中药制剂中各类化学成分分析

第六章中药制剂中各类化学成分分析§1生物碱类成分分析概述理化性质•物理性状（存在的形态，升华性，挥发性，光学活性）•碱性•溶解性•沉淀反应沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸•显色反应+酸性染料（磺酸肽类）→有色配合物•紫外光谱特征游离—易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有机溶剂生物碱盐—水溶性增强生物碱类成分的分离•溶剂萃取•柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）定性鉴别•沉淀反应、显色反应多肽、蛋白质、鞣质等→假阳性反应麻黄碱、秋水仙碱等→假阴性反应马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。定性鉴别•薄层色谱鉴别吸附剂：氧化铝、硅胶展开剂：氯仿、苯等显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等•气相色谱麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定•液相色谱含量测定•总生物碱含量测定化学分析法分光光度法•直接测定•离子对萃取比色法酸性染料比色法BH十十In－→（BH十In－）→BH十·In－苦味酸盐比色法雷氏盐比色法异羟肟酸铁比色法（含有酯键结构的生物碱）含量测定•单体生物碱含量测定薄层色谱法高效液相色谱法•液—液分配色谱法（以反相为主，如ODS或C18）改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）固定相改进（封尾技术）•液—固吸附色谱法•离子交换色谱法（阳离子交换树脂）•检测器气相色谱法§2黄酮类成分分析概述理化性质•物理性状（存在的形态，颜色，挥发性，光学活性）•溶解性•酸碱性酸性：与酚羟基的数目和位置有关7,4‘-二羟基7-或4‘-羟基一般酚5-羟基碱性游离甙元—易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等黄酮甙—易溶于水、甲醇、乙醇理化性质•显色反应还原反应（盐酸镁粉反应）金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、镁盐）•紫外光谱特征I带(300-400nm)→B环桂皮酰基II带(240-285nm)→A环苯甲酰基黄酮类成分的分离•溶剂萃取•柱层析（聚酰胺柱）•沉淀法定性鉴别•显色反应盐酸-镁粉反应金属盐类配合反应定性鉴别•薄层色谱鉴别硅胶--分离弱极性黄酮•展开系统：甲苯-甲酸乙酯-甲酸，氯仿-甲醇聚酰胺--分离含游离酚羟基的黄酮及其苷•展开系统：醋酸，醋酸乙酯-甲酸-水等纤维素--分离多糖苷混合物•展开系统：正丁醇-乙酸-水，甲酸，乙酸含量测定•总黄酮含量测定紫外分光光度法比色法高效液相色谱法•正相色谱硅胶固定相—没有羟基或乙酰化黄酮类成分•反相色谱（C18或C8）流动相：甲醇-水-乙酸（磷酸缓冲液），乙腈-水•检测器银杏叶提取物总黄酮醇苷含量测定[含量测定]色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素酚峰与异鼠李素峰的分离度应大于1.5。对照品溶液的制备（略）供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮苷的含量。总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量）×2.51§3三萜皂甙类成分分析概述理化性质•物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）•溶解性•紫外光谱特征大多无明显的紫外吸收或仅在200nm附近有末端吸收皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙—可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等ROHHHCOOHO3R2OHOHR1O3206甘草酸人参皂甙(A型)理化性质•显色反应醋酐-浓硫酸反应五氯化锑反应三铝醋酸反应冰醋酸-乙酰氯反应氯仿-硫酸反应•金属盐类反应+铅、钡、铜盐→沉淀酸性皂甙+硫酸铵/醋酸铅/中性盐→沉淀中性皂甙+碱式醋酸铅/氢氧化钡/碱性盐→沉淀三萜皂甙类成分的分离•溶剂萃取•柱层析（大孔树脂柱）•沉淀法定性鉴别•泡沫反应•显色反应定性鉴别•薄层色谱鉴别吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土展开剂：•三萜皂甙—氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-水等极性较大的体系•三萜皂甙元--以苯、氯仿、己烷等为主要组分显色剂•三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸-醋酸酐、碘蒸气等含量测定•总皂甙含量测定重量法比色法•显色剂：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐-硫酸等等•三萜皂甙类单体成分含量测定薄层色谱法高效液相色谱•甘草酸、远志皂甙→紫外检测器•其他→蒸发光散射检测器（ELSD）概述理化性质•物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性）•溶解性•酸碱性酚羟基→酸性游离—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等醌甙—可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇丹参醌IIA大黄素OOCH3OHOHOH910OOO§4醌类成分分析理化性质•显色反应羟基蒽醌+碱→橙，红，紫红，蓝+Pb2+/Mg2+→配合物+对亚硝基二甲基苯胺→紫，绿，蓝，灰定性鉴别•显色反应•升华法•薄层鉴别吸附剂：硅胶展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统→分离甙和甙元不含甲醇或水的混合溶剂系统→分离甙元显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏含量测定•游离蒽醌的测定弱极性溶剂提取后，加碱比色•结合蒽醌的测定极性溶剂提取，水解测甙元先酸水解后，非极性溶剂提取甙元后测定•醌类单体成分含量测定薄层色谱法高效液相色谱牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法对照品溶液测定：以1，8-二羟基蒽醌为对照品，精密称取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（100µg/mL）。取1mL对照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱溶解并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm波长处测定。样品测定：⑴游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片10片，刮去糖衣，精密称定重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，称重，水浴上回流4小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，滤过，吸取滤液50mL于分液漏斗中，用蒸馏水20mL洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，直至混合碱液无色，合并碱液，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽，冷却，移入100mL量瓶中，并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法⑵总蒽醌的测定：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置于150mL烧瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小时，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小时，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用蒸馏水洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿液用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，至碱液无色，合并，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入50mL量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。⑶结合蒽醌的计算：每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量—每片含游离蒽醌量。复方丹参片中丹参酮ⅡA含量测定—高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270nm。对照品溶液的制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹参酮ⅡA40µg）供试品溶液的制备：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定，即得。§5挥发性成分分析概述理化性质•物理性状（气味，比重，折光性）•溶解性：易溶于有机溶剂•显色反应酚类+三氯化铁→蓝，蓝紫，绿羰基+苯肼、羟胺→结晶体醛类+硝酸银胺→银镜内酯类+亚硝酰铁氰化钠+NaOH→红色并逐渐消失奧类+浓硫酸→蓝，紫柠檬烯OHCHCHCHO薄荷醇桂皮醛§5挥发性成分分析定性鉴别•化学反应氧化反应(高锰酸钾，铬酸）香草醛硫酸反应•薄层色谱吸附剂：硅胶、氧化铝展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯）显色剂•气相色谱法•GC-MS或GC-FTIR§5挥发性成分分析含量测定•总挥发油含量测定挥发油测定器蒸馏法•单一成分含量测定气相色谱薄层色谱法高效液相色谱GC-MS或GC-FTIR联用技术§4其他类型成分分析香豆素类•显色反应异羟肟酸铁反应与酚羟基反应•FeCl3•Gibbs试剂（2,6-二氯苯醌氯亚胺）反应→蓝色•重氮试剂化反应§4其他类型成分分析香豆素类•定性鉴别化学反应法荧光法薄层色谱法七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别取本品10g，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸0.5ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷—醋酸乙酯（4:1），显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。§4其他类型成分分析香豆素类•含量测定分光光度法荧光光度法薄层色谱法高效液相色谱法气相色谱法§4其他类型成分分析有机酸•概述•理化性质物理性状（存在的形态，溶解性，挥发性）•提取分离有机溶剂提取法离子交换法水蒸气蒸馏法§4其他类型成分分析有机酸•定性鉴别吸附色谱分配色谱•含量测定酸碱滴定法→总有机酸分光光度法高效液相色谱法薄层色谱法其他方法§4其他类型成分分析环烯醚萜类•概述—特殊的单萜•理化性质物理性状（存在的形态，多苦味，稳定性）溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇•薄层定性鉴别吸附剂：硅胶、聚酰胺显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液OOOOglu龙胆苦甙§4其他类型成分分析环烯醚萜类•含量测定高效液相色谱法薄层扫描法荧光分光光度法分光光度法复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定精密称取本品3g，置索氏提取器内，加甲醇回流提取6小时，回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭-中性氧化铝柱，用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶GF254薄层板，展开剂氯仿—甲醇—25%氨水（4:1:0.1），检测波长247nm，参比波长370nm。§4其他类型成分分析单萜及二萜类•含芍药甙中药制剂的分析薄层色谱高效液相色谱•含穿心莲内酯中药制剂的分析薄层色谱回滴法比色法—总内酯薄层扫描或高效液相色谱法—单体成分HOCH2OHCH2CH2CHOOOH穿心莲内酯§4其他类型成分分析多糖（polysaccharides）•概述•理化性质物理性状（存在形式，还原性）溶解性：溶于水，