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1EP6-AISBN1-56238-498-8Volume23Number16ISSN0273-3099EvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementProcedures:AStatisticalApproach;ApprovedGuidelineEP6-A：定量测量方法的线性评价：一种统计学方法，批准指南2NCCLS…通过自愿一致化的方式为世界医学科学团体服务NCCLS是医疗领域一个非赢利性的，不同学科之间，自愿参与的促进标准化和建立指南的教育组织。NCCLS创建于1968年并获得美国国家标准研究院的认可。NCCLS所依据的原则是，对病人高质量服务所需的临床实验室检测，自愿一致的标准是必不可少的。NCCLS通过各临床实验室、检验团体学会、工厂和政府机构的参与而代表临床检验界。叙述了文件叙述了实验室的程序、常规和参考方法以及评估方案可应用于所有检验学科。文件审核的一致化过程由一些正式的步骤组成，叙述了NCCLS文件和规范的编制如何发展到被接受为临床实验室标准。出版物NCCLS文件以标准、指南、委员会报告出版。标准：通过一致化过程形成的文件，并对材料、方法、或实践以不能修改方式明确规定其特定的基本要求。此外，标准也可以包含明确规定的选定要素。指南：通过一致化过程形成的文件，叙述了用于临床检验界的一般实验操作、方法或材料的规范。使用者可以使用成文文件或修改指南以适应特定的需要。报告：没有经过一致化审定过程的文件，由理事会颁布。“标准”一词，除了有特定含义外，还常用来指有关的NCCLS文件。一致化过程NCCLS的自愿一致化审定程序是一个为以下方面建立正式规范的方案：1.标准项目的权威性2文件的编制和公开评审3根据实验室使用者反馈的评论修改文件4文件被接受为临床实验室标准大多数NCCLS文件必须有“建议”和“批准”两种层次的一致化文件，根据特定的一致化过程，文件也可以有一个中间（“试行”）一致化的水平层次。建议：NCCLS文件作为建议标准或指南处在被临床检验界评审的第一阶段。此文件需要接受广泛彻底的技术审核，包括对范围、方法、用途和逐字逐行对技术和行文内容的全面评审。试行：只有当一种推荐方法对某一领域的评审有明确的需要，或者当某一建议性方案需要收集特定的数据时，才制定试行标准或指南。它应该接受评审以保证其有效性。批准：批准的标准或指南已在临床检验界得到一致同意。应审定并评价最终文件的用途，以保证获得一致同意（即对以前版本的意见已圆满解决），并确定对其它标准的需要。3NCCLS标准和指南为良好实验室实践（GLP）提供了一个一致化的意见。NCCLS标准和指南的条款较之应用规定多少要严格些。因而，遵守这些自愿一致性标准（或指南）不能减轻使用者对遵守应用规定的责任。评论实验室使用者的评论对一致化过程是很重要的。任何人都可以提出评论，根据一致化过程由书写文件的NCCLS委员会记录下所有评论。在下一层次文件出版时，这些评论或者修改了文件或者委员会在文件附录中给以反馈。强烈鼓励读者以任何形式、在任何时间对任何NCCLS文件提出评论。评论寄往NCCLS行政办公室：940WestValleyRoad,Suite1400,Wayne,Pennsylvania19087,USA。自愿参与强烈希望各专业的实验室科学家能自愿参加NCCLS项目。请与NCCLS行政办公室联系以取得有关参加委员会的更多的信息。4目录摘要…………………………………………………………………………………………………i委员会成员………………………………………………………………………………………iii前言………………………………………………………………………………………………vii1范围2介绍2．1目的2．2选择方法2．3定义2．4实验方法的概述3时间要求3．1仪器熟悉阶段3．2实验阶段4实验条件的评价4．1样本要求4．2基质效应4．3可接受的基质体系4．4样本中添加物的选择4．5分析顺序4．6分析范围4．7样本准备和浓度计算4．8数据收集4．9临床上几个重要的浓度水平5线性范围验证—数据评估5．1初步的数据检查5．2离群值检查5．3线性范围的确定5．4考虑随机误差6线性范围发布6．1图表方法6．2发布线性范围的确认56．3允许误差与设定目标6．4其它误差的影响6．5假设6．6发布线性声明的指导方针文献附录A样本稀释方法附录Bt值表附录C举例相关工作组和评论摘要相关工作组和委员评论摘要质量系统方法相关NCCLS出版物6前言当某分析物浓度或活性的测量值与真值成数学上的直线关系时，我们认为这种定量测定方法是线性的。对于分析和临床实验方法来说，线性特征是非常重要的。线性关系代表一种最简单的数学关系，使分析物的结果测量变得简单而容易。曾有争论，对于竞争免疫法这类测量方法来说，线性不是必须的，因为测量方法的响应物与浓度之间本来就呈非线性关系。然而，响应物的剂量效应曲线可以通过合适的转换变成数学上的线性关系，而且对于一种分析方法来说，只有两点之间呈线性关系时，才能进行计算结果。确保分析方法呈线性在临床上也是很重要的。临床医生清楚某分析物量与患者的病理生理过程并非呈线性，但是他们非常希望实验室报告的结果与该分析物的真实浓度水平或数量或活性是呈线性关系的。例如，当一个样本中分析物的量多一倍时，临床医生期望其测量值也是翻倍的。本版本说明：与以前版本相比EP6-A最大的改变是统计学方法的改进。第一版EP6-P仅用线性失拟误差检验（LoF检验）来判断线性关系。在本标准中，分析时选取五个等间距的不同浓度水平的分析物，每个浓度水平测量四次。回归线由所有点所得，同时得到两个方差即：由重复测量得到的样本方差和由五个平均值的回归线得到的均值方差。这些方差的比值即为LOF检验的基础。这种方法的缺点是精密度好的检测系统有很小的样本方差，在LOF检验的比率中，均值方差很小时，得出在统计学上差异显著，即呈非线性。也可能（概率很小）由于样本方差很大（重复性差）而导致临床上很重要的非线性得出相反结果。EP6-A的多项式回归在概念上与最初的LOF检验非常相似。它们都有两种统计模型（线性与非线性），都是评价那种是最可能的模型。然而，EP6-A作为一种多项式回归方法，是一种非线性选择的特殊参数模型，特别能够很好地鉴别非线性。精密度与线性成比例关系。精密度好时有利于判断线性关系，精密度差时则不利于确定线性关系。这种方法可以：1）在每个水平上判断非线性度，2）在评价非线性时可以控制不可接受的精密度，3）提供一种可测试的统计模型，4）在很多软件上可以进行编程。在以前的版本中也提到过，评价线性关系时，首先必须在图上点上数据。通过目测有助于判断使用哪种统计学方法和是否具有线性关系，非线性度是否与预期的目标相近。术语注释美国临床实验室标准化委员会（NCCLS或CLSI）作为全球标准化的领导者，正努力使全球各种标准尽可能协调一致。协调一致是一个在认知、理解、解释差异各方面逐步达到全球一致的过程。NCCLS认识到医学术语在美国、欧洲和其他地方表达不一致，这些不同也表现在7NCCLS、国际标准化组织（ISO）和欧洲标准化委员会（CEN）的文件中。因此NCCLS认识到医学术语的统一有利于全球标准化的统一，应得到立即重视。这项政策的实行是一个发展和教育的过程，从一些新项目和现有文件的修订开始。为使ISO与NCCLS在一些术语上保持一致，下列术语用在EP6-A文件中：Trueness(准确度)指多次测量的平均值和分析物的真实值的接近程度。Repeatability(重复性)代替批内精密度，可以恰当地用来描述在一定条件下连续测量同份分析物的接近程度。Measurementprocedure(测量程序)代替Analyticalmethod(分析方法)，指一系列用给定的方法完成的特殊操作。Measurementrange(测量范围)代替Reportablerange(可报告范围)，指测量误差限定在一个特定范围内的分析物测量的一系列值。Measurementerror/errorofmeasurement(测量误差)代替totalerror(总误差)，指测量值与真值的差值。所有的术语和定义为了能得到更广泛的应用，在下一次的版本中将再一次修正。标准防护由于不知道何种标本有传染性，因而所有的人体的血液标本都被当作有传染性，操作时都要按标准防护执行。标准防护是一种新的防护指南，主要强调全身防护和与身体隔离的原则。标准防护是防止所有的病原体，比仅防止血源性病原体更广泛。标准防护和全身防护指南见美国CDC文件和NCCLSM29---保护实验室员工避免职业性感染。关键词：允许偏差，允许误差，线性，基质效应，测量误差，总误差，不确定度8定量测量方法的线性评价一种统计学方法，批准的指南1．范围本文件提供一种建立、验证和/或证实定量测量方法线性范围的操作方法，它不能鉴别非线性的原因，用更多的样本数，可以更可靠地判断线性关系。如果一个线性评价失败，要求重做，可以用更多的重复次数，或减少样本数而缩小线性范围。本指南主要是评价线性关系，尽可能不受精密度和准确度的影响。精密度很差时，会妨碍线性关系的评价，因而重复性的检查也包括在内。实验过程中会用到一些基质，尽可能与分析标本的类型一致（血清、血浆、尿液等）。本指南要求实验室设定非线性误差的目标，只提供基本概念，没有特定的要求。2．介绍2．1目的本指南的目的旨在提供一种定量测量程序线性评价的统计学方法。首先要确定一种方法的非线性浓度范围，及在每个浓度水平上非线性的程度。本指南强调任何用户有必要确定自己对线性程度的要求，或非线性的允许误差范围。评价线性覆盖范围的Global检验（如LoF检验）不是特别重要。Global检验仅仅表明统计学上的非线性存在，不能显示非线性存在哪里，也不能显示误差的大小。线性试验有助于评价偏倚的大小（但非线性并不是偏倚的全部），偏倚是测量误差的一部分。用户必须定一个目标，确定自己所要求的测量误差、偏倚、随机误差（不精密度）、非特异性（干扰）的大小。EP-6A仅仅是指导用户的一系列方法评价文件中的一种，请参照最近发布的EP-21文件---临床实验方法的总分析误差。本文件适用范围很宽，当需建立一种方法的线性范围时，我们需要测试一个很宽的分析浓度范围，然后逐渐缩小直到有可接受的线性范围。如果用户在自己的实验室要验证已知的线性范围（厂家提供），测量时仅覆盖该范围即可。操作方法大体相似，不同的仅仅是分析的浓度水平和重复的次数。2．2方法选择有很多的方法用来评价线性范围。Kroll和Emancipator提出一种基于直线回归方程与多项式方程比较的方法，用残差（即每一个数据点到回归直线的差值）来定义线性。这种方法的优点是非常可靠，且基于严格的科学原理。如果得出线性适合（一次多项式）则说明测量方法是线性的。但这种方法并不简单，用户必须对实验数据（多用表格设计）进行多次多项式回归。这种9方法被Kroll、Praestgard、Mechaliszyn和Styer进一步改进，并被美国病理学家学会实验室间方法比对所采用。Krouwer和Schlain提出一种通用的方法，即LPO（lastpointofftheline），需要多次计算最小二乘法方程。Tholen提出一种图解连同回归线性失拟误差与目标百分比对比的评价方法，对连续线性片断进行简单的斜率分析。2．3定义允许偏差/误差(Allowabledifference/allowableerror)：在一个检测系统中，来自各种因素的，用户能够承受并能满足医学要求的分析偏差的大小。通常单次检测的允许误差的范围用标本测量靶值±允许误差来表示。分析物(Analyte)：具有某一名称的定量测定成分（ISOFDIS17511）分析结果（Analyticalresult）：在本文件中指一个试验标本的最后测量结果。大多用浓度或活性表示。偏倚（Bias）：测量值与公认参考值之间的差异。注：一般情况下，偏倚指公认的方法（决定性，参考性或指定方法）与比较