玉米须中黄酮的提取 、鉴别与含量测定

吉林化工学院综合与设计性化学实验综合与设计性化学实验综合与设计性化学实验综合与设计性化学实验实验类型：设计实验题目：玉米须中黄酮的提取、鉴别与含量测定班级：化工0801学号：08110119姓名：张迪实验日期：2010.12.1实验题目：玉米须中黄酮的提取、鉴别与含量测定一、前言：玉米须Zeamays.L为禾本科玉蜀黍属植物玉米的花柱和柱头，含有多种化学成分，如挥发油、皂苷、生物碱、黄酮类、多聚戊糖、尿囊素、有机酸等。其味淡、性平，有利尿、泄热、平肝、利胆之功效，可用于治疗肾炎、胆结石、糖尿病、黄疸、麻疹、乳糜血尿、血崩等症［1］。现代药理研究证明玉米有显着的利尿、降血糖、抑菌、降压、增强免疫、抗癌等功效。玉米须是我国传统的中药材，全国各地均广泛栽培玉米，因此，作为玉米副产品的玉米须的资源十分丰富，但对它的开发利用非常有限，仅少量入药外，大部分被白白丢弃，鉴于玉米须既有明显的药理价值，又具备一定的食疗特征，进行工业化开发利用前景相当广阔［2］。黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其他脏器细胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。黄酮类化合物具有抗癌抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化抗衰老、抗辐射等作用［3~5］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广泛的药理作用引人瞩目，本文实验结果表明，玉米须中含有较为丰富的黄酮。因此，玉米须值得综合利用加强资源开发。二、实验目的通过对玉米须中黄酮分步提取、鉴别和含量测定，掌握天然产物的提取、鉴别和含量测定的方法。三、实验原理黄酮类化合物多为结晶性固体，少数(如黄酮苷类)为无定形粉末。黄酮类化合物多为黄色，其颜色的深浅与其是否具有交叉共扼体系、助色团的多少有关，一般具有交叉共轭体系的黄酮类化合物(如黄酮、黄酮醇、查耳酮)多呈黄色或颜色较深，而不含有交叉共轭体系的黄酮类化合物(如二氢黄酮、二氢查耳酮、异黄酮)多为无色或颜色较浅。黄酮类化合物在紫外光下一般具有荧光，荧光的颜色与分子的结构有关。黄酮类化合物的溶解度因其结构及存在的状态(苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同而有很大的差异。一般的游离黄酮苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈等有机溶剂及稀碱中。黄酮类化合物糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于热水、甲醇、乙醇及稀碱溶液，而难溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等亲脂性有机溶剂。游离黄酮和黄酮苷一般都含酚羟基，故都可溶于碱中，加酸后又沉淀出来，可利用此性质提取、分离黄酮类化合物。玉米须中含黄酮类物质，能清除羟基和DPPH自由基，有调节小鼠脂质代谢、抗衰老和抗疲劳作用。研究结果表明低浓度的玉米须提取物也有很好的抗氧化能力。四、试剂与仪器1.仪器圆底烧瓶、冷凝管烧杯2只，10mL、50mL量筒各1个，滤布，滴管，玻璃棒，减压装置一套，紫外分光光度计，容量瓶。2.试剂玉米须10.0g（干燥至恒重，过40目筛，精密称取）乙醇、蒸馏水、浓盐酸、三氯化铝、锌粉五、实验方法与步骤1g玉米须放入150ml的圆底烧瓶中，以30倍水量、恒温水浴锅加热至90℃，开始计时，反应1h，离心3min（3500转/min），上清液抽滤，1.提取：黄酮苷取玉米须柱头1.0g放入圆底烧瓶中，以1∶20为料液比，用60%乙醇于80℃水浴内提取1h；倒出，加入10mL溶剂提取30min，共提取2次，合并两次提取液过滤后，置50mL容量瓶中定容。2.鉴别：盐酸一镁（或锌）粉试验取检品的乙醇溶液1ml，加放少量镁粉（或锌粉），然后加浓盐酸4－5滴，置沸水浴中加热2－3分钟，如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙（以同法不加镁或粉做一对照，如两管都显红色则有花色素存在。如继续加碳酸试液使成碱笥即变成紫色双转变为蓝色，即证明含花色素）。黄酮类的乙醇溶液，在盐酸存在的情况下，能被镁粉还原，生成花色甙元而呈现红色或紫色反应（个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色）。这是由于酮类化合物分子中含有一个碱性氧原子，致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即锌盐。本法是鉴别黄酮类的一个反应。但花色素本身在酸性下（不需加镁粉）呈红色，应加以区别。3.含量测定：黄酮含量测定1g玉米须40mL乙醇，提取出来的提取液浓缩至接近50mL（小于50mL），然后用60%乙醇定容至50mL，摇匀，过滤，精密移取续滤液4mL于10mL容量瓶中，精密加入0.1mol/L三氯化铝甲醇显色剂溶液4ml，摇匀，定容，放置10分钟。以60%乙醇为空白，测定吸光度，代入上述回归方程中，计算出百分含量。Y=29.302X+0.0213相关系数：r=0.9999。黄酮在4ug-20ug/mL范围内,吸收度和糖含量呈良好的线性关系。六、实验数据处理实验数据：在272nm以60%乙醇为空白测得吸光度Y=1.251根据回归方程Y=29.302X+0.0213将Y=1.251带入公式可得X=0.0419664186744932mg/ml∵玉米须中的黄酮经过抽滤后加入60%乙醇定容于50ml容量瓶，后抽取1ml定容于10ml容量瓶里∴50*10*Xm==20.9832093372466mg%10.2%100*10372466/10020.9832093%100*mm≈==玉米须黄酮质量分数七、实验结果与讨论：1、实验结果：鉴别：盐酸一锌粉试验法含黄酮类物质的试管中显现红色，以乙醇作对照试管不呈现红色，有明显对比；含量测定：本次实验，黄酮类物质在玉米须中百分含量约为2.01%2、试剂的误差分析（1）在抽滤过程中有部分黄酮类物质残留在玉米须滤渣中；（2）在过滤时有部分黄酮类物质残留在滤纸及漏斗壁上；（3）转移溶液时，由于有溶液残留造成误差；（4）用玻璃棒搅拌溶液，使溶液溅出，产生误差；八、参考文献［1］任顺成，丁霄霖.玉米须黄酮类测定方法的研究［J］.食品，2004，24［2］唐传核.植物功能性的食品［M］.北京：化学出版社，2004［3］李冬菊.山楂叶总黄酮的提取及鉴别［J］.辽宁中医杂志，2003，30［4］华光军，郭勇.黄酮类化合物药理研究进展［J］.广东药学，1999，9［5］姜国芳，谢宗波，乐长高.银杏叶黄酮类化合物的研究进展［J］.时珍国医国药，2004，15十一、评语和成绩成绩：指导教师：