α-香附酮在大鼠体内的药动学研究

312中国医药生物技术2009年8月第4卷第4期ChinMedBiotechnol,August2009,Vol.4,No.4DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.04.018·技术与方法·α-香附酮在大鼠体内的药动学研究郭楠，孟繁娜本实验所用香附油为莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根茎经超临界CO2萃取后得到的提取物。提取物中总香附酮以α-香附酮（C15H22O2）计，不少于50%。香附提取物具有解热镇痛、强心或减慢心率、促进胆汁分泌、保肝、抗菌消炎、抗肿瘤、雌激素样作用[1]（结构式见图1）。图1α-香附酮的化学结构式目前，国内外对香附中有效成分药动学研究尚无文献报道，为了进一步探明其体内过程，作者对其有效成分α-香附酮药物动力学进行研究。1材料与方法1.1主要材料1.1.1仪器JascoPU-2080高效液相色谱仪，JascoUV-2075型紫外可见光光度检测器，Anastar色谱工作站；YKH-II型涡旋混合器（江西医疗器械厂）；80-2型离心沉淀机（上海手术器械厂）；Df-101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市英峪予华仪器厂）；DS－1高速组织捣碎机（上海标本模型厂）；NS1001L高压均质机（ViaM.daErba,PARMA，Italy）。1.1.2药品与试剂α-香附酮对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0748-9703），香附二氧化碳超临界流体萃取物（简称香附油）（自制），香附油乳剂注射剂（本实验室自制，内含α-香附酮1.5mg/ml），香附油β-CD包合物灌胃剂（本实验室自制，内含α-香附酮7.5mg/ml）；注射用Tween-80（上海申宇医药化工有限公司）；注射用甘油（浙江遂昌甘油厂）；乙腈（天津市康科德科技有限公司，色谱纯），甲醇（天津市康科德科技有限公司，色谱纯）。1.1.3动物Wistar大鼠，雌雄兼用，体重为250~300g，沈阳药科大学实验动物中心提供。合格证号：SCSK辽2003-008。1.2方法1.2.1香附油乳剂注射剂的制备精密称取2.5g甘油，0.3g吐温80，分散于适量注射用水中，至磁力搅拌器中80℃搅拌至全部溶解。精密称取10g香附油加入至上述水相中，置于高速组织捣碎机中14000rmp搅拌3次，每次3min。注射用水稀释定容至100ml，加入至高压均质机中，均质若干次。装瓶，充氮气密封，灭菌，即得。1.2.2香附油包合物灌胃剂的制备精密称取香附油适量，加入等量乙醇搅拌至全部溶解。精密称取等量的β-CD，加入等量水，乳钵研磨直至均匀。将上述香附油乙醇溶液，逐次滴入β-CD水溶液中，研磨至均匀，即得。1.2.3血浆样品的预处理精密量取大鼠血浆样品0.1ml置1.5ml具塞试管中，加入乙腈0.2ml，涡旋（84r/min）5min，离心1735×g10min，吸取上清液20µlHPLC法测定。1.2.4体内分析方法的建立色谱条件：色谱柱为PhenomenexC18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相为乙腈－水（68/32，V/V）；流速为1.0ml/min；紫外检测波长为248nm；柱温为25℃；灵敏度0.0005AUFS[2]。1.2.5α-香附酮对照品储备溶液的制备精密称取α-香附酮适量，加入甲醇配制成浓度为358.24μg/ml的储备溶液，备用。分别取空白血浆、加入一定浓度对照溶液的空白血浆及受试大鼠服药后采集的血浆，按血浆样品的预处理方法进行处理、进样，结果见图2。结果表明，空白血浆中的内源性物质对样品测定无干扰。ABCA：空白血浆；B：加样血浆；C：样品血浆；1：α-香附酮图2α-香附酮血药浓度HPLC图作者单位：110141沈阳，安斯泰来制药（中国）有限公司生产技术部（郭楠）；110179沈阳红旗制药有限公司研发部（孟繁娜）通讯作者：孟繁娜，Email：[e-mail]收稿日期：2009-04-29中国医药生物技术2009年8月第4卷第4期ChinMedBiotechnol,August2009,Vol.4,No.4313将不同浓度α-香附酮标准溶液加入血浆中，按血浆预处理方法进行处理、进样，计算出最低检测血药浓度为4.6ng/ml。1.2.6标准曲线绘制精密量取0.1ml空白血浆，分别加入不同浓度的标准溶液，制成14.91、29.82、89.56、179.12、358.24、745.60、1491.20、2982.40、3582.40ng/ml等一系列浓度的标准血样，按血浆预处理方法进行处理、进样，以测得的峰面积对浓度作线性回归，标准曲线为y=9.273125572+2.878703222x（r=0.9990）。高、中、低3个质量浓度（2982.40、358.24、29.82ng/ml）的日内精密度分别为1.83%、2.44%、3.58%；日间精密度分别为2.57%、3.49%、4.26%；提取回收率均分别为93.68%、91.71%、90.57%。1.2.7给药方案及样品采集灌胃给药：受试大鼠6只禁食12h后，灌胃给药香附油β-CD包合物（以α-香附酮计60mg/kg）。于给药前和给药后0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、16、24h分别取眼眶静脉丛血0.5ml，置肝素化试管中，离心1735×g10min，吸取上层血浆，–20℃保存待测；静注给药：受试大鼠6只禁食12h后，静注给药香附油乳剂注射剂（以α-香附酮12mg/kg）。于给药前和给药后0.083、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12h分别取眼眶静脉丛血0.5ml，置肝素化试管中，离心1735×g10min，吸取上层血浆，–20℃保存待测。1.3药物动力学参数计算方法及统计学分析方法根据所获得的血药浓度-时间数据，用实用药代动力学计算程序3P87进行处理，拟合血药浓度-时间曲线模型，并采用统计矩计算出各项药代动力学参数。2结果2.1药时曲线香附油经ig，iv后，α-香附酮大鼠血药浓度-时间数据经3P87拟合，动力学行均符合二隔室模型，平均血药浓度-时间曲线见图3。血药浓度对数值（ng/ml）1000010001000510152025时间（h）图3ig，iv给药后α-香附酮在大鼠体内的平均血药浓度-时间曲线2.2药动参数α-香附酮经ig，iv后，大鼠血药浓度-时间数据经统计矩计算其主要药代动力学参数见表1。表1大鼠ig和iv给药后α-香附酮的药动参数（n=6）组别药动学参数单位igivKeh-10.070±0.0230.37±0.14T1/2h10.70±3.352.13±0.96AUC0-t0-tng·ml-1·h-11226.84±346.822634.99±571.25AUMCng·ml-1·h224172.07±10446.162276.88±660.36Cl（S）L·h-113.20±4.270.0050±0.0013MRTh22.98±17.560.88±0.23VssL406.24±359.100.0044±0.00183讨论用乙醚提取法和沉淀蛋白法进行血浆样品处理后的结果表明，乙醚提取法处理的样品杂质较多，不易与主成份分离；沉淀蛋白法处理的样品杂质量少，分离效果较好。ig、iv给药后健康大鼠出现精神萎靡，活动迟缓，2~3h后逐渐恢复正常状态（iv给药后此现象更为明显）。iv给药过程中速度过快则大鼠给药后快速死亡。据相关文献报道[1]，香附总生物碱、苷类、黄酮类和酚类化合物的水溶液亦有强心和减慢心率作用，并且有明显的降压作用。提示α-香附酮在静脉给药时应采用缓慢的静注或滴注，以实现安全给药。测得的ig给药的平均药时曲线有3个吸收峰，达峰时间分别为0.25h、2h和12h。分析出现多峰的原因可能是：①据有关文献报道[3-4]，α-香附酮具有特异性的作用于电压敏感钙通道（VoltagesensitiveCachannel）的硝苯吡啶样的钙离子拮抗作用。据此推测由于大鼠蠕动速率的降低，使得灌胃剂在肠道运行时间延长，吸收不规则而出现多峰；②据有关文献报道[5]，香附对正常大鼠有明显的利胆作用，可促使胆汁分泌，提高胆汁流量，增加胆汁中固体物浓度。推断胆汁增多可能促进α-香附酮在胃肠道再吸收而出现多峰。参考文献[1]HuangXF,PengGP.Researchdevelopmentchemicalofcompositionandpharmacologicaleffectsofcyperusrounds.JChinMedMater,2003,26(1):65-68.(inChinese)黄险峰,彭国平.香附的化学成分及药理研究进展.中药材,2003,26(1):65-68.[2]LiangCQ,LuoYS,ZhongZJ,etal.Determinationofα-CyperoneinRhizomaCyperiOilbyHPLC.JChinMedMater,2004,27(8):578-579.(inChinese)梁从庆,罗源生,钟兆健,等.高效液相色谱法测定香附油中α-香附酮的含量.中药材,2004,27(8):578-579.[3]LiuGQ,WangQJ,XieZQ.Pharmacologicaleffectsofvolatileoilofcyperusrounds.JChinaPharmUniv,1989,20(1):48-50.(inChinese)刘国卿,王秋娟,谢卓丘.香附挥发油药理研究.中国药科大学学报,1989,20(1):48-50.[4]AokiShunji.Theeffectofα-cyperoneinRhizomaCyperionsmoothmuscleofintestinaltract.OverseasMedicineTraditionalChineseMedicineandChineseMedicineVolum,1992,14(6):48.(inChinese)青木俊二.香附所含成分α-香附酮对肠道平滑肌的作用.国外医314中国医药生物技术2009年8月第4卷第4期ChinMedBiotechnol,August2009,Vol.4,No.4学中医中药分册,1992,14(6):48.[5]SuiYH,ZhaoJQ,CuiSK,etal.Comparasiontheeffectwhichinfluencesecretingbileofmiceamongcyperusround,CitrustangerinaTanaka,RosaroxburghiiTratt.f.normalisRehdetWils,ArtemisiacapillarisandSwertiapseudochinensis.HenanTraditionalChinMed,1993,13(1):19-20,44.(inChinese)隋艳华,赵加泉,崔世奎,等.香附,青皮,刺梨,茵陈,西南獐牙菜对大鼠胆法分泌作用的比较.河南中医,1993,13(1):19-20,44.·学术活动预告·第四次全国中毒与危重症救治学术会议征文通知为了提高我国中毒与急危重症的救治水平，认真总结交流近年来这方面基础和临床的经验和学术研究成果，经中国毒理学会批准，中国毒理学会中毒与救治专业委员会“第四次全国中毒与危重症救治学术会议”定于2010年3月在广东省深圳市召开，届时将邀请我国中毒与危重症救治方面的专家作专题报告，同时聘请相关学科专家到会作精彩专题报告。1．征文内容：（1）各种（农药、药物、重金属、有害气体等）中毒救治的基础和临床研究；（2）多脏器功能不全、心衰、肝、肾、呼吸衰竭救治；（3）人工气道管理与呼吸机的应用；（4）危重病的各种监测技术和经验交流；（5）急危重病救治的新技术、新药物及新方法；（6）中毒与危重症救治中的组织管理及体会；（7）中毒与危重症的院前急救、现场救治及转运；（8）中毒性疾病的检测与监控；（9）中毒、急危重病救治护理经验介绍；（10）血液净化在中毒及危重症