革兰氏染色的过程

细菌的革兰氏染色目的要求1.学习并掌握革兰氏染色法。2.了解革兰氏染色原理。3.巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。实验材料菌种参考菌：金黄色葡萄球菌(G+),大肠杆菌(G-)仪器显微镜材料载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等染料草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红染色液A.加小滴水B.涂成薄层C.固定菌体涂片制备过程革兰氏染色的过程——制片制片初染媒染脱色复染镜检主要操作步骤细水冲洗结晶紫初染1-2min碘液媒染1min95%酒精脱色20s-30s蕃红复染2-3min细水冲洗细水冲洗•染色示范革兰氏染色的基本原理根据细菌细胞壁的组分和结构不同，通过革兰氏染色法可将所有的细菌区分为两大类G+和G-革兰氏染色是丹麦医生C.Gram（革兰）于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法细胞壁革兰氏阳性菌(G+)革兰氏阴性菌(G-)厚度与强度厚、致密、坚韧薄、疏松肽聚糖数量、含量多层、含量高、占细胞干重40—90%单层、含量低、占细胞干重5—10%脂类含量少、占细胞干重1-4%多、占细胞干重11-22%磷壁酸（垣酸）+-脂多糖、磷脂、脂蛋白-+肽聚糖脂蛋白磷壁酸外膜•革兰氏染色原理.mp4革兰氏染色成败关键：酒精脱色，脱色不够将G-转变为G+，脱色过度将G+变成G-；涂片要均匀、薄；菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。•革兰氏染色.mp4革兰氏染色注意载玻片要洁净，滴无菌水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不宜过厚；热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态；水洗时不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，过大，以免涂片薄层脱落。革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌。注意事项实验报告1．绘图说明染色结果。实验报告2．思考题：你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色出现什么问题？