江西制药厂实习报告

实习报告实习内容：□认识实习（社会调查）√教学实习（√生产□临床□劳动）□毕业实习实习形式：√集中□分散学生姓名：学号：专业班级：实习单位：实习时间：年月日一、实习内容2012年5月7日至5月15日，我们南昌大学制药工程专业（包括化工制药和中药制药方向）80人在专业课老师刘老师和严老师的带领下赴江西南昌进行为期7天的生产实习，实习单位为江西制药有限责任公司（以下简称江西制药）。1、公司简介江西制药是江西省创建最早的一家制药厂，建于1950年，之前为国营企业，后改为股份制公司，拥有600多名员工。该公司拥有针剂车间、固定制剂车间、输液车间、原料车间、冻干车间和制剂公共车间共6个生产车间，且拥有固体制剂、液体制剂和抗生素原料药等研发技术，取得药品生产批号325个。目前正常生产的药品种类有几十种，主打产品为硫酸小诺霉素，另有针剂、片剂、胶囊、输液和口服液等300多种制剂。其中主产品原料药小诺霉素、C1a碱粉、庆大小诺为国内独家生产。此次我们的实习内容主要是熟悉硫酸小诺霉素的生产流程和相关设备。2、硫酸小诺霉素的性质、结构和功能别名：沙加霉素、硫酸小诺米星、相模霉素。分子式:C20H43N5O11S。硫酸小诺霉素是对庆大霉素产生菌小单孢菌进行诱变育种后得到的代谢产物，组分为C2b和C1a，其中庆大霉素组分C1a是中间体，在其6，-N位置上引入一个甲基即变成C2b，C2b的抗菌活性和毒性方面均优于庆大霉素。硫酸小诺霉素为白色粉末，溶于水，不溶于有机溶剂。硫酸小诺霉素是一种氨基糖苷类广谱抗生素，其阻碍蛋白质合成，对革兰阴性菌显示抗菌活性，革兰阳性菌中部分菌种，如金黄色葡萄球菌对其敏感。用于革兰阴性杆菌所致的各种感染，如菌血症、呼吸系统、胆管、尿路感染等，但会产生耳、肾毒性。局部滴眼治疗敏感菌引起的眼睑炎、泪囊炎、结膜炎、角膜炎等。增强药效：与氨苄西林，头孢哌酮，哌拉西林等β内酰胺类具有协同作用与麻醉剂，肌肉松弛剂合用致呼吸抑制。与强利尿药（如呋塞米。依他尼酸）合用加重耳、肾毒性。分子结构图如下：分子量为561.653、硫酸小诺霉素的工艺流程硫酸小诺霉素的生产采用三级发酵培养，离子交换法分离精制产品。具体流程图如下：浓缩、炭脱浓缩、转盐炭脱转盐、加热浓缩、转盐炭脱整个生产过程可分为四大部分：菌种（砂土孢子——孢悬液）、发酵（一级种子——发酵）、粗提（酸化——层析）、精提。4、菌种砂土孢子母斜面子斜面孢悬液一级种子二级种子发酵酸化、中和、吸附解析脱色浓缩转盐炭脱层析纯C1a普C1a交罐纯C2b冻干纯C1a冻干粉喷粉兽药喷粉硫酸小诺霉素上样、分离兽药4.1、砂土孢子⑴、砂：土=2:1过80目筛（除杂），加酸浸泡，用水清洗至pH=7。⑵、121℃、0.1MPa下灭菌1h。⑶、接孢子。经过选备，通过实验证实。其生产能力不低于当前生产水平的菌种斜面孢子。⑷、真空干燥，24h，且水分保持在10-20%以下，2-6℃可保存一年。4.2、母斜面⑴、固体培养基：孢子接到空白斜面上，空白斜面是加琼脂的固体培养基，培养基灭菌30分培养基成分：琼脂、淀粉、K2HPO4、天冬素、KNO3、麸皮。⑵、灭菌，121℃，1h。⑶、涂布接种，⑷、培养：37℃下培养9~10天。⑸、保存：2-6℃下保存，周期不超过三个月。4.3、子斜面⑴、固体培养基：孢子接到空白斜面上，空白斜面是加琼脂的固体培养基，培养基灭菌30分培养基成分：琼脂、淀粉、K2HPO4、天冬素、KNO3、麸皮。⑵、灭菌，121℃，1h。⑶、母斜制成孢悬液，t涂布在方斜面上，孢悬液用无菌水（自来水灭菌121℃，灭菌一小时）⑷、培养:37℃下培养9天，4℃下保存，周期三个月。4.4、摇瓶⑴培养基：液体培养基（用于培养菌丝）成分：淀粉、玉米粉、黄豆饼粉、鱼粉、蛋白胨、CaCO3、KNO3、（NH4）SO4、食用油。⑵、灭菌：3omin、121℃⑶、接种⑷、培养，35℃，7天⑸、测效价：摇瓶培养7天后测其生物效价。摇瓶装发酵液→硫酸酸化→调PH值至1.0→静置40min→滤纸过滤取30ml配好的料液，加琼脂→消毒→冷却。取5ml检定菌→放入4个牛津杯中→其中2个滴标准液，另两个滴药品→石棉瓦盖住→37℃恒温间16-18h→取出钢管→投影仪观察→圈越大，效价越高挑选达到要求即生产能力好的子斜面。4.5、菌种的选育过程：单孢子悬液→单菌落→初筛→复筛→稳定性具体的过程是：单孢子悬液稀释，用平面皿培养成单菌落，再转移到试管斜面，摇瓶，再进行初筛，在转移到试管斜面，最后进行复筛。稳定性的检测，在5代之内不衰退表示稳定性好。在单孢子悬液时诱变，一般情况下紫外线用的较多，其他的还有化学方法，射线，抗生素，原生质体等。原生质体的效果最快，但是稳定性差。斜面培养基的组分：琼脂，淀粉，碳酸钙，硫酸镁，硝酸钾，天冬素，氯化钠。5、发酵5.1、一级种子培养基成分：葡萄糖、淀粉、玉米粉、黄豆饼粉、蛋白胨、CaCO3、KNO3、CoCl2、泡敌。接种方法：改变罐内压力，利用压力差将孢悬液吸进罐内。接种时周围用火焰保护，以保证纯种培养。料罐1t，培养基5t，在36~37℃、0.07MPa条件下培养4天。取样口接种子，早晚各一次取样，试管三分之二的位置，37℃恒温培养，点电炉上干燥，加碘，染色一分钟，观察菌丝形状，在显微镜下观察菌丝呈菊花状，周边散开。灭菌121℃，30分钟空消121℃，1小时无杂菌时，可移至二级罐培养。一级种子是菌种处于潜伏期。5.2、二级种子培养基成分与一级培养基相同，但配比不同。共有十个二级罐。二级罐与一级罐区别：无夹层、无挡板，以列管代替。空气从底部进入，避免多余死角（一级罐从上部进入）。基础料5t，在34℃、0.05MPa下培养1天，直至菌丝量达95%以上，菌丝呈网状时可移至发酵罐。二级种子是菌种处于对数生长期，菌体大量繁殖。5.3、发酵34℃、34℃±℃，1培养4天。菌种形态为胶状，此时菌种处于稳定期，大量产生代谢产物。发酵罐设计工艺：一级罐：960r/m，4kw，3t；二级罐（4组列管）：730r/m，15kw,12t；发酵罐（6组列管）：590r/m，115kw，65t。发酵罐外部管道分布：“三进三出”，右边进空气、水、培养基，左边出排气、一级移种/二级移种/发酵罐放罐、物料。绿色管道进水，黄色进氨，白色进生物料，黑色排污，银灰色进蒸汽，蓝色进空气。天花板处运输管道分布：低温最下面，往上逐渐升温，蒸汽在最上端。一级发酵罐视镜移种空气进排气水出人孔接种搅拌轴水进空气进水进排水蒸气接种空气出夹层水出一级发酵罐排气接种水出水进空气进排管二级发酵罐二级发酵罐三级发酵罐排气接种水出水进空气进排管二级发酵罐放罐移种5.4、无菌空气制备空气除油后加热才能进入总过滤器，目的是提高露点，从而得到相对干度高的饱和空气。5.5、染菌检测镜检法：显微镜下观察菌体形态，检查发酵液是否染杂菌。肉汤检测法：取发酵液在肉汤中以37℃培养，观察肉汤是否变色。正常情况下为红色，若变为黄色，证明染产酸菌；若变为玫瑰红，证明染产碱菌。染菌后各罐处理方法：一级罐，加热至100℃；二级罐，加热至100℃，若染菌不严重，通过降温使杂菌转为芽孢；发酵前期，重新灭菌，重新接料；发酵后期，危害不大，可视杂菌量降温2~3℃。5.6、化学检测主要测4个参数，即还原糖、pH、粘度和氨基氮。1、测总糖还原糖测定用碘量法。具体操作：①0.5ml滤液+5ml蒸馏水+5mlHCl，于碘量瓶中加热煮沸3min，静置冷却至室温；②加入2~3滴酚酞，用30%NaOH中和至红色，然后加入斐林试剂10ml，加热煮沸3min，冷却；③加入7.5ml浓H2SO4，以0.1mol/L的Na2S2O3标准液滴至溶液呈淡黄色时加淀粉指示剂1ml，继续滴Na2S2O3至蓝色刚褪去即可。2、测pHpH值用pH计或pH纸测，正常为7.0，实际检测中常小于7，允许0.5的偏差。3、测粘度用粘度计不定期地测定三级发酵罐中发酵液粘度，以确定其中的溶氧量，采气预过滤压缩空气冷却除油气（丝网除沫器）加热（45℃）总空气过滤器预空气过滤器精空气过滤器进罐从而控制通气量，保证微生物正常生长。正常值为2000Pa。4、测氨氮用甲醛法测含氮量，一、二级罐直接取发酵液，三级罐取滤液，操作方法为①2ml滤液+10ml水+2滴甲基酮+H2SO4至混合液变红色，再加NaOH至橙色；②在液体中加入3ml中性甲醛和2滴酚酞指示剂，静置10min，加NaOH滴定至橘红色。计算NaOH用量。若氨氮偏高，说明可能染菌5.7、生物检测主要是测定生物效价。生物效价就是抗生素对微生物的杀灭或抑菌作用的强弱程度，测量方法为管碟法，观察抑菌圈的大小，抑菌圈越大，效价越高。检测温度：37℃；时间：16~18h。中间体（标准品庆大霉素、检测菌短小芽孢杆菌）测一剂量，成品（标准品硫酸小诺霉素、检测菌枯草芽孢杆菌）测双剂量。下图为培养皿中各抑菌圈的大小糖含量g/100ml氨氮量mg/100ml一级种子罐1.5-2.015-20二级种子罐2.5-3。020-25发酵罐5.0左右约30标准样圈样1样2样2样1标准品发酵液剂量的检测通过测量观察发酵液中有效成分对培样基中细菌抑制圈的大小来判断发酵液中有效剂量。标准品：庆大霉素检测菌：短小芽孢杆菌标准品：小诺霉素检测菌：枯草芽孢杆菌(1)(2)发酵中一级，二级和发酵罐一些参数如下：6.提取6.1、酸化、中和、吸附用98%工业H2SO4酸化发酵液至pH1.5~2.0，以释放出抗生素。稳定15s后用30%工业NaOH中和至6.4~6.8，此操作有利于保护设备，也有利于吸附。然后投入732#树脂吸附5h以上，当空投树脂变为饱和树脂后，抗生素被完全吸附。洗树脂：先过滤，将大块石头滤掉。一级分离器用于分离出80%的饱和树脂，二、三级分离器分离剩下部分。然后饱和树脂进入漂洗柱漂洗，水从下往上逆流，废渣从柱顶管道流出，树脂从柱底管道抽入离子交换罐。该离交罐容积为3t，一般装2t树脂。一级种子罐二级种子罐发酵罐规格型号Ф1100×2800Ф1800×4500Ф3200×7500编号110102-B1-105110102-B1-206110102-B1-307个数61012重量（吨）31265功率（瓦）400015000115转速（转/分）960730590有无夹套有夹套，有挡板无挡板，四个列管六个列管阀门数依次增加放酸放碱放树脂放饮用水放罐6.2、解析脱色从左至右管道分布：进饮用水、纯化水、稀酸、稀氨、5%氨水、串酸；出反饮用水、反纯化水、串酸、解析液。纯化水去Cl-。稀酸去Ca2+、Mg2+等杂质，具体用量为0.4%稀HCl（以HCl和无盐水稀释）100t洗掉2t树脂中的Ca2+、Mg2+。0.1~0.12%稀氨去小组分，直至pH控制在10左右即洗完。用5%氨水15t解析树脂，可使抗生素和色素均从树脂中分离出来。此时饱和树脂变为空白树脂，可循环利用。解析液用711阳离子树脂吸附脱色，树脂固定。若脱色效果不好，需再生树脂。方法为先用7%HCl15t浸泡，静置3h，冲成中性。然后加入4%碱15t，静置3h。最后用无离子水冲洗。6.3、浓缩收集的约15t脱色液中只有抗生素和氨水，先用薄膜蒸发器以3t/h的流量将大部分氨水分离出来，大约耗时4~5h。再将滤过液通过浓缩塔，利用氨水在真空中易挥发的特性使剩余氨水在80℃下气化，耗时1~2h。设备图如下：废氨罐脱色液1231、2、3浓缩罐蒸汽氨水薄膜蒸发器旋风分离器冷凝器6.4、转盐、炭脱将浓缩液通入装有60%-65%硫酸的罐中，将抗生素转化为能稳定存在的硫酸盐，之后再通过活性炭层，除去色素和热源。6.5、层析洗脱方式分为简单洗脱、分步洗脱和梯度洗脱三种，工艺上采用分步洗脱。这种方法是用按洗脱能力递增的顺序排列的几种洗脱液进行逐级洗脱，适用于组成简单、各组分性质差异较大或需快速分离的混合物。工业上采用离子交换树脂柱，以大孔树脂作为吸附剂。层析时流量为3~5m3/min，层析顺序为：放样、通入空气，压低液面、加入0.5%氨水除去小组分、加入4%的乙醇得到含C1a的层析液、加入8%