用该法测试。Companyname20三、膜显微镜法计数测试原理：将一个或多个容器中的产品中的固体物质截留在过滤膜上，计算在膜表面上的亚可见的到可见的，固体或半固体颗粒。通过计算100倍复合双眼光学显微镜上扫描截留表面上的颗粒计数。该方法高度依赖操作员，操作员对微粒和可接受性做出决策。此外，该法要求全部计数，也即对滤膜上的微粒一个接一个的数。但是部分计数是允许的，也即只数网格中的一部分，然后估算整个滤膜上的微粒数目，不过788和1788没有定义。建议：如果少于1000个微粒则应当全部计数，如果计数标尺视野（GFOV）中央和边缘的微粒计数小于2个那么就计算20个GFOV25mm膜的总计数或计算100个GFOV47mm膜的总计数。Companyname21膜显微镜法1、采用过滤的方式将单个容器或多个容器中的样品中的不溶性微粒过滤在滤膜上；2、对于滤膜（孔径小于1μm）上收集的显微可见微粒、固体和半固体微粒进行计数；3、将滤膜放在视野放大100倍的显微镜下观察进行微粒计数；4、试验人员在计数的同时确定微粒的大小，同时对是否符合标准要求做出判断。1.依赖于实验员；2.膜显微镜法最理想的操作条件是在两个靠得很近的单向气流工作台上进行操作，湿的层流罩专用于过滤操作，干层流操作工作台专用于显微镜检查。3.膜显微镜法可适用于大小容量的注射液的不溶性微粒检查，但是也可以适用于非常规机型的检查（乳剂，悬液）；4.对于较小量的供试品而言，可以不进行稀释至最小检验体积就可以直接进行测定。Companyname22四、比较光阻法膜显微镜法对于乳剂或某些剂型不合适容易受气体，不溶性油滴等的影响，测得数据往往较高，准确度不是很好！微电子计数，重复性较高可以对注射剂直接测量，适用性较广，对于小剂量昂贵的产品可以直接测量，不必汇集和稀释到测量水平。很大程度上依赖于操作员操作，企业要有严格的操作员培训和考核机制。目视计数，依赖于操作员的判断，重复性较差。光阻法其局限性在于微粒的形状，优势在于球形颗粒。其将所有的微粒模拟成球形，当微粒的外形与球形有差异时，就会出现偏差。膜显微镜法直接将膜上的微粒与校准过的直径为10μm和25μm的圆进行比较，同时还有一个镜台标尺。操作者还可以在操作的时候将视野中的微粒与直径为10μm和25μm的圆进行比对计数。Companyname23第三节光阻法测试详细介绍内容1.Introduction2.条件3.测试方法和步骤4.结果判定Companyname24一、Introduction注射剂及非口服输液中的悬浮微粒是非故意存在于溶液中的可移动的不溶性的粒子（非气泡）。下文将陈述光阻法和膜显微镜法对注射剂及非口服输液中的悬浮微粒进行测试。光阻法已经较好的应用于注射剂及非口服输液中的悬浮微粒的测试，但是有必要在光阻法测试基础上结合膜显微镜法测试来确认测试结果的可靠性和合理性。这两种方法并不是适用于对所有的非口服的注射或输液进行悬浮微粒测试。如：乳剂、胶体和脂质体供试液不适合用光阻法测试，而用膜显微镜法比较合理。相类似，当置入传感器，会产生气体或气泡的产品，不适合用光阻法而选用膜显微镜法。如果供试品的粘度比较高，需要对其进行稀释后才能用两种方法进行分析测试。随机的一个或一组样本测试的结果并不能推测未被测试的产品微粒情况，因此可靠的符合统计学采样的程序开发时非常重要的。对仪器的一般要求仪器通常包括取样器、传感器和数据处理器三部分。测量粒径范围为2～50μm，检测微粒浓度为0～5000个/ml。仪器的校正与检定所用仪器应至少每6个月校正一次。Companyname25二、Generalprecautions测试要求在微粒较少并受控的环境下进行，最好是在层流生物安全柜里操作。用温和的清洗剂小心地清洗要用的玻璃器皿及过滤设备（除过滤膜外），然后用大量的清洁水冲洗清洗剂。在设备使用前，从上到下，从外到内地用无尘水冲洗设备。尤其是小量的供试液转移至测试容器的过程中，小心不要产生气泡于待测的供试液中。为了检验环境是否适合于微粒限度测试，常进行空白对照，具体程序是：在无微粒器皿和水准备就绪条件下，测试5个装有5ml无微粒水的空白品的微粒数。如果总共25ml的空白中大于等于10μm的微粒数超过25个，那么准备工作是做得不充分的，那么就得重新调整和采取措施，并再次测试直到环境器皿水适合测试为止。Companyname261、推荐用层流台；2、人员流动控制在最小；3、专用的玻璃器皿；4、为产品容量和类别而开发的稀释和汇集系统；5、已经建立仪器标准化测试（IST）与实验室控制；6、供应商提供校准支持或者自己建立有关程序文件支持的内部体系。测定微粒的光阻计数仪器可能不同；通常仪器生产商在校准、验证和技术支持上能给予强烈支持；试验人员（需要培训和资质确认，必需熟悉粒子计数的原理和测试操作）目标是对注射剂中的微粒的大小和数目测定和良好的重现性。光阻法微粒测定仪器的校准必需通过手动校准的方式进行，仪器应有标准化校准的硬件和软件。要点Companyname27仪器标准化测试（IST）:1、流速的确认；2、传感器的确认和校准（确定传感器的测试浓度范围、传感器的灵敏度及检测最小微粒的粒径）；3、供试品取样体积的准确性确认；4、系统适用性试验（微粒计数的准确性，系统确认和实验室控制）。Companyname校准1、分离度判定传感器分辨大小的能力，使用校准微粒来判断反应的平均值或峰值。2、准确度判定计数结果与外部标准的相似程度。3、计数比率判断大小的界限是否设定正确，使用美国药店标准品15μm进行设定。通过对部分供试品溶液中的微粒计数的结果来确定整个产品的微粒数目；小于25ml装量的样品要求多个容器取出混合；可以直接从注射液容器中取样检测；通过光从发生器中产生通过供试品溶液，被传感器接收（当微粒经过光束时，引起传感器上电压的增高，增高程度与被检测到的微粒大小有关）。28Companyname29仪器标准化测试（IST）取相对标准偏差不大于5%，平