药效研究

GZDX的药效研究了药理作用贵州大学动物科学学院的影响绍1药物2法3论4绍16药物27贵州大学动物科学学院贵州大学动物科学学院开题报告穿心莲提取物对大白鼠呼吸系统免疫功能的影响专业：基础兽医研究方向：药理学指导老师：吕世明陈眷华学生姓名：韩俊伟贵州大学动物科学学院建议：1换模板，清楚些2技术路线重写3我写出的提纲后补充内容4ppt只写提纲，内容用背贵州大学动物科学学院目录一．课题来源六.课题时间安排二．研究目的及意义七.科研工作基础三．国内外研究现状八.可行性分析四．研究内容九.拟解决问题五．研究方案十.参考文献贵州大学动物科学学院一课题来源博士启动基金贵州大学动物科学学院二.研究目的及意义近年来我国畜牧业发展十分迅速，同时每年因呼吸系统疾病给整个行业带来巨大的经济损失，然而抗生素的滥用使菌群产生耐药性，影响其治疗效果，另外药物残留问题严重威胁着人们的身体健康，中药穿心莲制剂以其对呼吸系疾病的显著疗效及无残留无毒副作用，越来越受到人们的重视，因此对穿心莲制剂的抗病机理研究在生产和科研中都具有较为重要的应用和研究价值。一则为临床上科学地利用穿心莲制剂提供科学依据；二则为国内外研究工作者对中草药的研究和开发给予新的启示。贵州大学动物科学学院畜牧业的快速发展，疾病尤其是呼吸系统疾病增多。1抗生素及合成类抗菌药物广泛使用对畜牧业的生产及人类健康构成威胁。中医临床应用穿心莲治疗呼吸系统疾病有很长的历史，并且有较好的疗效，而且低毒低残留。穿心莲及其提取物治疗呼吸道感染的机制还未研究清楚。贵州大学动物科学学院本研究在建立大鼠鼠伤寒沙门氏菌呼吸道感染模型的基础上，研究应用穿心莲内酯治疗后鼠的肺脾指数、肺组织织病理变化、呼吸道特异性及非特异性免疫状况，以探索穿心莲内酯在治疗呼吸道疾病的作用机理，为穿心莲及其制剂的开发和临床上科学地利用提供依据。贵州大学动物科学学院三.国内外研究现状及水平穿心莲为爵床科植物的干燥地上部分，原产于菲律宾、印度、斯里兰卡、泰国等热带地区，20世纪50年代引入我国广东、福建等省，后转移到西安、北京、四川等地引种成功。穿心莲的化学成分主要为二萜酯和黄酮类化合物，具有清热解毒、凉血消肿等功效，临床上多用于上呼吸道感染、急性菌痢、胃肠炎、感冒发热及高血压等心血管疾病的治疗[1]。随着西药抗生素滥用及不良反应的增加，开发具有良好抗菌消炎效果的中草药的呼声越来越高，穿心莲作为疗效显著的中药，越来越受到医药界关注。现将近年来国内外在中药穿心莲防治呼吸道疾病的研究简单概述如下：贵州大学动物科学学院穿心莲属。。。科植物，XSVCGWVB来源。。。主要成分，穿心莲内酯。。。。。功效临床应用随着西药抗生素滥用及不良反应的增加，开发具有良好抗菌消炎效果的中草药的呼声越来越高，穿心莲作为疗效显著的中药，越来越受到医药界关注。现将近年来国内外在中药穿心莲防治呼吸道疾病的研究简单概述如下：贵州大学动物科学学院抗炎调节免疫氧化自由基自体活性物质NO抗癌、抗肿瘤抗动脉粥样硬化临床应用贵州大学动物科学学院国外研究表明:穿心莲内酯能够抑制人中性粒细胞内蛋白激酶介导的活性氧自由基生成和整合素Max1的上调,从而减少中性粒细胞的粘附与穿壁过程[2-5]；shinjifushiya实验室报道穿心莲内酯能够抑制小鼠巨噬细胞产生NO的过程[6]。另外有报道穿心莲内酯也具有其他的药理作用；SriramRajagopal等报道穿心莲内酯可以通过上调细胞周期抑制蛋白p27的表达和下调细胞周期激酶cdk4的表达，使肿瘤细胞的分裂停留在G0/G1期，并且调控淋巴细胞的增殖和IL-2、TNF-a等的表达，增加淋巴细胞对肿瘤的杀伤力[7]。ChenJiun-Han等报道穿心莲内酯能够通过激活PI3L-Alt-BAD信号通路而抑制内皮细胞发生凋亡,从而用于治疗动脉粥样硬化[8]等等.贵州大学动物科学学院国内研究表明：穿心莲内酯能够抑制TNF-a、IL-1B和LPS等炎症因子刺激下血管内皮细胞中NF-kB信号通路的活化，从而减少细胞表面粘附分子的表达，从而阻断白细胞在内皮细胞表面的粘附；另外还能够抑制TNF-a、IL-1B和LPS等诱导的腹膜炎模型中白细胞向腹腔的浸润，抑制LPS引起的内毒素休克，以及嗜酸性粒细胞介导的过敏性呼吸道炎症［9］。另外大量的临床研究表明穿心莲内酯在呼吸系统疾病治疗中具有显著疗效［10-13］。贵州大学动物科学学院国内外大量研究资料证明穿心莲在治疗呼吸道疾病如上呼吸道感染、急性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、急慢性支气管炎等确实有显著的治疗效果[10]。然而对于穿心莲治疗呼吸道疾病的作用机理、抗炎、免疫调节作用的机制仍然知之甚少。因此本研究以大白鼠为研究对象，观察穿心莲内酯对大白鼠呼吸系统免疫功能（尤其是呼吸系统非特异性免疫功能）的影响。希望能够从免疫调节领域解释穿心莲内酯的部分作用机制，贵州大学动物科学学院四.研究内容以大白鼠为研究对象，观察对照组、模型组、及穿心莲内酯高、中、低剂量组大白鼠肺脏组织学和病理学变化。对上述各组大白鼠肺脏指数、脾脏指数及胸腺指数进行比较分析。通过对大白鼠支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞吞噬率、溶菌酶的含量的测定，探讨穿心莲内酯对大白鼠呼吸道非特异性免疫的影响。贵州大学动物科学学院穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠肺、脾及胸腺指数的影响穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠肺病理学变化的影响穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞，淋巴细胞的影响穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠肺门淋巴结抗体形成细胞数的影响穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠肺门淋巴结抗体形成细胞数的影响穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠血中IgG、IgA、IgM滴度的影响穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠支气管肺泡灌洗液中溶菌酶含量的影响穿心莲内酯对鼠伤寒沙门氏杆菌呼吸道感染鼠支气管肺泡灌洗液中sIgA含量的影响贵州大学动物科学学院ELISA方法对各组大白鼠支气管肺泡灌洗液中sIgA(分泌型免疫球蛋白Ａ)含量的测定，分析穿心莲内酯对大白鼠呼吸道黏膜免疫的影响。通过对大白鼠支气管肺泡灌洗液中Ｔ淋巴细胞细胞的检测和肺门淋巴结抗体形成细胞数的测定，观察穿心莲内酯对大白鼠呼吸系统特异性免疫的影响。贵州大学动物科学学院五.技术路线及研究方法⑴测定并计算大白鼠肺脏、胸腺及脾脏指数用电子天平称量分别称量大白鼠自身、肺脏、胸腺及脾脏的重量，计算出肺脏、胸腺及脾脏指数。⑵对大白鼠肺脏组织学检查用ＨＥ染色法观察大白鼠肺组织及支气管的病理变化。⑶对大白鼠呼吸道非特异性免疫指标试验研究①大白鼠支气管肺泡灌洗液巨噬细胞吞噬率的检测瑞氏染色法油镜下计数100个肺泡巨噬细胞中吞噬细菌的细胞数，计算肺泡巨噬细胞吞噬百分率。贵州大学动物科学学院②大白鼠支气管肺泡灌洗液中溶菌酶含量的测定琼脂糖火箭电泳法，测定支气管肺泡灌洗液中溶菌酶含量③大白鼠支气管肺泡灌洗液中sIgA(分泌型免疫球蛋白Ａ)含量的测定ＥＬＩＳＡ法，测定大白鼠支气管肺泡灌洗液中sIgA含量⑷大白鼠呼吸道特异性免疫指标试验研究①大白鼠支气管肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞的检测酸性a-醋酸萘酯酶法，油镜下100个淋巴细胞中成熟Ｔ淋巴细胞的个数，计算其百分率。①大白鼠肺门淋巴结抗体形成细胞数测定取已处理过的细胞悬液一滴制成湿片，高倍镜下观察计算术500个淋巴细胞中与绵羊红细胞结合呈花环结构的细胞数目，即为淋巴细胞玫瑰花环形成率。贵州大学动物科学学院六.课题时间安排2006，9—2007，1：搜集资料，完成综述。2007，3—2007，4：做预实验，熟悉大白鼠呼吸系统的解剖结构，掌握支气管肺泡灌洗液中溶菌酶、sIgA（分泌型免疫球蛋白Ａ）、巨噬细胞及Ｔ淋巴细胞的测定方法。2007，4—2008，5：正式试验，完成所有预定研究内容。贵州大学动物科学学院七.科研工作基础已完成资料搜集和综述工作，并通过预实验学习了大白鼠白鼠支气管肺泡灌洗液的提取;通过研究分析筛选出溶菌酶测定的最适方法。贵州大学动物科学学院八.可行性分析本实验室多年来从事对中草药的研究，已对单味药丁香酚，白头翁及复方制剂六味地黄丸，乌梅加白散等进行了试验并取得一定的研究进展，这些研究可为本研究工作提供可靠的实验室工作经验。通过对国内外穿心莲提取物的作用机制研究文献的复习，我们已对穿心莲提取物，主要是穿心莲内酯的作用机理研究进展和研究方法有了比较详细的了解，为本次研究工作的开展提供了宝贵的参考资料。利用本实验室设备及其他实验室仪器，基本上能满足研究工作的需要。贵州大学动物科学学院九.拟解决的问题[1]穿心莲内酯最适试验浓度的选择[2]典型组织切片的筛选[3]支气管肺泡灌洗液中溶菌酶和sIgA(分泌型免疫球蛋白A)的测定贵州大学动物科学学院十.附：参考文献[1]郭蓓。穿心莲的研究及临床开发。药学进展[M]，2004，28（12）：542-547[2]Chiou,W.F.,Lin,J.J.,andChen,C.F.Andrographolidesuppressestheexpressionofinduciblenitricoxidesynthaseinmacrophageandrestoresthevasoconstrictioninrataortatreatedwithlipopolysaccharide.Br.J.Pharmacol.1998(125):327-334.[3]SHEN,Y.C.,Chen,C.F.,andChiou,W.F.suppressionofratneutrophilreactiveoxygenspeciesproductionandadhesionbythediterpenoidlactoneandrographolide.Planta.Med.2000(66):314-317.[4]Chiou,W.F.,Chen,C.F.,andlin,J.J.Mechanismsofsuppressionofinduciblenitricoxidesynthase(iNOS)expressioninRAW264.7cellsbyandrographolide.BR.J.Pharmacol.2000(129):1553-1560.[5]Shen,Y.C.,Chen,C.F.,andChiou,W.F.Andrographolidepreventsoxygenradicalpraductionbyhumanneutrophols:possiblemechanism(s)involvedinitsanti-inflammatoryeffict.BR.J.Pharmacol.2002(135):399-406.[6]Batkhuu,J.,Hattori,l.,Takano,F.,Fushiya,s.,Oshiman,L.,andFujimiya,Y.SUPPRESSIONOFnoPRODUCTIONINACTIVATEDMACROPHAGESINvitoandexvivobyneoandrographolideisolatedfronAndrographispaniculata.Biol.Pharm.Bull.2002(25):1169-1174.贵州大学动物科学学院[7]Rajagopal,S.,Kumar,R.A.,Deevi,D.S.,Satyanarayana,C.,andRajagopalan,R.Andrographolide,apotentialcancertherapeuticagentisolatedfronAndrographispaniculata.J.Expl.Ther.Oncol.2003(3):147-158.[8]Chen,J.H.,Hsiao,G.,Lee,A.r.,Wu,C.C.,andYen,M.H.Andrographolidesuppressesendothelialcella