氟喹诺酮类药物的分析

氟喹诺酮类药物的分析药学院药物分析教研室【大纲要求】1、掌握氟喹诺酮类代表药物的体内过程2、熟悉氟喹诺酮类代表的体内分析方法NorfloxacinLomefloxacinNOCOOHCH3FNHNFCH3NOCOOHCH3FNHNNOCOOHFNHNCiprofloxacinNOCOOHFNNOCH3H3COfloxacin主要代表药物理化性质◆◆酸碱两性易氧化性◆紫外吸收特性◆氟的特征反应体内过程◆口腹容易吸收，半衰期较短，达峰时间较快◆在体内容易发生Ⅱ相代谢，与UDPGE结合◆体内分布广泛，血清蛋白结合率低，可进入各种组织主要的分析方法紫外分光光光度法电化学分析荧光分析高效液相色谱分析核磁共振技术液相色谱与质谱联用高效毛细管电泳△A法测定尿中的诺氟沙星基本原理：利用NFLX在酸碱中的紫外吸收差值，其中以碱性情况下的尿液维样品测定液，以酸性情况下的尿液为参比，在285nm处测定不同条件下的吸收度差值，进而计算含量的一种方法。△A=0.0447C+0.0808(r=0.9971)Recovery=97.6%,RSD=4.7%电化学分析库仑滴定法电导滴定法电位滴定法永停滴定法利用化合物中的特殊基团，在一定条件下产生具有还原性的峰电位，峰高与样品浓度成比例关系。荧光分析NOCOOHCH3FNHNExcitingwavelength:276nmEmissionwavelength:447nmC=0.06125F-0.007793(r=0.9998)Recovery=98.79%RSD=1.37%高效液相色谱分析◆◆◆◆该类化合物具有容易解离的-COOH和N，故此需要例子对试剂作为流动相。RP-IP-HPLC该类化合物具有较好的UV和荧光吸收特性，可以采用UV和FD。由于生物样本较为复杂，故往往需要一定的前处理手段。可以采用更灵敏的MS作为检测器。HPLC法同时测定血浆中的4种氟喹诺酮类化合物Column:HypersilC18(100×2mm,I.D.,5μm)流动相：CH3CN－磷酸盐缓冲液（10mmol/lNaH2PO4、10mmol/lSDS、5mmol/l溴化四丁基铵，pH=2.0）＝2575流速：0.5ml/minFD:280/418nm血浆样品HClO4加入内标10000rpm上清液进样ChromatogramPeakareaandretentiontimeISENXAFLXNFLX测定结果与方法学RSD≤8.0%日内和日间Linearrange:0.1~5μg/ml、0.025~1μg/ml、0.025~5μg/mlLOQ:100ng/ml、10ng/ml、20ng/ml环丙沙星及其代谢物的HPLC分析检测Chromatographicconditions:SpheriODS(250×4.6mm,I.D.,5μm)Guardcolumn:BondapakC18Mobile-phase:0.1mol/lKH2PO4-CH3CNGradientelutionmodeTimeAB0~20min20~25min70%~50%50%~70%30%~50%50%~30%血浆样品CH3CN加入内标10000rpm上清液ChromatogramPeakareaandretentiontimeLLE10000rpmOfloxacin光学异构体的拆分色谱条件：ShimadzuODS(150×6.3mm,I.D.,10μm)流动相：甲醇－CMPA(14:86)流速：1.0ml/min检测器：荧光检测330/505nmCMPA的制备L－苯丙氨酸0.66g无水硫酸铜0.32g溶于500ml去离子水用硫酸调节pH=3.5取尿样1ml，加氧氟沙星和内标各4μg，混匀后过滤，取滤液20μl进样分析方法学考察：回收率（RecoveryS）＝99.9％、RecoveryR=101.6%线性范围：0.6～500μg/ml、LOQ=0.6μg/ml固相萃取离子对HPLC法测定依诺沙星及其代谢物色谱条件：NucleosilC18(125×4.6mm)流动相：乙腈－0.1mol/l柠檬酸－20％氢氧化四丁基铵－高氯酸（140:860:6.5:4.5)流速：1.0ml/min检测波长：340nm血浆经过蛋白沉淀后直接进样分析尿样经固相萃取后进行色谱分析High-performanceliquidchromatographyassayformoxifloxacin:PharmacokineticsinhumanplasmaThesimultaneousseparationanddeterminationoffivequinoloneantiboticsusingisocraticreversed-phaseHPLC:ApplicationtostabilitystudiesonanofloxacintabletformulationHPLCdeterminationofenoxacin,ciprofloxacin,norfloxacinandofloxacinwithphotoinducedfluorimetric(PIF)detectionandmultiemissionscanning:ApplicationtourineandserumHigh-performanceliquidchromatographicdeterminationofciprofloxacininplasmasamplesSeparationanddeterminationofsyntheticimpuritiesofnorfloxacinbyreversed-phasehighperformanceliquidchromatographyDevelopmentandvalidationofanHPLCmethodforthedeterminationofgatifloxacinstabilityinhumanplasmaAnewapproachtoquantitativeNMR:FluoroquinolonesanalysisbyevaluatingthechemicalshiftdisplacementsHydrophilicinteractionliquidchromatography–tandemmassspectrometryforthedeterminationoflevofloxacininhumanplasmaDeterminationoffluoroquinolonesinenvironmentalwatersbyin-tubesolid-phasemicroextractioncoupledwithliquidchromatography–tandemmassspectrometryDeterminationoftheactivemetaboliteofprulifloxacininhumanplasmabyliquidchromatography–tandemmassspectrometry诺氟沙星的HPCE快速分析Becxman5500HPCE毛细管：75μm×57cm检测器：DAD电泳电压：30KV气压进样：5s线性关系：Y=0.003058X-0.0394,r=0.9996LOQ=3.1mg/l回收率＝99.5％精密度＝4.2％【思考题】简述氟喹诺酮类药物的体内药物分析的现代技术与方法？