中药制剂检测技术第五章含量测定

第五章中药制剂的含量测定（ContentDetermination）概述一、含量测定的定义和意义中药制剂的含量测定是指用适当的化学方法或仪器分析方法对制剂中某种（些）有效成分或有效部位进行的定量分析。并以其测定结果是否符合药品标准的规定来判断药品的优劣，是控制和评价药品质量的重要方法。二、含量测定方法中药制剂含量测定的方法包括化学分析法和仪器分析法两大类。由于中药制剂组成复杂，仪器分析法更为常用。《中国药典》中药制剂含量测定方法概况见下表。本章重点介绍浸出物测定法、挥发油测定法、分光光度法、TLCS、HPLC和GC等。方法总数修订新增删除HPLC339302820TLC3231212GC233190分光光度法18039滴定法13030重量法5011氮测定法5110挥发油测定法3001浸出物测定法13121总计4563732723仪器分析法化学分析法第一节浸出物测定法（DeterminationofExtractive）一、定义浸出物测定法系根据制剂中化学成分的溶解性，选择适当的溶剂浸提(提取)样品，并测定浸出物（提取物）的含量，以此来控制药品的质量。二、意义这是一种较为粗略的定量分析方法。但对于有效成分不明确或无法建立确切的定量分析方法的中药材及其制剂，尚具有一定的意义。《中国药典》附录收载了三种测定方法：水溶性浸出物测定法、醇溶性浸出物测定法和挥发性醚浸出物测定法。有的品种还采用了乙酸乙酯浸出物测定法。《中国药典》收载的中成药浸出物测定品种及其规定见表4-18。供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。类别品名溶剂方法限度（%）醇溶性浸出物测定七厘散乙醇热浸法≥60.0刺五加浸膏甲醇热浸法≥60.0刺五加片甲醇热浸法≥80mg/片儿康宁糖浆正丁醇≥3.0独一味胶囊正丁醇≥8.0鼻窦炎口服液正丁醇≥1.2挥发性醚浸出物测定午时茶颗粒乙醚≥0.35沉香化气丸乙醚≥0.40乙醚≥0.10九味羌活丸乙醚≥0.30龟龄集乙醚≥0.25水浸出物测定暑症片冷浸法≥25.0乙酸乙脂浸出物测定三、水溶性浸出物测定法本法系以水为溶剂，对制剂中水溶性成分进行提取，并计算其在制剂中的含量(%)。本法包括冷浸法和热浸法。后者适用于不含或少含淀粉、粘液质等成分的样品。1．冷浸法取供试品约4g，称定重量，置250~300ml的锥形瓶中，精密加入水100ml，塞紧，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，弃去初滤液，精密量取滤液20ml，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干后，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（W/W%）。含量（W/W%）=×100%mi为水溶性浸出物重量（g）ms为干燥供试品的重量（g）=供试品重量×（1﹣含水量%)）2.热浸法(中成药较少用自学)3.实例暑症片的水溶性浸出物测定（P128）mi×10020×ms四、醇溶性浸出物测定法本法系以甲醇、乙醇或正丁醇为溶剂，提取药品中相应的醇溶性成分，并计算其含量（%）。正丁醇浸出物测定法主要用于含较多皂苷类成分的制剂，更具专属性。1.甲醇、乙醇浸出物的测定照水溶性浸出物测定法测定。2.正丁醇浸出物的测定按各品种项下规定的方法测定。一般说来，水溶液制剂可直接用水饱和的正丁醇提取数次，合并提取液，置已干燥恒重的蒸发皿中，蒸干，置105℃干燥3小时，移置干燥皿中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算供试品中正丁醇浸出物的含量（W/V%）。固体制剂可先加水溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取数次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，称定浸出物重量，计算出制剂中正丁醇浸出物的含量（W/W%）。3.注意事项（1）回流加热乙醚须在水浴上进行。（2）蒸发皿中挥去乙醚须在室温下风橱中进行。（3）加热挥去浸出物中挥发性成分时，应缓缓加热至105℃4.实例（1）儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定（2）刺五加浸膏的甲醇浸出物测定五、挥发性醚浸出物测定法本法以乙醚为溶剂，对制剂中挥发性醚溶性成分进行提取，并计算其在制剂中的含量（W/W%）。本法主要用于含挥发性成分较多的制剂，专属性较强。1.测定法取供试品（过四号筛）2~5g，置五氧化二磷干燥器中，干燥12小时，精密称定重量（ms）,置索氏提取器中，加乙醚适量，除另有规定外，加热回流提取8小时，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸发皿中，放置，挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中，干燥18小时，精密称定（m1），缓缓加热至105℃，并于105℃干燥至恒重（m2）。其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量（m1-m2）。计算，即得。含量（W/W%）=×100%msm1-m22.实例九味羌活丸的挥发性醚浸出物测定本品由羌活、防风、苍术、细辛、川芎、白芷、黄芩、甘草、地黄等九味中药组成，其主要有效成分为挥发油，故测定其中挥发性醚浸出物的含量。第二节挥发油测定法（DeterminationofVolatileOil）一、意义某些药品中的主要有效成分为挥发油，故《中国药典》收载了挥发油测定法，采用水蒸气蒸馏法对药品中挥发油总量进行测定，以控制药品质量。例如，正骨水、牡荆油胶丸、保妇康栓和满山红油滴丸等中挥发油的测定。二、测定原理首先利用挥发油的挥发性用水蒸气蒸馏法将其提取完全；再利用其较强的亲脂性与水不相溶而分层，即可读取油的总量并求算出含量。三、挥发油测定装置（图）四、测定方法供试品需粉碎后过二号至三号筛，混匀再测定。1.甲法本法适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油。取供试品适量（约相当于挥发油0.5ml～1.0ml），称重（准至0.01g），置烧瓶中，加水300ml～500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，计算即得。2.乙法本法适用于测定相对密度在1.0以上的挥发油。取水约300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后连接回流冷凝管。将烧瓶内容物加热至沸，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自“取供试品适量”起，依法测定，自油层中减去二甲苯量，即为挥发油量，计算即得。五、含量计算含量（V/W％）=×100%含量（V/W％）=×100%含量（V/W％）=×100%挥发油体积（ml）样品体积（ml）样品重量（g）挥发油密度（g/ml）VOWSWSVO×DOVSVOVOWSDOVS第三节可见-紫外分光光度法（UltravioletandVisibleSpectrophotometry）一、定义根据被测物质在可见-紫外光的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度对该物质进行定性定量分析的方法称可见-紫外分光光度法。紫外分光光度计工作原理紫外吸收光谱图二、特点本法操作简便，灵敏度高，常用于中成药含测。但本法不具分离功能，常用于总成分的测定。三、定量分析的理论基础朗伯比尔定律A=KCLA为吸收度K为吸收系数C为溶液浓度L为溶液厚度四、药典收载了三种测定方法1.吸收系数法仅用于UV,不需对照品。2.对照品比较法主要用于Vis,需用对照品。3.标准曲线法主要用于Vis,需用对照品。（原计算分光光度法取消）第四节薄层扫描法（ThinLayerChromatographyScanTLCS）一、定义薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。二、特点具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比较，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。目前随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制剂检验中，已成为重要的分析方法。《中国药典》中有32个中成药品种采用该法进行含量测定。三、仪器及其工作原理1.薄层扫描仪中国药典采用双波长薄层扫描仪。常用的有岛津CS-930型和CAMAG-Ⅱ型等。2.扫描仪工作原理3.测定方式（1）吸收法适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。（2）荧光法适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法高。4.测定波长（1）单波长一般用于荧光测定法，即用某一波长的紫外光（激发光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。（2）双波长主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长（λs）和参比波长（λR）依次扫描斑点，所测吸收度为ΔA=Aλs－AλR样品波长（λs）：即被测成分的λmax参比波长（λR）：即被测成分的λmin或此波长处无吸收。5.光束扫描方式（1）直线扫描适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。（2）锯齿扫描适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好，故吸收测定法常用此扫描方式。6.光源（1）钨灯（W）供可见光（350～800nm）测定，扫描有色成分的斑点。（2）氘灯（D2）供紫外光（200～400nm）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。（3）氙灯（Xe）供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为365nm。四、含量测定方法（外标法）TLCS含量测定有外标法和内标法，中国药典仅采用外标法。1.原理外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。2.类型根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点法和外标两点法。若标准曲线通过原点，采用外标一点法。若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。外标一点法的直线方程：C=FAF为斜率外标两点法的直线方程：21FAFC12121AACCF1221122AACACAF、F1为斜率F2为截距3.操作步骤（1）对照品溶液的制备（2）供试品溶液的制备（3）点样一般要求使用市售薄层板。①外标一点法：至少6个原点对照品（R）2个（同一质量）：2R供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S12S2②外标两点法：至少8个原点对照品（R）4个分2组大质量的2个：2R1小质量的2个：2R2供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S12S2对照品与供试品应交叉点加在同一块薄层板上，目的在于消除各种误差。测定时应保证供试品原点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量。外标两点法外标一点法（4）展开（5）显色定位供试品色谱中待测斑点的比移值（Rf值）和光谱扫描得到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。（6）扫描应沿展开方向扫描，不得横向扫描。（7）含量计算①外标一点法▲求出供试品被测成分（斑点）的质量Ms=MRXAsARMs被测成分的质量（Mn=2）MR被测对照品的质量As被测成分吸收度（荧光强度）积分值（An=2）AR被测对照品吸收度（荧光强度）积分值（An=2）____▲求出供试品中被测成分的含量含量（W/W）=MsX稀释倍数取样量含量（W/片）=MsX稀释倍数X平均片重取样量②外标两点法▲求出供试品斑点中被测成分的质量Ms=•C+V1C(V2-V1)(A-A1)(A2-A1)Ms被测成分的质量（mgn=2）A1对照品小点样量吸收度V1对照品小点样量（μl）（荧光强度）积分值（An=2