09[1].临床标本的病原生物检测-3

川北医学院·病原生物与免疫实验学教学课件sosoyjw临床标本的病原生物检测-3临床标本的病原生物检测-3总结与复习-3sosoyjw课程内容上次课程内容本次课程内容下次课程内容临床标本的病原生物检测-2总结与复习-2临床标本的病原生物检测-3总结与复习-3病原生物与免疫实验学考试（实验考试）时间：下周上课时间地点：病原中心sosoyjw本次课程进度安排时间：180min讲解示教：酶联免疫吸附试验（ELISA）（20min）操作：临床标本的病原生物检测-3（120min）斑点法ELISA试验第1桌：病案04检测：患者血清中恶性疟原虫相关抗原第2桌：病案03检测：患者血清中日本血吸虫相关抗原第3桌：病案02检测：患者血清中斯氏狸殖吸虫相关抗原第4桌：病案12检测：患者脑脊液中新生隐球菌相关抗原第5桌：病案10检测：患者脑脊液中脑膜炎奈瑟菌相关抗原第6桌：病案14检测：患者血清中戊型肝炎病毒相关抗原细菌的鉴定-3：上次课试验结果判定。总结与复习-3（40min）汇总复习试验水平考试相关事项的说明课后：分离模拟试题与评估表，整理装订好实验报告册。完成实验报告，上交存档。匿名填写教学质量评估表（注明带习教师），直接交至主任办公室。课程内容sosoyjwELISA（酶联免疫吸附试验）ELISA:enzymelinkedimmunosorbentassay中文名称：酶联免疫吸附试验反应类型：酶免疫标记技术常用方法：直接法（检测抗原）间接法（检测抗体）双抗夹心法（检测抗原）竞争抑制法（检测抗原或抗体）sosoyjw抗原抗体反应类型3、细胞溶解反应：抗原+相应抗体=抗原抗体复合物5、免疫标记抗原抗体反应1）酶标记技术2）荧光标记技术、3）放射性核素标记技术4）胶体金标记技术1、沉淀反应：可溶性抗原（如血清蛋白）+相应抗体=沉淀物2、凝集反应：颗粒性抗原（如细菌）+相应抗体=凝集物4、中和反应：细菌外毒素或病毒+相应抗体=抗原抗体复合物激活补体细胞溶解2、间接法抗体酶标抗抗体包被已知抗原1、直接法抗原酶标抗体硝酸纤维膜4、竞争抑制法抗原酶标抗原显色抑制包被已知抗体3、双抗夹心法抗原酶标抗体包被已知抗体固相吸附物检测物标记物酶底物显色反应sosoyjw细菌的鉴定-3生长特性鉴定：动力试验结果判定（病案5、6、7、8、9）生化反应鉴定：尿素分解试验结果判定（病案5、7、8）枸橼酸盐利用试验结果判定（病案5、7、8）吲哚试验结果判定（病案5、7、8）血清反应鉴定：肥达试验结果判定（病案7）耐药性鉴定：药敏试验结果判定（病案5、6、7、8、9）sosoyjw斑点法ELISA（直接法）1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）阳性抗原＋阴性抗原－待检抗原？1、点膜；2、干燥；3、封闭；4、洗涤；5、加稀释酶标抗体，反应；6、洗涤；7、加酶底物显色反应；8、终止反应，观察记录试验结果。进度安排sosoyjw斑点法ELISA（直接法）试验步骤7、加酶底物显色反应，避光3、封闭液封闭，37℃5、加稀释酶标抗体，反应，37℃1、点膜（固定抗原），3μl∕格6、洗涤液洗涤2次，1min∕次20min4、洗涤液洗涤2次，1min∕次20min5min20min20min8、终止反应，观察记录试验结果时间安排2、干燥，37℃20min5min10min进度安排sosoyjw斑点法ELISA点膜示意图1-1123456阳○阴○待○sosoyjw试验水平考试相关事项的说明考试时间：6月15日~6月19日（下周上课时间）考试地点：病原中心3楼考场安排考试准备：带本人照片的身份证明。实验报告纸至少2张。笔1支，建议多带一支备用。考试形式考试流程进度安排sosoyjw考场安排sosoyjw考试形式轮站式考试：考生在规定时间内（6min）完成本站考试内容，时间到即进入下一站，直到完成全部站考试。形式一（1号考场）：细菌染色技术+玻片标本鉴定+结果判定共4站考试，用时24min形式二（2号、3号考场）：技能操作+结果判定+玻片标本鉴定共2站考试，用时12min考生进入且仅进入1、2、3号考场之一参加考试，完成考试后立刻下楼离开，不再进入其他考场。sosoyjw考试流程1、考试当天各班班长提前20分钟到病原中心3楼报到，与调度老师核实本班参考人员名单，抽签决定各班参加考试顺序，并负责通知本班同学。其他同学在楼下等候待考。2、调度老师每轮（每6min）随机安排最多18位考生分别进入3个考场（每个考场最多进入6位考生）。3、考生按学号顺序进入考试位置①~⑥，将考场编号和位置编号填写在答卷纸上。6min内完成第1站考试，并将答卷交给本站监考老师，不得带入下一站。哨响后进入第2站考试，同时新一轮考生进入第1站。4、考生完成本考场最后1站考试内容后（1号考场4站考试，2号、3号考场2站考试），哨响即交卷离开考场。sosoyjw1考场轮站流程示意图sosoyjw2、3考场轮站流程示意图川北医学院·病原生物与免疫实验学教学课件sosoyjw主要参考文献：《病原生物与免疫实验学》第2版，科学出版社《人体寄生虫学》第7版，人民卫生出版社《医学微生物学》第7版，人民卫生出版社《医学免疫学》第5版，人民卫生出版社