XXXX年版药典附录无菌检查和微生物限度检查法增修订内容

中国.中学政治教学网崇尚互联共享起草的指导思想一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着力解决发展中的问题。二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会作出贡献。年版无菌检查法增修订内容一、进一步确定了无菌检查法的定义：无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。二、进一步明确了无菌检查保障1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，但采用的措施不得影响微生物的生长。2、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需进行环境检测。3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。中国.中学政治教学网崇尚互联共享无菌检查仪器无菌检查仪无菌滤杯中国.中学政治教学网崇尚互联共享三、培养基增修订内容⒈删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的使用范围。⒉删去选择性培养基使用的表面活性剂种类对氨基苯甲酸、聚山梨酯-80等中国.中学政治教学网崇尚互联共享培养基适用性检查增修订内容3、培养基灵敏度试验⑴菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制备修改为“用适宜的方法吸出孢子悬液”。⑵在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加入0.05％v/v）聚山梨酯80。中国.中学政治教学网崇尚互联共享四、试验稀释液、冲洗液增修订为⒈增加根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活性剂除证明其有效性外还应证明对污染的微生物无影响修改为无毒性。中国.中学政治教学网崇尚互联共享五、方法验证试验增修订内容⒈试验菌株删除铜绿假单胞菌增加大肠埃希菌及大肠埃希菌菌液的制备(同金黄色葡萄球菌)。⒉薄膜过滤法供试品用量将规定量供试品按薄膜过滤法过滤修改为取每种培养基规定接种的供试品总量。中国.中学政治教学网崇尚互联共享六、供试品的无菌检查增修订内容⒈检验量直接接种法除另有规定外，每份培养基接种的供试品量按表2、表3规定删除，采用直接接种法时的规定。2.阴性对照无菌试验中若使用表面活性剂等应证明其有效性且对微生物生长无影响修改为无毒性。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⒊薄膜过滤法①增加了抗生素供试品滤膜选择的指导应选择低吸附的滤器及滤膜。②若需要冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，且冲洗量不宜过大修改为总冲洗量不得超过1000ml。⑴水溶液供试品含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜修改为所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验.中国.中学政治教学网崇尚互联共享微生物限度检查增修定内容修改内容1、培养条件控制菌培养温度35℃～37℃修改为30℃～35℃。限度检查（薄膜过滤仪器）、检验量增修订内容⑴中药膜剂检验量50cm2修改为100cm2。⑵沙门菌检验量修改为检验量为20g或20ml并注明（其中10g用于阳性对照）。、供试液的制备增修订内容⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对微生物生长和存活无影响修改为无毒性。⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超过45℃。具抑菌活性的供试品增修订内容删除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法。中国.中学政治教学网崇尚互联共享①离心沉淀集菌法两次离心修改为一次离心；500转/分离心，不超过3分钟，取全部上清液用于检查。适用范围⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容⒈新增计数培养基的适用性检查⑴菌种大肠埃希菌（Escherichiacoli）〔CMCC（B）44102〕金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC（B）26003〕枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕白色念珠菌（Candidaalbicans）〔CMCC（F）98001〕黑曲霉（Aspergillusniger）〔CMCC（F）98003〕中国.中学政治教学网崇尚互联共享①增加了菌悬液的制备及保存条件。菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可以在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，按规定条件培养计数，同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。②增加了对照培养。、供试品检查增修订内容⑴平皿法删去采用平皿法进行菌数测定时，连续2～3个稀释级的供试液。修改为按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⑵培养时间修改内容除另有规定外，细菌培养48小时改为3天，霉菌、酵母菌培养72小时改为5天，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⑶菌数报告规则增修订内容⒈若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。⒉细菌、酵母菌和霉菌平均菌落数在30～300、30～100之间的稀释级修改为选取菌落数小于300cfu和100cfu的稀释级作为菌数报告的依据。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⑷薄膜过滤法增修订内容新增内容采用其它直径的滤膜，冲洗量应相应的进行调整（如使用膜直径增大冲洗液量也应相应增加，可保证冲洗液覆盖整个滤膜）。中国.中学政治教学网崇尚互联共享增加了白色念珠菌检验方法增菌培养沙氏葡萄糖肉汤培养基。分离培养划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。鉴定试验典型菌落⒈沙氏葡萄糖琼脂培养基菌落呈乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓酵母气味，时间稍久则菌落增大，颜色变深、质地变硬或有皱摺。⒉念珠菌显色培养基菌落呈绿色或翠绿色菌落生长。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⒋确认试验取1%吐温80-玉米琼脂培养基培养物进行染色，镜检及芽管试验。结果判断非革兰阳性菌，显微镜下未见厚膜孢子、假菌丝、芽管判未检出白色念珠菌中国.中学政治教学网崇尚互联共享三、药品微生物检验替代方法验证指导原则⒈目的–⑴是为所采用的试验方法能否替代药典规定的–方法用于药品微生物的检验提供指导。–⑵在控制药品微生物质量中，需要采用替代方–法时，应进行方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⒉微生物检验的类型及验证参数药品微生物检验方法主要分两种类型定性试验定量试验⒊生物试验的特殊性抽样误差操作误差稀释误差培养误差计量误差计数误差药品质量标准分析方法验证指导原则不完全宜于微生物替代方法的验证。中国.中学政治教学网崇尚互联共享培养基培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。该指导原则对培养基的制备、储存、灭菌及质量控制进行了指导。中国.中学政治教学网崇尚互联共享培养基的制备⒈容器⒉溶剂⒊管理应形成程序化管理培养基的制备方法称量配制分装pH应确定培养基灭菌后的pH（冷却至室温25℃测定）。PH的范围不能超过规定的0.2。中国.中学政治教学网崇尚互联共享培养基的贮藏⒈商品化培养基应根据使用说明书上的要求进行储存。脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮存，如低温、干燥和避光，所有的容器应密闭，尤其是盛有脱水培养基的容器.⒉自配的培养基应标记名称、批号、配制日期等信息，并在已验证的条件下贮藏。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⒊培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在高压灭菌器中，避免影响培养基的质量。⒋保存于密闭容器中，避光保存，可防止水分流失以延长保存时间。琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，一般不超过一周，且应密闭包装，若延长保存，保存期需经验证确定。中国.中学政治教学网崇尚互联共享⒌固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次，融化的培养基应放在45～50℃的水浴中，不得超过8小时。⒍使用过的培养基（包括失效的培养基）应按照国家污染废物处理相关规定进行。中国.中学政治教学网崇尚互联共享菌种实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，⑴使尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。⑵按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。中国.中学政治教学网崇尚互联共享菌种保藏的原则⑴标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株.冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻或再次使用。⑵工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。中国.中学政治教学网崇尚互联共享菌种的传代和使用⑴工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代防止过度的传代造成菌种变异,工作菌株不可代替标准菌株.⑵任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。中国.中学政治教学网崇尚互联共享中国.中学政治教学网崇尚互联共享中国.中学政治教学网崇尚互联共享中国.中学政治教学网崇尚互联共享中国.中学政治教学网崇尚互联共享中国.中学