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空气中微生物数量的检测2011.11.21一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、结果计算五、结果评价一、实验目的和意义掌握检测和计数空气中微生物的基本方法掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操作学习对室内空气进行初步的微生物学评价实验意义空气中细菌总数常作为室内空气质量和空气受到微生物性污染程度的指标。用于医院、公共场所等空气质量的评价二、实验原理1：自然沉降法（沉降平板法）根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上，经过24h，37℃温箱培养计算出菌落数。特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1～5μm的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集率较低。2.撞击法Anderson采样器原理：多级筛孔型采样器由6个带有微细针孔的金属撞击盘构成，盘下放置有培养基的平皿，每个圆盘上有400个环形排列小孔，由上到下孔径逐渐减小。气流从顶罩进第一级，较小的粒子会由于动量不足随气流绕过平皿进入下一级。经过6次撞击后，可把绝大部分微生物采下。Anderson采样器（FA-1型）各级撞击盘捕获粒子范围及孔径大小Ⅰ：＞7μm孔径1.18㎜Ⅱ：4.7~7μm孔径0.91㎜Ⅲ：3.3~4.7μm孔径0.71㎜Ⅳ：2.1~3.3μm孔径0.53㎜Ⅴ：1.1~2.1μm孔径0.34㎜Ⅵ：0.65~1.1μm孔径0.25㎜各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义特点a.采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上；b.采样效率高，逃逸少c.微生物存活率高3.滤过法：使一定量的空气通过吸附剂（灭菌生理盐水），然后培养吸附剂中的细菌，计算出菌落数。4.液体撞击法：和固体撞击式采样器一样，是利用喷射气流方式将空气中的微生物粒子采集在小体积的液体中，适用于高浓度的空气微生物采样。三、实验步骤1.自然沉降法配制琼脂培养基（已做）↓培养皿暴露空气中5min/10min↓37℃温箱培养24h↓计数和结果评价采样布点原则a.根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，小于50m2的房间应设3个点，50～100m2设3～5个；100m2以上至少5个点b.采样高度和人呼吸高度一致（1.2～1.5m）c.采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,采样时关闭门窗，减少人员走动2.撞击法调整采样器高度为呼吸带高度于1.2～1.5m↓将平皿依次放入圆盘，固定并做好标记↓接通电源，开打电源开关，调整流量到28.3L/min↓采样5min/10min后，取出平皿，经过24h，37℃培养，计数分组：4个同学一组，分别采用自然沉降法和Anderson采样器，采样时间设为5min和10min，比较两种采样方法的结果。注意事项：整个过程注意无菌操作。四、结果计算1.自然沉降法根据奥梅梁斯基建议，面积为100cm2的平板培养基，暴露于空气中5min，于37℃温箱培养24h后所生长的菌落数相当于10L空气中的细菌数空气中细菌数（cfu/m3）=1000×[(100/A)×(5/t)×(1/10)]×N=50000N/(A×T)A-平板面积（cm2）T-暴露时间（min）N-平均菌落数（cfu/皿）2.撞击法空气含菌量(cfu/m3)=[六级采样板的总菌数（cfu）÷28.3（L/min）×采样时间（min）]×1000计算空气中微生物大小分布：各级微生物粒子数％=该级菌落数/六级总菌落数五、结果评价空气微生物卫生标准，是以细菌作为标准细菌选用的指标是菌落总数，表示方法为cfu/皿或者cfu/m3我国现行标准是根据空气中实测细菌数和流行病学观察结果为主要依据。室内空气质量标准（GB/T18883-2002）2500cfu/m3公共场所空气卫生标准图书馆、阅览室的空气卫生标准：空气细菌总数≤2500cfu/m3（撞击式），或≤30个/皿（沉降式）娱乐场所的卫生标准：空气≤4000cfu/m3幼托机构室内卫生标准：空气细菌菌落数应≤2500cfu/cm3（沉降法）医院消毒卫生标准（GB15982－1995）1.对两种方法结果的比较？2.根据Anderson采样器的实验结果，计算空气中微生物大小分布：以各级的菌落数占六级总菌落数的百分比表示。两种方法比较1.沉降法测定的菌落总数要多，在实验条件下比撞击法多24.6％。2.小颗粒含菌粒子在空气中稳定，不易沉降或者漂浮，撞击法比沉降法更易采集到小粒子。3.沉降法结果不稳定，容易受采样条件的影响。影响因素1.温度对细菌数量影响较大，温度越低，细菌数越少。2.气流，不仅可以把室外的细菌带入室内，也会将地面、墙壁的含菌粒子扬起。3.日光，波长为254纳米的紫外线光具有杀菌作用4.湿度，湿度过低，繁殖体易趋向死亡。