薄层色谱基础知识及斑点异常

1薄层色谱基础知识Zhuhaikangabc及斑点异常的原因和克服2薄层色谱操作的流程结果判定显色展开点样薄层板3薄层板的制备什么是固定相？固定相4薄层板的制备常用固定相1、聚酰胺2、硅胶3、硅澡土4、氧化铝5、纤维素6、其他5薄层板的制备聚酰胺1、什么是聚酰胺？2、聚酰胺适合那些化合物的分离？适用于多元酚类化合物分离，如黄酮，醌类，酚酸，含羰基的化合物等6薄层板的制备硅胶1、什么是硅胶2、硅胶适合酸性和碱性等化合物的分离7薄层板的制备硅胶硅胶G硅胶H/硅胶N硅胶GF245硅胶HF2543、实验室硅胶有哪些型号硅胶S8硅胶G和硅胶S薄层板的制备1.硅胶G是指硅胶粉+15%煅石膏。2.硅胶S是指硅胶粉+15%淀粉。9硅胶H或硅胶N薄层板的制备是指纯硅胶粉，没有添加任何粘合剂10硅胶H和硅胶G的应用薄层板的制备1物质是有色的，在日光看2物质没有颜色但可以利用显色剂显色3.可以荧光显色11硅胶HF254和硅胶GF254薄层板的制备1.是指添加了荧光剂，如硫化镉等。2.应用范围：物质有荧光，在254波长紫外下看其荧光；物质没荧光，在254波长紫外下看暗斑（荧光淬灭）12薄层板的制备无黏合剂自制板含黏合剂13薄层板的制备黏合剂cmc-na溶液的配制先将称好的CMC-Na加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.14薄层板的制备黏合剂cmc-na溶液的浓度溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，实际操作中0.4％～0.5％最为实用，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，不好保存15薄层板的制备黏合剂cmc-na溶液的存放注意放置时间太长的CMC-Na溶液可能会发黄，而且可能有霉菌出现，最好不要使用。16薄层板的制备操作：除另有规定外，是指将1份固定相和3份水溶液，研磨混合，置玻璃板上使涂布均匀，平台上于室温下晾干，活化后，置有干燥器中备用。制板17注意点1.沿同一方向研磨混合，避免产生气泡2.厚度为0.2－0.3mm，涂层薄，点样容易过载；涂层厚，显色不那么明显3.室温下在水平位置放置，待薄层发白近干薄层板的制备18注意点5.研磨时间6.铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。薄层板的制备19活化2.在105－110度活化30分钟。3.一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。薄层板的制备1.薄层板为何要进行“活化”？20薄层色谱的点样点样器21薄层色谱的点样洁净、干燥点样环境22薄层色谱的点样点样的形状1、圆点2、条带状23薄层色谱的点样点样的距离10－15mm8－10mm5mm直径不大于2mm宽度4－8mm8mm直径不大于4mm宽度5－10mm自制板高效板24薄层色谱的点样点样的注意点1.不要弄破薄层板2.点样量大时，少量多次，3.点好样的薄层板用电吹风吹干或放入干燥器里晾干25薄层色谱的展开展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封26薄层色谱的展开展开剂配制2.混合展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用1.把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。最好不要把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。27薄层色谱的展开预饱和、预平衡展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持15－30分钟28薄层色谱的展开展开距离展开至规定距离（一般为8～15cm）29薄层色谱的显色显色与检视1.供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。2.有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。3.对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱301、拖尾现象2、边缘效应3、S形及波形斑点4、念珠状斑点5、斑点与对照品对不上薄层色谱中斑点的异常异常现象6、其它31拖尾原因斑点异常1.点样量过载2.点样圆点未重合3.展开剂4.薄层析5.其他32拖尾斑点异常与克服1.点样量过载任何吸附剂，它们的负载化合物的能力是有一定限度的，因此点样过量而超载后，过剩的化合物被抛在后面，形成拖尾现象克服方法：A.点样时可以点成条带状B.选用稍厚一点的板33拖尾斑点异常与克服2.点样圆心未重合样点虽然在同一垂直线上但样点上下圆心没有重合，致使样点呈近椭圆形，也是形成拖现象的原因之一克服方法：点样位置要准确，预先设计好点样的位置，然后用铅笔作好标记，每次点样对准圆点34拖尾斑点异常与克服3.展开剂的配制35拖尾斑点异常与克服4.薄层板为了提高样品的分离度和减少斑点的拖尾，铺板时在硅胶中加入某些酸（如硼酸，草酸），碱（如氢氧化钠），盐（如磷酸二氢钠，磷酸氢二钠）等将硅胶板改性克服方法：硅胶预制板可用浸板的办法改性36边缘效应2、薄层板3、展开剂未预饱和斑点异常1、点样边距4、其他37边缘效应斑点异常与克服1.点样边距38边缘效应斑点异常与克服2.薄层板薄层板厚薄不均匀，两边厚或者两边薄都是形成边边缘效应的原因之一克服方法：选用符合要求的薄层板。（符合要求的薄层板应该在反射光下板面平滑均匀，无气泡，灰尘或颗粒，透射光下薄层纹理均匀细腻）39边缘效应斑点异常与克服3.预饱和在薄层板上一般是边缘上的展开剂较容易挥发,如果这几个有机溶剂的挥发性能差异比较大,那么就会造成薄层板上边缘和中间展开剂比例的差异而产生展开速度不一致的现象克服方法：展开前要充分饱和40波形斑点S形斑点斑点异常S形及波形斑点41S形斑点斑点异常S形斑点是指含多咱成分的样品层析时，其斑点不是顺次分布于原点至展开前沿的垂直线上，而是呈S形分布于垂直线两侧。42波形斑点斑点异常波形斑点：是指某些含多种成分的样品液，顺次点于同一起始线上，展开后，这些成分相同的斑点不吃不开直线状平行于起始线，而是呈波浪形。43S形及波形斑点斑点异常2.为避免上述现象的出现，应选用厚薄均匀的薄层板1.产生原因：多数是因为薄层板厚薄不匀。44念珠状斑点斑点异常念珠状斑点是指化合物斑点之间距离小，相互连接呈念珠状45念珠状斑点异常与克服产生原因及克服方法1.样品中成分过多，在下定长度的薄层板上，排布不开，彼此重叠。可适当增加层析板长度，使斑点距离加大或采用双向层析，使所含成分向两个方向展开可以避免念珠状斑点的出现。2.多次点样时，点样中心不重合，形成复斑。应以适当浓度供试液一次点样，若多次点样，点样中心必须重合。46Rf值不稳定斑点异常1.温度2.湿度3.手工制板4.溶剂质量47Rf值不稳定斑点异常与克服1.温度温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。48Rf值不稳定斑点异常与克服2.湿度49Rf值不稳定斑点异常与克服2.湿度湿度的影响，主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸50Rf值不稳定斑点异常与克服湿度的控制51Rf值不稳定斑点异常与克服手工制板由于手工制的板的技巧不同，所制备的薄层板的质量不同造成重现性差52样品斑点与对照品斑点不在水平线上斑点异常1.点样时间的差异，导致各点之间所含水分不一所引起的2.也可能是由于点样操作不当，如使用吹风机加热，导致样品变为固态后被强烈地吸附在吸附剂的颗粒上，造成样品部分在原点滞留或形成拖尾3.样品中含多种成分，相互影响吸附及洗脱过程。4.各斑点浓度差异造成。（可通过实验，点上一系列浓度的点以排除原因53谢谢！