全自动病毒定量PCR系统介绍

RocheMolecularDiagnosticsNovember2011Guangzhou罗氏全自动病毒定量系统介绍Cobas®AmpliPrep/Cobas®TaqMan®SystemIntroductionMultiCentreEvaluationStudyCOBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®/cobasp630第一台真正意义上全自动实时荧光定量PCR平台DegreeofAutomationTestvolume/year5,0005,000–10,00010,000样品进--结果出COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®实现全自动核酸提取，无手工干预步骤全自动核酸提取及PCR反应体系制备可同时处理72个样本仪器运行过程连续,实现隔夜操作*PendingFDAapprovalforuseintheUSCOBAS®AmpliPrep®/COBAS®TaqMan®SampleRacks（样品架）SPURackArea（样品处理单元）K-Tubes,K–Tips（输出管）ReagentRacks（试剂架）TransferHeads（机械手）准确的样本ID记录•每个样本对应唯一的条码夹，实现结果追踪灵活的流程设计•连续上样•3个样品架,可同时放处理72个样品•灵活的待测样品数量,每个样品架可放置1-24个样品•可同时处理不同检测项目的样本封闭的样品管设计•减少样本间交叉污染COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®具有最灵活的上样流程RocheCOBAS®AmpliPrep®/COBAS®TaqMan®48:试剂盒中包括所有的核酸提取及PCR反应所需试剂批号有效期校准信息质控品范围内部标准品浓度Ready-To-Use（即开即用）密封保存，确保试剂稳定条码设计实现信息自动加载及使用状况追踪独立的SPU中进行样品处理,防止交叉污染每个样品管与其SPU位置对应，确保最近路径加载方便样品处理单元设计独特的SampleProcessingUnits(SPU,样品处理单元)减少交叉污染样品吸头37oC反应槽吸液栅废液池滤芯试剂注入口•每个样本对应一个独立的SPU•全部提取、纯化过程均在独立的SPU中完成•倾斜式的试剂注入口，最大程度避免气溶胶产生•每个样品产生的全部废液均封闭收集在对应的SPU中，方便实验室污物处理设计独特的SampleProcessingUnits(SPU,样品处理单元)减少交叉污染扩增试剂进入下一步PCR反应从封闭样品管到封闭PCR反应管多重防污染设计，最大程度减少污染纯化核酸COBAS®TaqMan®/COBAS®TaqMan®48拥有独立的24孔加热模块COBAS®TaqMan®4个独立加热模块COBAS®TaqMan®482个独立加热模块COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®TestHBV检测工作流程10:0011:0012:001:002:003:004:005:006:009:007:0024Tests24Tests1st24TestResultswithin5hours.24Tests24Tests24Tests24Tests72TestResultswithin8hours.Hands-ontimeCOBASAmpliPrepCOBASTaqMan4824Tests24Tests96TestResultswithin10hours.DNA/RNA1.裂解、稳定和去蛋白2.核酸捕获病毒或细胞3.冲洗4.洗脱37°C孵育室温80°C孵育COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®先进的MGP磁珠分离技术，提高纯化率罗氏独有的内部标准品定量方法消除管间差异内部质控品无需外部定标避免额外定标产生的损耗内部标准品（QuantificationStandards,QS）:将已知浓度的人工构建核酸，加入至每个样本管中，与样本一同提取、扩增；根据内标的Ct值对靶标定量COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®最优化的系统设计，提供可信赖的结果AmpEraseRocheuniqueSPUClosedtubeformatOnboardUVlightEasyToUseReagent1.2x108IU/mLHBVNCLPCHPC-+--+-阴性质控品低浓度阳性质控品高浓度阳性质控品正常人血浆SK24Rack1NCLPCHPC+-++-+SK24Rack2NCLPCHPC-+--+-SK24Rack3NCLPCHPC+-++-+SK24Rack4每批4架重复检测5批样本棋盘放置研究显示零交叉污染结果:全部阴性质控品及正常人血浆结果报告均为“TargetNotDetected”*RocheInternalStudies–DataonFileSuperiorAnalyticalStandard优化设计，减少交叉污染，确保特异性ChoiceofPCRtargetisfundamentaltoassayperformanceHBVGenomeCOBAS®TaqMan®HBVTesttarget:precore/coreregion:•Clinicallyvalidated•Conservedtoprovidewidegenotypecoverage•Avoidscommonmutations—YMDD—Doublecoremutation—Commonprecoremutation***SuperiorAnalyticalStandard扩增片段选择是PCR检测性能的基础COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®System为实验室提供高通量并且经济、灵活的解决方案CAP/CTMHBV,HCV,HIV-1MTBCTTNAICMVcobas®4800System实现多种标志物的全自动平台化检测cobas®4800v1.1HPVCT/NGcobas®4800v2.0BRAF,KRAS,EGFR,PI3Kcobas®4800v2.1HPV,CT/NG,HSVBRAF,KRAS,EGFR,PI3KMRSA/SA,C.diff罗氏分子诊断的多平台整合策略BloodScreeningVirologyHPV&CT/NGMicrobiologyGenomics&OncologyNewGencobas®4800System引领分子诊断领域持续创新•研究对象三种国内常用的检测试剂：国产试剂1国产试剂2COBAS®TaqMan®HBV•目的准确性、溯源性重复性特异性CHIMESTUDYAPASLPoster2011华西医院采用CAP/CTMHBV检测20例治疗48周普通PCR报告HBVDNA1000copies/ml样本的结果分析20例患者组成特点--9例服用ETV、11例服用ADV（48周）--10例大三阳、8例小三阳患者、2例小二阳患者检测试剂病例数HBVDNA分布范围国产HBV20例1000copies/mlCAP/CTMHBV11例8例*1例TargetNotDetected103~104copies/ml104~105copies/ml*包括1例服用ETV患者普通PCR法“假阴性”率高达45%(9/20)CAP/CTMHBV检测帮助临床医生更准确监测疗效及判断治疗终点Doingnowwhatpatientsneednext