洁净区臭氧灭菌验证及方案

洁净区臭氧灭菌验证及方案一、简述臭氧有很高的能量，很不稳定，在常温，常压下，臭氧结构易变，很快自行分解为氧和单个氧原子。后者具有极强的氧化作用，臭氧的半衰期为22~25min。生成臭氧的原料主要是空气和电能。臭氧杀菌机制：（1）作用于细胞膜，导致细胞膜的通透性增加，细胞内物质外流，使细胞失去活动；（2）使细胞活动必需的酶失去活性；（3）破坏细胞内的遗传物质或使其失去功能。臭氧杀灭病毒是通过直接破坏核糖核酸或脱氧核酸完成的。而杀灭细菌、霉菌类微生物则是臭氧首先作用与细胞膜，使细胞膜的构成收到损伤，导致新陈代谢障碍并抑制其生长，臭氧继续渗透破坏膜内组织，直到死亡。不同洁净室可根据其体积，选用适当的臭氧发生器，将主机设置在HVAC系统的送、回风主管道中或净化空调箱的中效过滤器后端的合适位置，电源控制系统置于机房内。消毒时，关闭新风进口（或关闭约90%的新风进口阀门）和回风对外排放阀门，是整个被消毒的洁净室空气通过净化系统风道形成内循环状态。每天开机1~1.5h进行空气灭菌；替代化学药剂熏蒸消毒及设备表面灭菌需开机2~2.5h。10万级别的洁净区，臭氧投加浓度为10MG/M3。臭氧衰减率为0.375。按空间的大小投加量计算：臭氧发生器产量=体积*10/0.375按这计算出来的臭氧发生器产量，基本的能达到10万级别洁净区的洁净标准。二、目的制剂的生产过程主要在洁净区完成，洁净区用臭氧灭菌的效果直接影响到产品的质量，为确认臭氧灭菌的可靠性,用臭氧灭菌取代甲醛熏蒸灭菌，减少对员工身体健康的损害，特制订本验证方案进行验证。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行,若因特殊原因确需变更时,应填写验证方案变更申请及批准书,报验证小组批准。三、工艺原理图将臭氧气体引到送风主管道中，利用HVAC系统中净化风机产生的压力风源，扩散至所控制的整个洁净区域。四、验证计划(1)、洁净区空气消毒方法原理：1.1是采用臭氧发生器产生臭氧后，通过HVAC系统机组的正压送风段和送风管送入洁净区，再通过回风管回到机组，组成一个闭合的空气循环系统，控制消毒过程中的循环时间或密闭时间，从而使一定浓度的臭氧气体在规定的时间内，杀灭洁净区内的微生物。1.2为了保证消毒效果，应确保空气消毒时，HVAC系统运行或消毒剂气体循环时，外界新鲜空气不得进入HVAC系统内，以防止消毒剂气体浓度下降，达不到规定的消毒浓度。(2)、空气灭菌机理及特点：2.1臭氧灭菌机理及特点：2.1.1臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧和单个氧原子，后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，可氧化分解细菌内部氧化葡萄所必需的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为普遍氧分子，不存在任何有害残留物，故称无污染消毒剂；2.1.2臭氧是一种广谱杀菌剂，可杀灭细菌繁殖体和芽孢、病毒、真菌等，并可破坏肉毒杆菌毒素。但其具有腐蚀性，臭氧为强氧化剂,可损坏多种物品,浓度越高对物品损害越重，故在利用臭氧消毒时，应对洁净区内容易被氧化或加速老化的物品（如塑料、橡胶）、产品等进行防护。2.1.3臭氧熏蒸消毒时，相对湿度高则效果好，低则效果差，对干燥菌体几乎无杀菌作用。2.1.4空气中臭氧浓度达０.01-0.02mg/L时即可嗅知，浓度达到1mg/L时，可引起呼吸加速、变、胸闷等症状，在２.5-5mg/L时，可引起脉搏加速，疲倦、头痛，停留１小时可发生肺气肿，以至死亡，故臭氧消毒时，严禁洁净区内具有人员在操作。2.1.5臭氧稳定性极差，常温下即可自行分解为氧，臭氧发生器停止发生后，HVAC系统继续运行通风３０－６０分钟，使臭氧完全分解后，人员才可进入洁净区进行操作。2.1.6《消毒技术规范》中规定，对空气中浮游菌，臭氧灭菌浓度为2-4PPM，对物体表面的沉降菌，臭氧的灭菌浓度为10-15PPM，臭氧1H的的衰退率约为62.25%。应根据等消毒的空间体积（V）、要求杀灭微生物的浓度（C）和臭氧1H的的衰退率确定臭氧发生器的发生量。公式为：W（臭氧发生量）=（CV）/（1-62.25%）mg/h。(3)、消毒频率：3.110万级洁净区内的空气消毒，必须在下列情况下进行:3.1.1每天消毒：洁净室和HVAC系统日常消毒只采用臭氧消毒进行，目的是消灭空气中的浮游菌；3.1.2每月定期消毒：洁净室和HVAC系统每月消毒采用甲醛和臭氧交替使用，防止产生耐药菌株，目的是消灭环境中浮游菌和沉降菌；3.1.3环境监控：当洁净区内环境微生物检测结果超标时，按每月定期消毒执行；3.1.4停产：洁净区内停产一周以上，生产前按每月定期消毒一次。（4）、消毒设备及消毒剂：4.1酒精灯，36%的甲醛溶液；4.2臭氧发生器、臭氧；（5）、消毒方法：5.1消毒前准备工作：5.1.1洁净室内应进行了全面的卫生清洁工作，包括厂房、设备、容器、清洁工具等；5.1.2洁净室内应无中间体、半成品、原辅料的暴露存放及无操作人员；5.1.3用洁净抹布醮纯化水擦拭设备、墙壁的外表面，用洁净拖把醮饮用水擦抹地面，保持洁净区湿润；5.1.4关闭车间内所有强排风口，打开洁净区内传递窗内侧门；5.1.5关闭HVAC系统的新风口阀和全开总回风阀门。5.1.6臭氧和甲醛消毒前的准备工作相同，但利用甲醛时，应对与产品直接接触的设备、容器等内表面进行防护，以防止甲醛集合附着在其表面，而臭氧可不必考虑。5.2臭氧消毒方法：5.2.1HVAC系统正常运行后,接通臭氧发生器电源，电源指示灯亮，电压表显示电压为220V；5.3.1将臭氧发生器按纽旋至“手动”位时,启动臭氧发生器(A、B)消毒按纽，电流表显示工作电流3.6A，同时指示灯亮，臭氧发生器开始工作，记录开始消毒时间；5.3.2消毒时间：臭氧每天消毒时间为1－1.5小时（消灭空气中的浮游菌），每月定期消毒时间为2－2.5小时（消灭环境中浮游菌和沉降菌）。5.3.3日常消毒或每月定期消毒在规定消毒时间结束后，关闭臭氧发生器启动按纽，关闭总电源，臭氧发生器停止工作。5.3.4臭氧消毒结束后，洁净区内需人员进行操作时，HVAC系统应继续运行30min,再打开工艺排风机和新风阀补充新风，机组继续运行30min后，使洁净区内臭氧完全分解后，人员方可进入洁净区。5.3.5臭氧消毒结束后，洁净区内如不需人员进行操作（如当天生产结束后消毒），可直接关闭HVAC系统风机，第二天HVAC系统运行达到自净时间（40min）后，人员可直接进入洁净区操作。五、验证方案5.1日常臭氧灭菌5.1.1灭菌周期：3天。5.1.2灭菌时间5.1.2.11小时5.1.2.21.5小时5.1.2.32小时5.1.3灭菌后检测(每个时间连续做三个周期的检测)5.1.3.1检查指标5.1.3.1.1检测沉降菌5.1.3.1.2生物指示剂进行细菌挑战性试验，生物指示剂菌种选用枯草芽孢杆菌，在使用测定前要测定其初期菌数，应不少于10个。在消毒灭菌前，将装有生物指示剂表面皿置于被测房间内的中央地面，灭菌前打开表皿，灭菌结束后，回收生物指示剂放入硫乙醇酸盐液体培养基中，在37℃下培养3天。5.1.3.2认可标准:5.1.3.2.1沉降菌：100级，沉降菌≤1个/皿、1万级，沉降菌≤3个/皿、10万级，沉降菌≤10个/皿5.1.3.2.2生物指示剂：应无菌生长5.1.4沉降菌、生物指示剂检测记录见验证实施报告5.2大消毒5.2.1灭菌周期：半个月。5.2.2灭菌时间5.2.2.12小时5.2.2.22.5小时5.2.2.33小时5.2.3灭菌后检测(每个时间连续做三个周期的检测)5.2.3.1检查指标5.2.3.1.1检测沉降菌5.2.3.1.2生物指示剂进行细菌挑战性试验生物指示剂菌种选用枯草芽孢杆菌，在使用测定前要测定其初期菌数，应不少于10个。在消毒灭菌前，将装有生物指示剂表面皿置于被测房间内的中央地面，灭菌前打开表皿，灭菌结束后，回收生物指示剂放入硫乙醇酸盐液体培养基中，在37℃下培养3天5.2.3.2认可标准:5.2.3.2.1沉降菌：100级，沉降菌≤1个/皿、1万级，沉降菌≤3个/皿、10万级，沉降菌≤10个/皿5.2.3.2.2生物指示剂：应无菌生长5.2.4沉降菌、生物指示剂检测记录见验证实施报告5.3拟订再验证方案周期：当灭菌时间、灭菌设备发生变化，或是沉降菌定期监控的数据有负面趋势的情况下，应按照前期验证采用的方法对臭氧灭菌进行再验证，或根据实际情况修补验证方案后进行再验证，以确认灭菌效果。5.4验证结果总评定：5.4.1质保部负责收集各项验证，试验结果报验证小组。验证小组负责对验证结果进行评审，做出验证结论，发放证书，并对验证结果进行评审填入“验证结果完整性总评价记录表”,其内容包括：5.4.1.1验证结果是否有遗漏?5.4.1.2验证实施过程中对验证方案有无修改,修改原因、依据、是否经过批准？5.4.1.3验证记录是否完整？5.4.1.4试验验证结果是否符合标准要求?偏差及对偏差的说明是否合理?是否需要进一步补充试验?5.4.1.5偏差及对偏差的说明是否合理?是否需要进一步补充试验?5.4.2验证结果总评价与会签:5.4.2.1总评价：5.4.2.2会签6验证方案评价及最终批准：6.1验证方案评价：6.2验证方案最终批准：六、验证原始记录沉降菌检测记录（日常灭菌）灭菌日期灭菌时间沉降菌检测日期检测人-本文出自药圈，原文地址：