中药外敷治疗哮喘的血清药理学实验研究

基金项目：上海市科学技术发展基金资助项目（No．０２４１１９０８４）Correspondence：Prof．HuifengSHEN；Email：[e-mail]中药外敷治疗哮喘的血清药理学实验研究沈惠风１，李祎群１，金若敏２，李鹤１，闵亮１１．上海交通大学医学院仁济医院中医科，上海２００１２７２．上海中医药大学中药药理及安全评价实验室，上海２０１２０３目的：通过血清药理学方法，观察敷贴后含药血清对抗由氯化乙酰胆碱（acetylcholinechloride，Ach）引起的豚鼠体外螺旋气管条的收缩作用，来探讨中药循经敷贴治疗哮喘的作用机制和预防机制，并对药物作用进行时效分析。方法：用Hutson法复制豚鼠哮喘模型，诱喘后中药敷贴组每日用中药敷贴６０min；生理盐水敷贴组采用生理盐水浸润纱布敷贴，氨茶碱敷贴组用４００mg／kg体质量剂量的氨茶碱溶液浸润纱布进行敷贴，两组敷贴方法同中药组；氨茶碱腹腔注射组按４００mg／kg直接腹腔注射氨茶碱。正常对照组自然喂养７d，中药敷贴组分别敷药１、７和１４d，生理盐水敷贴组、氨茶碱敷贴组和氨茶碱腹腔注射组治疗７d，末次给药１h后处死动物，取血清。用血清药理学方法，做血清对豚鼠体外气管条收缩影响的实验，分别计算收缩百分比。结果：中药敷贴治疗后的含药血清可对抗经过Ach处理后的豚鼠体外气管条的收缩，效果与氨茶碱腹腔注射作用等同。在一定时间内，体外气管条的收缩百分比随中药敷贴治疗天数的延长而减少，但治疗７～１４d，其作用趋于稳定。预先用含药血清处理豚鼠离体气管条，也能显著减轻Ach刺激引起的气管收缩。结论：对抗Ach而起到解痉作用是中药循经敷贴法治疗哮喘的机制之一，并有一定的时效关系；同时，中药循经敷贴法可能具有预防哮喘的作用。关键词：哮喘；中药；氯化乙酰胆碱；氨茶碱中图分类号：R５６；文献标识码：A；文章编号：１６７２１９７７（２００７）０１００７００４AnexperimentalserumpharmacologicalstudyonanapplicationmethodintraditionalChinesemedicinefortreatmentandpreventionofasthmaHuifengSHEN１，YiqunLI１，RuominJIN２，HeLI１，LiangMIN１１．DepartmentofTraditionalChineseMedicine，RenjiHospital，MedicalCollegeofShanghaiJiaoTongUniversity，Shanghai２００１２７，China２．PharmacologyandSafetyEvaluationLaboratory，ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shanghai２０１２０３，ChinaObjective：Tostudythemechanismofherbalapplicationalongmeridiansfortreatmentandpreventionofasthmabyusingserumpharmacologicaltesttoobservetheeffectsofserumcontainingherbsagainsttheconstrictionoftrachealspiralstripsinducedbyacetylcholinechloride（Ach）．Methods：Guineapigswererandomlydividedintonormalcontrolgroup，normalsaline（NS）applicationgroup，aminophyllineapplicationgroup，aminophyllineinjectiongroup，１dayherbapplicationgroup，７dayherbapplicationgroupand１４dayherbapplicationgroup．AsthmawasinducedbyHutson＇smethodinguineapigsexceptthenormalcontrolgroup．Guineapigsinherbapplicationgroupsweretreatedbyexternalapplicationofacompoundherbalmedicine６０minonceeveryday．GuineapigsinNSapplicationgroupweretreatedbyexternalapplicationofNS．Guineapigsinthetwoaminophyllinetreatedgroupsweretreatedbyexternalapplicationandintraperitonealinjectionofaminophyllineatadoseof４００mg／kg，respectively．Theguineapigswerekilledandtheserawereobtainedafter１day，７dayand１４daytreatmentinthethreeherbapplicationgroups，７daytreatmentintheNSapplicationgroup，theaminophyllineapplicationandinjectiongroups，respectively．Serumpharmacologicalmethodwasusedtodotheexperiment，theeffectsofdifferentseraontheconstrictionoftrachealstripswereobserved，andtheconstrictionrateswerecalculated．·０７·中西医结合学报２００７年１月第５卷第１期　JournalofChineseIntegrativeMedicine，January２００７，Vol．５，No．１Result：TheserumcontainingherbshadaneffectinreducingtheconstrictionoftrachealspiralstripsinducedbyAch，andtheeffectwassimilartothatoftheserumobtainedfromtheaminophyllineinjectiongroup．Theconstrictionrateofthetrachealspiralstripswasdecreasedwhenherbalapplicationtreatmentwasprolongedwithinaperiodoftime，anditbecamestablewhenherbalapplicationtreatmentwasbetween７１４days．TheconstrictionoftrachealspiralstripsinducedbyAchcouldbereducedremarkablywhenitwaspreviouslytreatedbyserumcontainingherbs．Conclusion：Theantiacetylcholinefunctionwithatimedependenteffectisoneofthemechanismsofherbalapplicationtreatmentalongmeridiansforasthma，andfurthermore，herbalapplicationtreatmentalongmeridiansmightbeusefulforpreventingasthma．Keywords：asthma；Chineseherbaldrugs；acetylcholinechloride，aminophyllineShenHF，LiYQ，JinRM，LiH，MinL．JChinIntegrMed／ZhongXiYiJieHeXueBao．２００７；５（１）：７０７３．ReceivedJune２３，２００６；publishedonlineJanuary１５，２００７．Freefulltext（PDF）isavailableat．jcimjournal．com　　中药外敷治疗哮喘就其渊源可追溯到清代张璐的枟张氏医通枠中的白芥子涂法，是具有悠久历史的传统疗法，沿用至今并不断完善发展。但是中药（尤其是复方）作用机制的分析，以往多采用其粗提物进行体外实验，其实验结果不能与体内实验结果和临床疗效相吻合，存在着一定的弊端。本研究拟通过血清药理学实验方法，进行中药外敷治疗哮喘的机制研究。1　材料与方法１．１　实验动物及用药　健康雄性荷兰豚鼠４９只用于造模及制备血清，体质量（２２５±２５）g，由上海交通大学医学院仁济医院动物中心提供；另有健康雄性荷兰豚鼠２８只用于体外实验，体质量（３２５±２５）g，由上海中医药大学动物实验中心提供。将麻黄、细辛、白芥子、甘遂、生姜等１０味中药（饮片由上海市药材公司提供）共研细末，用姜酒（在５０度高粱酒中掺入一定比例的鲜姜汁）调成糊状，乙醇浓度为５０％。每支氨茶碱注射液（２５０mg／１０ml）中加入无水乙醇１０ml（与中药敷贴组姜酒中乙醇浓度一致），配制成含５０％乙醇的氨茶碱溶液；腹腔注射用氨茶碱则浓度不变。１．２　试剂与仪器　鸡卵白蛋白（Sigma公司）用生理盐水配成１％浓度（V／V）；KrebsHenseleit溶液（KH液）［１］用蒸馏水配制至pH６．８～７．０（试剂为市售分析纯）。IM１４２６４型自动平衡记录仪（上海大化仪表厂）；５０１型超级恒温器（上海实验仪器厂）；LW２０１型力位移换能器（上海医用电子仪器厂）。１．３　分组与血清制备　将豚鼠随机分成正常对照组、生理盐水敷贴组、氨茶碱敷贴组、中药敷贴１d组、中药敷贴７d组、中药敷贴１４d组和氨茶碱腹腔注射组，共７组。除正常对照组外，其余６组均采用Hutson法［２］造模哮喘豚鼠，将豚鼠置于密闭玻璃缸中，超声雾化吸入１％卵白蛋白溶液３min致敏，每周１次。致敏２周后，改为每日超声雾化吸入１％卵蛋白溶液３０s，诱发哮喘。诱喘后的豚鼠背部（由颈根部起，相当于人体督脉和膀胱经部位）作３cm×３cm剃毛，中药敷贴组每日用中药敷贴６０min；生理盐水敷贴组采用生理盐水浸润纱布敷贴，氨茶碱敷贴组用４００mg／kg体质量剂量的氨茶碱溶液浸润纱布进行敷贴，两组敷贴方法同中药敷贴组。氨茶碱腹腔注射组按４００mg／kg直接腹腔注射。正常对照组自然喂养７d，中药敷贴组分别敷药１、７和１４d，生理盐水敷贴组、氨茶碱敷贴组和氨茶碱腹腔注射组治疗７d，末次给药１h后断头取血，４０００r／min离心１０min，离心半径为８．９５cm，分离血清后把同一组动物的血清混合，直接放入－２０℃冰箱中冷藏备用。１．４　气管条的制备　豚鼠心脏注射空气处死后，分离出所有的气管，浸没在含氧的KH液中，去除周围的结缔组织，将气管剪成宽约２～３mm螺旋条状，均分２条。一条马上浸入另外的２０mlKH液（３７℃，９５０ml／LO２和５０ml／LCO２）恒温浴槽中，一端固定，另一端连接在力位移换能器上，用自动平衡记录仪画出气管条的收缩曲线。一条待用。１．５　螺旋气管条测试　每组选用８条来自不同豚鼠的气管条。１．５．１　作用机制研究　标本加１g外力，静止平衡气管条１０min；加入氯化乙酰胆碱（acetylcholinechloride，Ach）２００μl到２０mlKH液浴槽中，终浓度为１０×１０７g／ml，１０min后用KH液冲洗；重新静止平衡气管条１０min，再加Ach１５０μl于KH液中，终浓度为７．５×１０７g／ml，收缩到达高峰后记录收缩峰值X０；加入血清１００μl，气管舒张１０min后记录收缩峰值X１。收缩百分比（