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实验7食用菌母种制作与转管技术实验目的掌握了解食用菌组织分离的方法和实际操作技术；明确食用菌组织分离在食用菌生产中的重要性。母种原种栽培种实验原理实验原理1.组织分离法：用子实体的某一部分来分离菌种的方法。优势：方法简便，后代不易发生变异，是食用菌栽培中防止品性退化，保持优良品种特性常用的一种手段。应用：此法适宜多数食用菌，是野外工作者和种菇专业户必须掌握的一种方法。实验原理2.钩悬法是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离法。3.孢子印分离法取成熟子实体经表面消毒后，切去菌柄，在20～24℃静置一天，大量孢子落下形成孢子印。接种环沾少量孢子在试管培养基上划线培养。实验原理实验材料材料：平菇、香菇、杏鲍菇较成熟的子实体用具：培养皿；试管斜面培养基；酒精灯，接种刀，75%酒精，消毒液；冰箱；培养箱等。培养基：PDA斜面培养基1.PDA培养基的配置配方：马铃薯浸粉；5.0g/L；葡萄糖20.0g/L；琼脂20.0g/L；氯霉素0.1g/L。制法：称取40g溶于1L蒸馏水中，煮沸溶解。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。实验步骤2.种菇的选择选择无病虫害、典型、八成成熟的食用菌子实体。3.环境和种菇消毒在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇体。或选用的子实体用0.1％开汞水或70％酒精表面消毒，用无菌水冲洗并用无菌纱布擦去表面水分。实验步骤实验步骤4.取接组织将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒（0.3～0.4立方厘米）大组织，放入斜面培养基上。迅速塞上棉塞。如已开伞的种菇、则选菌盖与菌柄交界处的菌肉。如种菇已受雨淋，吸水较多，应取菌褶作为接种材料。母种分离视频5.培养取接组织的斜面试管放置于25℃的培养箱中培养。6.转管在菌丝长满斜面之前，菌丝生长最旺盛时，挑取菌丝进行转管扩繁。实验步骤母种转管视频实验注意事项（1）组织块分离法对于胶质的耳类及菇体较小较薄的菇类，如金针菇等不太适宜。（2）此法应严格遵循无菌操作。（3）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。（4）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分别用于菌种保藏或繁衍原种。（5）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。结果与思考题1.如何避免因污染而造成的组织分离的失败？2.判断你所分离的母钟是否标准？3.孢子分离的母种为何一定要做出菇试验？