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2.1.5由于分析采用的是正相色谱法，•如分析前仪器使用的是反相色谱法，则仪器的流路系统(包括所有管道，如吸入的滤头、泵、进样器和检测器流通池）必须按高效液相色谱法标准操作规范，用异丙醇做充分的过凌冲洗处理。2.2试药2.2.1配制流动相的溶剂均应采用色谱纯。2.2.2维生素D2、维生素D3对照品。3操作方法3.1对照品贮备液的制备根据各制剂中所含维生素D的成分，精密称取相应的维生素〇2或维生素03对照品25mg，置100ml棕色量瓶中，加异辛烷80ml，避免加热,用超声处理助溶lmin使完全溶解，加异辛烷至刻度,摇匀,作为贮备溶液(1);精密量取5.0ml至50ml棕色量瓶中，加异辛烷稀释至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0°C以下保存，作为贮备溶液(2)。测定维生素D2时，应另取维生素D3对照品25mg，同法制成维生素D3对照品贮备•溶液，供系统适用性试验用。3.2色谱条件与系统适应性试验3.2.1色谱条件用硅胶为填充剂，正己烷-正戊醇（997:3)为流动相，检测波长为254nm。3.2.2系统适用性试验用溶液的制备量取维生素D3对照品贮备溶液（l)5ml，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90°C水浴中加热lh,取出迅速冷却，加正己烷5ml，摇勻，置lcm具塞石英吸收池中，在2支8W主波长分别为254mn和365nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成45°，并距灯管5〜6cm，照射5min(可根据紫外灯能量的强弱，调整照射的时间），使溶液中含有前维生素D3、反式维生素D3、维生素D3和速留醇D3。3.2.3测定法:取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰面积，先后进样5次，相对标准偏差应不大于2.0%;前维生素D3(与维生素D3的相对保留时间约为0.5)与反式维生素D3(与维生素D3的相对保留时间约为0.6)以及维生素D3与速留醇以（与维生素D3的相对保留时间约为1.1)的峰分离度均应大于1.0。3.3响应因子的测定3.3.1精密量取对照品贮备溶液（2)5ml，置50ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇勻，作为对照品溶液;取一定量注人液相色谱仪，计算维生素D的响应因子f“3.3.2另精密量取对照品贮备溶液（2)5ml置50ml量瓶中，加入2，6-二叔丁基对甲酚结晶1粒，通氮排除空气后，密塞，置90°C水浴中加热1.5h,取出迅速冷却至室温，加正已烷至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液；取一定量注人液相色谱仪，计算前维生素D的响应因子/2。3.4含量测定取各该制剂项下制备的供试品溶液进行测定，按下列公式计算维生素D及前维生素D折算成维生素D后的总浓度（C,)。4注意事项4.1应按照高效液相色谱法和液相色谱仪的标准操作规程进行测试。4.2维生素D的性质不稳定，对光、热、氧及化学试剂均十分敏感，可转变成多种异构体;在3.3.2中，前维生素D、对照溶液制备时，应严格注意避光操作。4.3系统适用性试验用溶液也可采用USP的对照品进行测定，以确定前维生素D3、反式维生素D3和速留醇仏的出峰时间。•201•5记录与计算5.1记录高效液相色谱仪型号、色谱条件、供试品与对照品名称、批号及取用量、系统适用性试验的色谱图及含量测定的图谱。5.2计算5.2.1照下述公式计算维生素D的响应因子力：fi=C\/Ai式中G为维生素D对照品溶液的浓度，(xg/rnl;八为对照品溶液所得色谱图中维生素D峰的峰面积。5.2.2照下述公式计算前维生素D的响应因子h。/2=(Ci—/iAi}/A2式中C,为/,测定项下维生素D对照品溶液的浓度,jug/ml;A为维生素D的响应因子；A,为混合对照品溶液所得色谱图中维生素D的峰面积；A2为混合对照品溶液所得色谱图中前维生素D的峰面积。5.2.3照下述公式计算供试品溶液中维生素D的总浓度Q=/iAii+fiAa式中A„为维生素D的峰面积；Ai2为前维生素D的峰面积。修订人：黄海伟（中国药品生物制品检定所)郑金琪（浙江省食品药品检验所）氯化物检查法1简述1.1微量氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化银浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液在同一条件下生成的氯化银浑浊液比较，以检査供试品中氯化物的限量。1.2本法(《中国药典》2010年版二部附录珊A)适用于药品中微量氯化物的限度检査。2仪器与用具纳氏比色管50ml，应选玻璃外表面无划痕，色泽一致,无瑕疵，管的内径和刻度线的高度均勻一致的质量好的玻璃比色管进行实验。3试药与试液标准氯化钠溶液的配制称取氯化钠0.165g，置1000ml量瓶中，加水适量使其溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每lml相当于10吨的C1)。4操作方法4.1供试品溶液的配制除另有规定外，取各品种项下规定量的供试品，置50ml纳氏•202•比色管中，加水溶解使成约25ml(溶液如显碱性，可滴加硝酸使遇pH试纸显中性），再加稀硝酸lOnil;溶液如不澄清，应滤过;再加水使成约40ml,摇匀，即得。4.2对照溶液的配制取该品种项下规定量的标准氯化钠溶液，置另一50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇勻，即得。4.3于供试品溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液L0ml，用水稀释使成50ml,摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊。4.4供试品溶液如带颜色,除另有规定外，可取供试品溶液两份，分置50ml纳氏比色管中，一份中加硝酸银试液1.0ml,摇勻，放置lOmin，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml,摇匀，在暗处放置5min,作为对照溶液；另一份中加硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml,摇勻，在暗处放置5min;与对照溶液同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊。5注意事项5.1供试品溶液与对照溶液应同时操作，加入试剂的顺序应一致。5.2应注意按操作顺序进行，先制成40ml的水溶液，再加人硝酸银试液1.0ml,以免在较大浓度的氯化物下局部产生浑浊，影响比浊。5.3应将供试品管与对照管同时置黑色台面上，自上而下观察浊度，较易判断。必要时，可变换供试管和对照管的位置后观察。5.4供试品溶液与对照溶液在加人硝酸银试液后，应立即充分摇匀，以防止局部过浓而影响产生的浑浊;并应在暗处放置5min，避免光线直接照射。5.5供试品溶液如不澄清，可预先用含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物，再滤过供试品溶液，使其澄清。5.6纳氏比色管用后应立即用水冲洗，不应用毛刷刷洗，以免划出条痕损伤比色管。6记录记录实验时的室温、取样量、标准氯化钠溶液的浓度和所取毫升数，以及比较所产生浑浊的观察结果。7结果与判定供试品管的浑浊浅于对照管的浑浊，判为符合规定；如供试品管的浑浊浓于对照管，则判为不符合规定。起草人：李叙琳（广东省药品检验所）潘德敏（陕西省食品药品检验所）定稿人：孙树荣（北京市药品检验所）硫酸盐检查法1简述1.1微量硫酸盐在盐酸酸性溶液中与氯化钡作用生成硫酸钡浑浊液，与一定量的标准硫酸钾溶液在同一操作条件下生成的浑浊液比较，以检査供试品中硫酸盐的限量。1.2本法(《中国药典》2010年版二部附录珊B)适用于药品中微量硫酸盐的限度检查。•203•2仪器与用具纳氏比色管50ml,应选玻璃质量好、配对、无色(尤其管底）、管的直径大小相等、管上的刻度高低一致的纳氏比色管进行实验。3试药与试液标准硫酸钾溶液的配制称取硫酸钾0.181g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇勻，即得(每lml相当于lOOfxg的S04)。4操作方法4.1供试品溶液的配制除另有规定外，取各品种项下规定量的供试品，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成约40ml;溶液如显碱性，可滴加盐酸使遇pH试纸显中性;溶液如不澄清，应滤过;加稀盐酸2ml，摇匀，即得。4.2对照溶液的配制取该品种项下规定量的标准硫酸钾溶液，置另一50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇勻，即得。4.3于供试品溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释使成50ml，充分摇匀,放置lOmin,同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊。4.4供试品溶液如带颜色,除另有规定外，可取供试品溶液两份,分别置50ml纳氏比色管中，一份加25%氯化钡溶液5ml，摇匀，放置lOmin,如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准硫酸钾溶液与水适量使成50ml，摇匀，放置lOmin,作为对照溶液;另一份加25%氯化钡溶液5ml与水适量使成50ml,摇勻，放置lOmin，按上述方法比较所产生的浑浊。5注意事项5.1供试品溶液如需过滤，应预先用盐酸酸化的水洗净滤纸中可能带来的硫酸盐，再滤过供试品溶液，使其澄清。5.2加入25%氯化钡溶液后，应充分摇匀，以免影响浊度。5.325%氯化钡溶液存放时间过久，如有沉淀析出，即不能使用，应予重配。5.4应将供试品管与对照管同置黑色台面上，自上向下观察浊度，较易判断。必要时，可变换供试品管和对照管的位置后观察。5.5纳氏比色管用后应立即用水冲洗，不应用毛刷刷洗，以免划出条痕损伤比色管。6记录记录实验时室温、取样量、标准硫酸钾溶液的浓度和所取毫升数，以及比较所产生浑浊的观察结果。7结果与判定供试品管的浑浊浅于对照管的浑浊，判为符合规定；如供试品管的浑浊浓于对照管，则判为不符合规定。起草人：李叙琳（广东省药品检验所）潘德敏（陕西省食品药品检验所)定稿人：孙树荣（北京市药品检验所）204•硫化物检查法1简述1.1微量硫化物和稀盐酸作用产生硫化氢气体，遇醋酸铅试纸产生棕色斑点，与一定量的标准硫化钠溶液在同一操作条件下产生的棕色斑点比较，以检査供试品中硫化物的限量。1.2本法(《中国药典》2010年版二部附录观C)适用于药品中微量硫化物的限量检査。2仪器与用具应符合《中国药典》2010年版二部附录WJ砷盐检查法项下第一法的仪器装置，但在测试时，导气管C中不装入醋酸铅棉花，并将旋塞D的顶端平面上的溴化汞试纸改用醋酸铅试纸(试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞E并旋紧。3标准硫化钠溶液的配制3.1配制取硫化钠约l.Og，加水溶解成200ml，摇勻。3.2标定精密量取上述配制的溶液50ml，置碘瓶中，精密加碘滴定液（0.05mol/L)25ml与盐酸2ml，摇勻，用硫代硫酸钠滴定液（0.lmol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml,继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正，每lml的碘滴定液(0.05mol/L)相当于1.603mg的S。硫化钠溶液中含硫的浓度按下式计算：硫的浓度（mg/ml)=^f^k^式中M为硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol/L;V。为空白滴定消耗硫代硫酸钠滴定液的毫升数，ml;V为硫化钠溶液消耗硫代硫酸钠滴定液的毫升数，ml。根据上式计算出硫化钠溶液中含硫的准确浓度。3.3稀释根据上述测定结果，量取上述硫化钠溶液适量，用水精密稀释成每lml中含5吨的S，即得标准硫化钠溶液[lmol硫化钠（Na2S.9H20)质量为240.13g，含硫(S)32.06g,取Na2S.9H2〇约1.Og,于水中配成200ml的溶液，每lml含硫量约为0.66mg，根据测得硫化钠溶液的浓度，取一定量稀释后即可配成每lml含硫(SWyg的标准硫化钠溶液]。4操作方法4.1标准硫斑的制备精密量取标准硫化钠溶液lml，置A瓶中，加水10ml与稀盐酸10ml，迅即将装有醋酸铅试纸的导气管C密塞于A瓶上,摇匀。4.2供试品测试除另有规定外，取规定量的供试品，置另一A瓶中，加水10ml，与稀盐酸10ml,迅即将装有醋酸铅试纸的导气管C密塞于A瓶上，摇匀。4.3将标准硫斑的A瓶及供试品的A瓶同置80〜90°C水浴中加热lOmin,取出醋酸铅试纸，将供试品生成的硫斑与标准硫斑比较。5注意事项5.1如供试品为油状物，可将加水10ml改成加乙醇10ml，以增加其溶解度，使与稀盐酸的反应能迅速进行。5.2标准