基因工程的基本操作程序资料

人教版选修3专题一基因工程考点2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C对应练习1一、获取目的基因的常用方法：1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成（一）从基因文库中直接获取基因文库的分类及区别种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_________________________、______________、___________、_______________________②原理：__________多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA双链复制已知基因的核苷酸序列（前提）四种脱氧核苷酸引物耐热的DNA聚合酶（Taq酶）(二)利用PCR技术扩增目的基因目的基因的mRNA单链DNA(cDNA）双链DNA(即目的基因)反转录合成1）反转录法：蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：（三）人工合成的目的基因对应练习2C(2016-江苏单科，18)近年诞生的具有划时代意义的CRISPR/Cas9基因编辑技术可简单、准确地进行基因定点编辑。其原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割（见图）。下列相关叙述错误的是（）A.Cas9蛋白由相应基因指导在核糖体中合成B.向导RNA中的双链区遵循碱基配对原则C.向导RNA可在逆转录酶催化下合成D.若α链剪切点附近序列为：TCCAGAATC则相应的识别序列为：UCCAGAAUC对应练习2二、基因表达载体的构建—基因工程的核心目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。表达载体的组成：1）目的基因2）启动子3）终止子4）标记基因5）复制原点它们各自的作用是什么?C对应练习3(2015重庆理综，6,6分)下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是（）A．表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得B．表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原（起）点C．借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来D．启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用三、将目的基因导入受体细胞方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——感受态细胞法C对应练习4(2015北京理综，5,6分)在应用农杆菌侵染植物叶片获得转基因植株的常规实验步骤中，不需要的是（）A．用携带目的基因的农杆菌侵染植物细胞B．用选择培养基筛选导入目的基因的细胞C．用聚乙二醇诱导转基因细胞的原生质体融合D．用适当比例的生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织生芽四、目的基因的检测与鉴定检测—(分子水平)鉴定——（个体水平）①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法：DNA分子杂交技术方法：分子杂交技术方法：抗原-抗体杂交对应练习5B（2014天津理综，4,6分）为达到相应目的，必须通过分子检测的是（）A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B.产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D.21三体综合征的诊断为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的方法有农杆菌转化法和法。（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用技术，该技术的核心是和。（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测，又要用方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。基因枪法（花粉管通道法）植物组织培养脱分化和再分化耐盐基因一定浓度盐水浇灌巩固练习1巩固练习2（2015全国卷I）HIV属于逆转录病毒，是艾滋病的病原体。回答下列问题：（1）用基因工程方法制备HIV的某蛋白（目的蛋白）时，可先提取HIV中的，以其作为模板，在的作用下合成，获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。（2）从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是。该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是。（3）已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。引起这种现象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。（4）人的免疫系统有癌细胞的功能，艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。DNARNA逆转录酶抗体抗原抗体特异性结合T或T淋巴监控和清除巩固练习3(2016江苏单科，33,9分)下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用______两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于____________态的大肠杆菌。（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_______________________。（3）若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得种大小不同的DNA片段。DNA连接BclI和HindⅢ感受四环素引物甲和引物丙都不能7GGATCACCTAGT归纳:基因工程的基本操作程序1、获取目的基因从基因文库利用PCR化学方法人工合成2、构建基因表达载体目的基因、启动子、终止子、标记基因3、将目的基因导入受体细胞农杆菌转化法、显微注射法4、目的基因的检测与鉴定检测：是否插入、转录、翻译鉴定：