中药葛根煎剂对小白鼠乳腺组织形态结构的影响

中药葛根煎剂对小白鼠乳腺组织形态结构的影响巴音吉日嘎拉1金晓2巴雅尔1额敦仓11.内蒙古农业大学动物科学与医学学院0100182.内蒙古自治区动物防疫监督检验所010051摘要：试验动物选用16只20日龄的雌性小白鼠，随机分成对照组和试验组，试验组小白鼠第28天起每天口服0.25ml（0.5g/ml）的葛根煎剂，至43日结束。结果表明:(1)葛根煎剂对小白鼠乳腺发育起促进作用。实验组小白鼠乳腺导管数量要明显比实验组的多，分布较广泛，末端分支较多。(2)葛根煎剂对小白鼠的体重以及乳腺比重无明显作用。（3）葛根煎剂对小白鼠有一定的雌激素样作用。关键词：葛根小白鼠乳腺葛根（puerariaLobata）药材RadixPuerariae隶属豆科（或称蝶形花科），是多年生落叶藤本植物野葛的根块。葛根藤长达10m。一般秋季开花，花呈紫红色蝶形，叶为三出复叶互生，衬托盾形，其根块粗大肥硕，外皮灰黄色，内部粉质。呈纵切的长方形厚片或小方块，长5～35cm，厚0．5～lcm。外皮淡棕色，有纵皱纹，粗糙。切面黄白色。质韧，纤维性强。无臭，味微甜。性凉，味甘、辛。性喜温暖、潮湿环境，但能耐寒耐旱。全国大部地区有产，分布辽宁、河北、河南、山东、安徽、江苏、浙江、福建、台湾、广东、广西、江西、湖南、湖北、四川、贵州、云南、山西、陕西、甘肃等地[7]。葛根含多种黄酮类成分，主要活性成分为大豆素(daidzein)、大豆甙（daidzin）、葛根素（puerarin）、葛根素-7-木糖甙（puerarin-7-xyloside）等。异黄酮类化合物是葛根的主要有效成分，且在葛根中含量较多，主要有葛根素、黄豆甙和黄豆甙元。日本以黄豆甙、黄豆甙元及葛根素作为评价葛根的指标[5]。一般生产性葛根提取物中，葛根素含量25%，黄豆甙含量2%，且微量元素丰富，每切09原粉含钙109.4mg，铁3.46mg，磷0.59mg，钾55.6mg，锌25.5mg，锰0.56mg。《本草纲目》葛根，气味甘、辛、平，无毒。生根捣汁饮、蒸食，干片泡饮：止泻，排毒，利大小便，解酒，去热……常用于外感头痛，发热、无汗、项背强痛等证。葛根解表发汗。对风寒表症常与桂枝、麻黄、白芍等同用；如风热表症兼有内热则宜配伍黄芩、石膏、柴胡等药以解肌清热，如柴葛解表汤。麻疹初起，发热、恶寒、疹出不畅之症。葛根能解表发散，可助其透发。常与升麻同用，如升麻葛根汤。湿热泻痢及脾虚腹泻等症。本品能升发清阳，舞脾胃清阳之气上行而奏止泻痢之效。湿热泻痢多与黄芩、黄连等配伍，如葛根芩连汤，治痢疾身热症；若脾虚气弱的腹泻，则多配伍党参、白术、木香等药，如七味白术散。热病烦渴及消渴证口渴多饮。本品有生津功效。可单用或配伍麦冬、天花粉、地黄等药，如玉泉散。用量10-20g，煎服或丸散。止泻宜煨用[6]。随着科技的不断发展，近年来，国内外医学工作者对葛根的进一步深入研究表明，葛根素、葛根素木糖甙、金雀异黄素、大豆甙、大豆甙元等异黄酮类化合物是葛根的主要有效成分。日本以葛根素、大豆甙及大豆甙元的含量，作为评价葛根质量的指标。葛根异黄酮类化合物对人体具有以下生理功能：扩张冠状状动脉、降低血压阻力、促进心脑血管、视网膜血流的作用；降血压、降血糖、降血脂作用；舒张平滑肌解除痉挛作用；抗促癌及诱导癌细胞分化作用；抗氧化作用；降低血醇浓度解酒作用；解热和提高学习记忆功能及增强机体免疫力的作用。临床上适用于治疗冠心病、心绞痛、眼底病、突发性耳聋、偏头痛、颈椎病等等[8]。本次实验目的主要证明葛根煎剂在小白鼠乳腺发育方面的作用，以组织学的方法去观察，从而进一步发掘中药葛根的药理作用及作用机理，也是为下一步的探索打好基础。1材料及方法1.1材料1.1.1动物：清洁级纯昆明种小白鼠，由内蒙古大学实验动物研究中心提供。自由饮水，固体颗粒饲料饲养，白天灯光来保持温度，晚上关灯。1.1.2药品：葛根由内蒙古农业大学兽医院提供。1.1.3主要仪器：组织学显微镜，解剖学显微镜，倒置显微镜，天平，和其他仪器与工具。1.2方法1.2.1配药200g葛根+水（煎30分钟）→取上液→三次煎→离心（自然沉淀）→浓缩（400ml）即相当于生药0.5g/ml。1.2.2方法20日龄的16只体重12±3克雌性小白鼠.随机分两组（对照组和实验组），一窝中具体分为实验组和对照组；尽量避免遗传因素的差异，实验组的药量为0.25ml/只（第28日龄开始给药）每天上午9-10点之间用注射器灌入胃内，连续16天给药。对照组也同样方法给0.25ml/只蒸馏水。1.2.3屠宰小白鼠：将给药后第16天（43日龄）屠宰，然后解剖，取乳腺、子宫、卵巢，称重，记录。1.2.4材料的制备把小白鼠屠宰后取出乳腺称重，一侧制作乳腺标本，观察乳腺发育结果。判断标准为：用解剖镜观察乳腺标本时，乳腺导管发达、末端分支较多、导管得分布面积达到整个乳腺域的4分之3以上得判为“++++”，其覆盖面积能达到3分之2以上得我们判为“+++”，覆盖面积一半以上得我们判为“++”，导管分布一半以下的、末端分支不明显的判为“+”。一侧乳腺的中央淋巴管前沿横切面处取材，制作切片，H·E染色，低倍镜下数导管数量，高倍镜观察组织结构。2结果2.1测量乳腺重量、乳腺导管数量及分枝数量表1对体重的影响（单位：克）实验结果证明：实验组与对照组的日增体重比P0.05，差异不显著。1-4天平均5-8天平均9-12天平均13-16天平均日增体重日增体重日增体重日增体重对照组0.56±0.160.19±0.100.26±0.370.24±0.22实验组0.51±0.120.26±0.070.19±0.160.19±0.17表2.对乳腺重量的影响实验结果证明：实验组与对照组乳腺重量比P0.05，差异不显著。表3.实验组与对照组乳腺导管数量和乳腺发育情况实验结果证明：实验组与对照组乳腺导管数量比P0.01，差异极显著。2.2组织学观察从组织切片上看对照组的横切面导管分布集中于中心部位数量也少，叶间导管不多，间质多（图1）。相比较下实验组的导管分布比较均匀且数量比较多，叶间导管较多，间质少（图2）。在解剖显微镜下看乳腺标本有同样的结果，对照组的乳腺导管覆盖面比较小，实验组的乳腺导管覆盖面广，可以说是全面覆盖（图3和图4）。实验组结果证明，对其导管分布面积与乳腺导管数量都有作用，但是小白鼠的体重增加没有明显作用，且对乳腺重量也无明显影响。3讨论本次实验证明中药葛根煎剂对小白鼠乳腺发育切实起到促进作用，其机理有下面几点：曾郭建平等报道,葛根中的成分葛根总黄酮对脑缺血有保护作用。葛根总黄酮注射于麻醉犬的颈动脉能使脑血流量迅速而明显地增加，脑血管阻力降低，给高血压动脉硬化的患者肌肉注射，则可使脑血管阻力减少，血流入时间缩短，波幅和快流段增加，波形好转，其作用温和，并非单向扩张血管增加血流，而是使低幅波升高，高幅波降低,使异常波趋向正常[1]。由此可知，葛根对大脑的作用进而加强了脑垂体的正常生理活动，其激素分泌水平也起到保障或者是促进作用。因为乳腺的发育受到各种激素的调控。比如雌激素、孕激素、生长激素、促肾上腺皮质激素、催乳素等……[4]葛根提取液对乳腺的发育的促进作用是可能这些激素的分泌与调节所致。另外实验证明葛根总黄酮使血流量增加、血管阻力下降，剂量增大作用加强，和改善微循环作用。葛根素无论对正常金地鼠微循环，还是对局部滴加去甲肾上腺素引起的微循环障碍都有明显的改善作用，主要表现为增加微血管运动的振幅，提高局部微血流量[3]由此可认对乳腺血管微循环也起到一定作用，改善微循环，必然对乳腺的发育起到了一定的促进作用。乳腺的发育主要受内分泌系统的调控神经系统也参与调节。雌激素在乳腺发育中起着关键的作用。它可刺激乳腺导管生长，显著增加乳腺细胞的孕酮受体数目，而后者则是雌激乳腺重量乳腺重量/体重（%）对照组0.13±0.0260.55±0.12实验组0.13±0.0550.55±0.24乳腺导管++++++++++对照组12.5±5.590143实验组19.2±5.74**2321素与孕激素协同作用，促进乳腺小叶腺细胞发育的基础，在青春期和妊娠期雌激素与孕激素协同刺激乳腺的发育[4]。异黄酮植物雌激素(Ifv-D)是一类广泛存在于天然豆科植物中的生物活性物质，其结构和功能类似于17-β雌二醇。该化合物具有雌激素和抗雌激素的双重作用，Ifv-D具有提高乳腺器官发育，我们研究目的是要探讨一种异黄酮植物雌激素—葛根中异黄酮的的影响，科研发现，葛根含大量的异黄酮活性成分，也就是天然的植物雌激素。它的结构与体内的雌激素相似，可以起到模拟、干扰、双向调节内分泌水平的生理生化作用，乳腺的发育主要受雌激素和孕酮的调控。但乳腺的发育要延续到哺乳早期。而具有雌激素活性的大豆黄酮能促进乳腺发育，催乳素升高[2]。这方面的因素导致了实验组小白鼠的乳腺比对照组乳腺发育更为明显。异黄酮植物雌激素大豆黄酮其结构类似于17β雌二醇，它是通过与雌二醇受体结合而发挥作用[2]。显然实验组有异黄酮所作用，而对照组只有单纯的自身雌激素所作用，其结果对于乳腺的组织结构的变化起到了上述作用。在这个问题上我的看法是葛根的有效成分可能直接作用卵巢，对其的激素分泌起到促进作用从而刺激了乳腺的发育正如前文中所提到的一样对垂体的机能有促进作用从而又间接的调整了卵巢的激素分泌水平又是一个不可忽略的因素。葛根中的植物雌激素成分异黄酮也有可能起到样雌激素作用直接作用乳腺，象雌激素一样增加了其孕酮受体的数目进而对乳腺的发育起到加强的作用，从另一个角度考虑更象是异黄酮增加了孕酮受体的亲和力，促进了与孕激素的结合和与雌激素的协同作用。实验证明葛根煎剂对于小白鼠的乳腺发育起到促进作用。关于其作用机理及药物有效成分需要待进一步的去研究。参考文献1．郭建平.孙其荣,周全《葛根药理作用研究进展》中国人民解放军第二军医大学药学院(上海200433)。2．刘根桃,陈杰,韩正康《异黄酮植物雌激索(IFv一D)对哺乳母猪作用的研究》《畜牧与兽医》(29卷)1997年第l期。3．段重高《中华医学杂志》，1991;71(9):5164．王月影《动物乳腺发育的调控》AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine2002第7期34卷。5．周远鹏《葛根的药理作用和临床应用研究进展》。中西结合杂志，1984，11(4):6996．顾志平《中药葛根资源的调查研究》.中药材，1993年10(8):13-147．郭建平《葛根药理作用研究进展》.中草药，1995，26(3):1638．尹世强.《中药葛根研究进展》.天津中医学院学.2001（9）第3期；9．郑高利郑东升张孟等.《葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样活性》.中药材.2002（8）第8期；附图说明图1（对照组，10×10）图2（实验组，10×10）图3对照组图4实验组