搜索
2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容新增微生物限度检查法指导原则一、抑菌剂效力检查法指导原则二、药品微生物检验替代方法验证指导原则三、微生物限度检查法应用指导原则四、药品微生物实验室规范指导原则一：药品微生物实验室规范指导原则⒈目的该指导原则用于指导药品微生物检验实验室的质量控制。⒉药品微生物的检验的对象具特殊性；活的生物、分布不均匀、重现性差必须使用经验证的检测方法并严格按照药品微生物实验室规范要求进行试验影响试验结果的因素1人员2设施与环境3检验的标准与方法4设备5测量的溯源性抽样6样品的处理7检验结果准确性的控制8检验报告⒊药品微生物实验室规范包括以下几个方面人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、结果的判断等人的要求1：人是质量控制与管理的主体2：2010年版无菌检查法增加了对进行无菌检查人员的要求：必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。3;考试上岗问题;检验人员经过考试（理论与操作考试），经过技术负责人批准取得上岗证方可从事药品微生物学检验培训内容1上岗前指导性培训：生物安全操作知识和消毒知识，卫生要求，洁净区的使用，保洁与检测等。2上岗培训：各种有关微生物的操作技术（无菌，微生物限度，效价），与各种检验标准知识，设施，设备的使用3继续教育提高培训：新知识，新仪器新技术的使用，国际国内先进的微生物学检验专业知识。4质量观念的培训：实验室的质量目标，相关计量知识的学习⒉培养基培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。该指导原则对培养基的制备、储存、灭菌及质量控制进行了指导。培养基必须具备五个条件:1含有细菌生长所需的物质：如：水分、养分（氮源、碳源、矿物质）2适宜的酸碱性：多数为pH7.2-7.6，有的为pH5.6-6.8（最常用的溶剂为纯化水特殊情况下用去离子水或者蒸馏水）3不含抑制细菌生长的物质4均质透明：便于观察细菌生长性状和引起培养基的变化5严格灭菌，保证无菌。（按生产者提供或者使用者验证的参数灭菌）⒊菌种实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，⑴使尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。⑵按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。该指导原则对菌种的来源、菌种保藏、菌种的传代和使用、菌种的管理进行了详细的说明和指导。菌种代号的意义国内药品微生物检验所用的菌种代号是CMCC（F）或CMCC（B）CMCC——中国医学菌种保藏中心B——代表细菌,F——代表真菌。大肠杆菌[CMCC(B)44102]乙型副伤寒沙门杆菌[CMCC(B)50094]生孢梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌[CMCC(F)98001]２、菌种保藏的原则菌种保藏的原理微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。３、菌种的传代和使用⑴工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代防止过度的传代造成菌种变异,工作菌株不可代替标准菌株.⑵任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。标准菌株一般是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的，用符号S表示。一般可保存5年。按菌种保藏中心的要求进行恢复培养。中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)建议的方法如下：①安瓿管开封：用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰将安瓿管顶端加热，滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂，用锉刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。②菌株恢复培养：用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基（如营养肉汤），滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面/平板培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下（一般培养温度32.5℃±2.5℃，18～24h）培养。标准储备菌株⑴标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株.冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻或再次使用。采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，用于菌种的传代，。甘油冷冻管保藏法一般可保存2年；甘油冷冻管保存法甘油冷冻管保存法适用于保存传代用菌种，一般可保存2年。①将待保存用菌种接种至平板或琼脂斜面，经37℃24～48h培养后，用无菌接种环轻轻刮取菌苔，移至预先装有无菌蒸馏水的试管中，调整菌液浓度，使其等同于1单位麦氏比浊管。②向已制备好的菌悬液中加入等体积，浓度为20%的无菌甘油，得到10%甘油菌悬液。③轻轻振摇，使10%甘油菌悬液充分混合，分装于无菌小试管中，在-30℃条件下贮存。工作菌种：工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株保存于半固体内或琼脂斜面培养基中，作为工作用菌种，用符号W表示。一般可保存1～2个月。严格控制传代次数，工作菌种不超过五代，冻干菌种→营养肉汤→半固体琼脂或甘油水100支冰箱保存（原代）（一代）（二代）⒋菌种的管理严格的程序化管理实验室必须建立菌种保存和使用文件的程序管理制度菌种的销毁1方法：菌种销毁采用高压蒸汽灭菌：121℃，20分钟。2需及时销毁处理菌种：①发生污染或变异的菌种；②超过保存期限的菌种；③使用后的菌种。⒌实验室的布局和运行⑴实验室布局设计的基本原则①具有检测所需的适宜、充分的设施条件。②合理的布局与设计，具有独立的实验室、辅助区域各区域应有明确标识。③建立控制程序和标准操作规程。⒍建立合理的控制程序和标准操作规范⑴对进出洁净区域的人和物建立控制程序和标准操作规程。⑵消毒剂的配制应按标准操作规程配制，对所用的消毒剂种类应定期更换，使用的消毒剂应无菌。⑶建立检样品传递、储存、处置和识别管理程序。⑷建立带菌培养物溢出的意外事件制定处理规程。⑸建立合理的取样控制程序和标准操作规范。⒎设备实验室应配备与检验能力和工作量相适应的仪器设备，其类型、测量范围和准确度等级应满足检验所采用标准的要求，设备的安装和布局应便于操作，易于维护、清洁和校准。使用的消毒剂应无菌。建立相应的操作和维护和保养的标准操作规程。⒏文件文件应当充分表明试验是在实验室里按可控的检查法进行的，一般包括以下方面：质量管理文件、程序文件、技术操作文件。⒐实验记录的保存实验结果可靠性的依赖于试验严格按照标准操作规程进行，包括正确的试验操作、实验记录、(所有关键的实验细节)，以便确认数据的完整性。⒑结果的判断由于微生物试验的特殊性，在实验结果分析时，应从各个可能的方面去考虑，不但要假设被污染，而且要考虑微生物在原料、辅料或试验环境中存活的可能性。此外，还应考虑微生物生长特性。⑷如果依据分析调查结果发现试验有错误而判实验结果无效，那么这种情况必须记录。实验室也必须认可复试程序，如果需要，可按相关规定重新抽样，但抽样方法不能影响不符合规定结果的分析调查。微生物单位cfu(colony-formingunits):菌落形成单位