中药分析整理重点

中药分析整理重点第一章绪论1.中药分析学的定义：中药分析（AnalysisScienceofChineseMateriaMedica）是利用物理、化学、物理化学、生物学、药理学、生物化学及其他相关的方法和技术研究分析中药（天然药物）、中药制剂及其有关联产品质量的一门科学。亦可称为天然药物分析（AnalysisofNaturalMedicinalProducts，orAnalysisofCrudeDrugs）或生药分析（PharmacognosticalAnalysis）。2.定量分析常强调要分析中药的有效成分，通常把具有生物活性并有医疗作用的化学成分者称为有效成分或主成分。如生物碱类、黄酮苷类、蒽苷类、强心苷类、皂苷类、挥发油类、香豆素类、鞣质类以及多糖、氨基酸等，中药中一些生物活性不显著成分者称为辅成分，如树脂、色素、无机盐等，但这种区分是相对的。另外所谓有效，也并不能完全代表中药的疗效。3.生产在线分析:中药制剂生产全过程各环节（原料药材的检测，原药材的切制、粉碎和炮制，提取、过滤和浓缩，制剂中间体的制备，辅料的质量，成型工艺过程，最终制剂成品）的质量监测，可及时反馈质量信息，用于指导生产，发现问题，及时解决，以确保产品质量。这种在生产环节中进行的适时检测称为生产在线分析，已逐步受到厂家和药品质量管理部门的重视。4.GAP（中药材生产质量管理规范，GoodAgriculturalPractice）GLP（药品非临床研究质量管理规范，GoodLaboratoryPracticeforNon-clinicalLaboratoryStudies）GMP（药品生产质量管理规范，GoodManufacturingPracticeforDrugs）5.研究目标和任务A着重强调对中药及其制剂中所含有效成分或主要化学成分的研究B着重强调定量分析研究C着重强调现代分析方法的应用D着重强调多学科手段对中药的综合分析研究6.中国药典是国家为保证药品质量所制订的法典、是药品生产、经营、使用、检验、和监督管理部门共同遵循的法定依据，也是我国医药行业对外贸易和技术交流不可缺少的准绳，自1953年起至今，共出版9版药典。7．取样药材取样法：取样的基本原理则应是均匀、合理。采用四等分法反复数次直至最后剩余量足够试验为止，即为平均样品量，平均样品量一般不得少于实验所需要的3倍，即1／3供实验分析，1/3供复核，1/3则为留样保存，保存期至少一年。8.供试品的提取（1）溶剂提取法中药中的化学成分在溶剂中的溶解度与溶剂性质有关，一般遵循“相似相溶”的原则。通过对待测主成分的结构分析来选用合适的溶剂。常用提取溶剂（a）极性溶剂：水是典型的极性溶剂，它能溶解离子型成分，如生物碱盐、有机酸盐及其它成分（b）非极性溶剂：石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯等是常用的非极性溶剂，用以提取低极性成分（c）中等极性溶剂：乙醇、甲醇、丙酮等是常用的中等极性溶剂，它们对中药各类成分具有较广泛的溶解性能乙醇是最常用的提取溶剂。（2）常用的提取方法A冷浸法：浸泡时间12~24（~48）h在浸泡期间应注意经常振摇，浸泡后再称重。冷浸法的优点是适宜遇热不稳定的有效成分，操作简便，应用较广。B连续回流法：样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发的溶剂进行反复回流提取。本法提取效率高，所需溶剂少，遇热易破坏欲测定成分，不宜用此法。C超声波提取法：样品置适宜容器内，加入提取溶剂后，置超声波振荡器中进行提取。本法提取效率高，经实验证明一般样品30min内即可完成。另外，为了使待测成分尽可能提取完全，对中药材的粉碎度有一定要求，提取方法、时间、温度等的选择要通过实验数据加以确定。9.含量测定（1）有效成分含量测定对于有效成分明确的中药及中成药，应进行有效成分的含量测定以确保质量。（2）有效部位含量测定某些中药及中成药，如能大致明确主要活性物质是那一类成分，亦可进行其有效部位的测定，如总生物碱、总皂苷、总黄酮等，测定的是有效部位的总量。（3）有效成分不明确的中药及中成药测定A可选择一个或几个认为可能的有效成分或主要成分（指示性成分）进行测定。B测定药物的总固体量，如水浸出物量、醇浸出物量、乙醚浸出物量，以间接控制质量。C对于在加工炮制、制备、贮藏过程中易损失、破坏的成分进行含量或限量检查。D可选用适当的生物效价或其它生物化学方法控制质量。(4)贵重药材或含剧毒成分的中药测定A中药制剂中含有剧毒成分需测定含量如乌头、斑蝥等B贵重药材在制剂中投料量应加以测定如人参、麝香等第三章光谱分析法的应用1.200~400nm近紫外区,400~800nm可见光区2.光谱分析法的定义和分类利用各种化学物质（包括原子、基团、分子及高分子化合物）所具有的发射、吸收或散射光谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的方法，称为光谱分析法。根据光谱谱系的特征不同，可把光谱分析方法分为发射光谱分析、吸收光谱分析和散射光谱分析三大类。（1）应用吸收光谱原理进行分析：可见-紫外分光光度法、红外分光光度法、原子吸收分光光度法；（2）应用发射光谱原理进行分析：荧光分析法和火焰光度法；（3）应用散射光谱原理进行分析：比浊法，包括免疫比浊法等。一、紫外分光光度法3.实例1.双波长光谱法测定喉痛消盐丸中靛蓝、靛玉红的含量。青黛是该丸剂中的一主要药物，青黛中主要有效成分靛蓝、靛玉红在丸剂中的含量，可作为喉痛消炎丸质量标准的重要指标。利用等吸收波长法对其进行含量测定，样品不需预先分离即可直接测定。A.选择等吸收波长：从图可知靛蓝在540nm、634.4nm处有合适的等吸收波长；靛玉红在514.2nm和566nm处有等吸收波长，而空白样品在上述波长处的吸收曲线几乎成一条直线，不干扰测定，因此，可选用靛蓝的测定波长λS1=566nm和参比波长λR1=514.2nm。可选靛玉红的测定波长λS2=540nm和参比波长λR2=634.4nm。B.标准曲线的绘制精密称取靛蓝对照品溶液（每1ml氯仿含40μg靛蓝）0.25，0.50，…，2.0ml；靛玉红对照品溶液（每1ml氯仿含10μg靛玉红）0.2，0.4，…，1.40ml，分别放入10ml量瓶中，用氯仿稀释至刻度，分别在上述等吸收波长处测其差吸收度：ΔA1=A566nm-A514.2nm；ΔA2=A540nm-A634.4nm。然后用ΔA对C做标准曲线；并求出其一元回归方程：ΔA1=0.02241×C1（r1=1.0000）ΔA2=0.04060×C2+0.0055（r2=1.0000）式中，C1，C2分别为靛蓝、靛玉红浓度（μg/ml）。C.含量测定精密称取喉痛消炎丸细粉约0.2g于索氏提取器中，用氯仿提取至无兰色（4小时），用氯仿定容于50ml量瓶中，再精密吸取5ml上述溶液至10ml容量瓶中，加氯仿至刻度即为样品溶液。将样品溶液在λS1与λR1处测定ΔA样1值，用以上ΔA1式求出靛蓝的浓度及样品中靛蓝的含量。同样，在λS2与λR2处测定ΔA样2值，用以上ΔA2式求出靛玉红的浓度及样品中靛玉红的含量。4.实例2.差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量胆红素为中药牛黄的重要部分，天然牛黄中胆红素的含量高达40%~50%，而牛黄类中成药又多达百余种，因此，测定胆红素的含量对控制这类中药的质量很有必要。A.测定原理胆红素具有高共轭体系结构，吸收光谱在波长453nm处为最大吸收，在可见光照射下胆红素易氧化成兰色产物，在453nm处吸收度明显降低。如下图。a：光照前；b：光照后B.含胆红素的中药制剂一般还可能含有数种在波长453nm处有吸收的组分，用直接比色法测定胆红素的含量则易受到这些组分的影响。此时，可以利用共存组分在所选定的光照条件下，吸收光谱在光照前后保持不变的性质，用差示光谱法对胆红素进行定量。通过实验得知，不同浓度的胆红素对照品溶液在日光下照射25分钟或在红外灯（250W）下照射3.3小时，其吸收度即能稳定。故实验时选用日光下照射30分钟或在红外灯下照射4小时测ΔA值。C.标准曲线的绘制:精密称取胆红素2mg于50ml棕色量瓶中，加入适量冷的（10℃）的酸性氯仿溶液（150ml氯仿中含0.05ml浓盐酸），于冰水浴中超声振荡20min，稀释至刻度，制成储备液。精确吸取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml储备液于5个10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，测其光照前后在453nm处的吸收度。吸收度差值ΔA与胆红素溶液浓度C（ug/ml）的回归方程为ΔA=0.0804C+0.00570（r=0.9995）。（除光照反应外，其余操作需避光）。D.干扰性实验分别制得六应丸、六神丸、牛黄消炎丸的空白样品对照液，在453nm处测得各自光照前后的A值，计算ΔA值。实验表明三种成药的空白溶液ΔA值为零或几乎为零。说明其它干扰组分在以上光照条件下不干扰胆红素的测定。E.含量测定精密称取六应丸、六神丸各60mg，牛黄消炎丸120mg置10ml带塞的试管中，准确加入冷酸性氯仿10ml，冰水浴中振荡20min，过滤，弃去初滤液，测续滤液光照前后的A值，算出ΔA值。由回归方程算出样品的含量。共测定了3批上述3种制剂中胆红素的含量，其含量依次为0.829~1.15,0.592~0.999,0.487~0.645mg/g。二．红外分析法4.常用2.5µm~25µm的中红外区。5.定量分析红外光谱定量分析是通过对特征吸收谱带强度的测量来求出组份含量。其理论依据也是Lambert-Beer定律。由于红外光谱的谱带较多，测定波长的选择余地大，所以能方便地对单一组份和多组份进行定量分析。此外，该法不受样品状态的限制，能定量测定气体、液体和固体样品。因此，红外光谱定量分析应用广泛。但红外光谱定量灵敏度较低，尚不适用于微量组份的测定。三.荧光分析法6.本法的优点是灵敏度更高（10-4μg/ml）、选择性好、试样量少等特点，特别适用于体内中药分析。7.不足之处是干扰因素多、实验条件严格。8.荧光和分子结构的关系π电子共轭程度越高，更易产生荧光。（1）刚性平面结构(分子的刚性增加，荧光增强)（2）取代基（供电子基团常使荧光增强，吸电子基团使荧光减弱）（3）不饱和稠环结构（有利于荧光的发射）（4）分子所处的环境第四章色谱分析法的应用1.色谱法（Chromatography）是一种物理或物理化学的分离分析方法。形成气相色谱、液相色谱、薄层色谱、离子色谱、亲和色谱、超临界流体色谱、毛细管电泳、电色谱等分支。各种色谱仪器与质谱、红外、核磁等技术联用创立了复杂混合物分析的新手段，成为发展最快、应用最广的分析方法之一。2.分离原理主要是利用物质在流动相与固定相两相中的分配系数差异、吸附与解吸差异或其他差异而被分离。3．按分离原理分类（1）吸附色谱法（adsorptionchromatography）利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。吸附色谱有GSC和LSC等。（2）分配色谱法（partitionchromatography）利用固定液对不同组分分配性能的差异而使之分离的色谱法称为分配色谱法。分配色谱法有GLC和LLC等。（3）离子交换色谱法（ionexchangechromatography，IEC）是用离子交换树脂作固定相，利用树脂上离子交换基团对样品离子交换能力的差别而使之分离的色谱法称为离子交换色谱法。（4）尺寸排阻色谱法（sizeexclusionchromatography，SEC）用多孔凝胶作固定相，利用凝胶孔穴对不同尺寸的分子排阻效应的差别使之分离的色谱法称为尺寸排阻色谱法。（5）亲和色谱法（affinitychromatography）用具有生物活性的配位基（如抗体、酶等）键合到非活性载体或基质表面构成固定相，利用生物分子与固定相表面上配位基的专属亲和力使之分离的色谱法称为亲和色谱法。（6）毛细管电泳法（capillaryelectrophoresis，CE）样品在毛细管的液体介质中，在电场力作用下的分离分析方法称为毛细管电泳法。（7）毛细管电色谱法（capillaryelectro-