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农残品检验大赛培训报告总结、心德体会实验名称：瘦肉中农药残留检测实验目的：检验目前我们大部分高职院校在农产品（食品）质量安全检测人才培养水平；为我们广大的农产品（食品）质量安全检测机构的一线检测人员提供人才储备；同时也为新农村建设，农业科技人才队伍培养提供有力的支持，为“三农”服务添砖加瓦。实验器材：电子天平（奥豪斯AR2140）托盘天平（0.1g）旋涡混合器（合肥艾本森Mixplus）离心机（卢湘仪TG-16-WS(50ML*6转子）离心管（50mL）3个固相萃取柱（HLB、60mg、3cc）3个固相萃取装置{天津艾维欧SPE-12(带能调压力的真空泵)微孔滤膜（0.22μm）3个液相色谱样品瓶（1.8mL）3个一次性注射器（2mL）3个烧杯：25ml/3、50ml/2、100ml/3、250ml/3、500ml/2移液管:2ml/1、5ml/4、20ml/1滤纸药勺1个洗耳球1个洗瓶500ml1个棕色试剂瓶500ml2个试管5ml3个实验试剂：抗生素标准溶液（混合标准溶液）磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）：取磷酸二氢钾6.8g加水稀释至500ml，用5.0mol/L氢氧化钠调节pH到7.0。甲醇（色谱纯）纯化水(蒸馏水)新鲜牛肉流动相：取浓磷酸3.4ml，用水稀释至1000ml，用三乙胺调节pH到2.4，再加入乙晴（82mlpH为2.4的磷酸溶液要用乙晴18ml）。实验内容：检测方法依照《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》（农业部1025号公告-14-2008）操作。本项目全面考察学生对高效液相色谱法检测禽畜肉中抗生素残留项目的实施过程中所涉及的样品预处理、样品检测（送至第三方检测机构进行，不作为考核点，但选手制备样品的回收率和RSD值将根据检测机构检测数据计分）、数据处理（提供统一打印图谱，考核选手根据图谱计算检测结果的能力）和离线色谱工作站操作4个环节的基本操作与过程的整体把握和运用能力以及在整个实验过程中的操作文明和操作安全意识。本项目预处理现场操作要求每个参赛队员在2.5个小时内完成。色谱工作站操作和数据处理分别要求在45分钟和60分钟内完成。实验步骤：一、采样准确称取3份牛肉样品（已由组委会事先粉碎成肉糜）2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据；举手示意，由裁判在样品中统一加入混合抗生素标准溶液100μL。二、提取1.准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液并举手示意，经裁判示意后再在加入每份已称量好的牛肉样品中，用玻璃棒搅匀后；2.将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；3.用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；4.将上清液倒入50mL烧杯中，以备过柱用。三、净化3.1、将固相萃取柱在特定装置上安装好，分别先用2.0mL甲醇、再用2.0mL水活化；3.2、将活化好的固相萃取柱安装在固相萃取仪上，取离心所得上清液5.0mL并举手示意，经裁判示意后过柱；3.3、用水2.0mL清洗，挤干；3.4、用流动相2.0mL洗脱并举手示意；并用5mL试管收集洗脱液；3.5、用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μm有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。四、测定由裁判收齐样品后统一送至第三方检测机构检测。五、分析定量分析时，回收率以三份平行加标样中待测成分的绝对质量来计算，RSD值以三份平行加标样中待测成分的质量分数来计算。1、质量分数（残留量）s132sACVVAVMX＝X：加标样中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星及沙拉沙星的残留量，A：加标样中相应药物的峰面积；As:标准溶液中对应药物的峰面积CS：标准溶液中对应药物的浓度；V1：提取用磷酸盐缓冲液的体积V2：过萃取柱所用上清液体积；V3：洗脱用流动相体积M：加标样的质量2、加标回收率10100%mmm加标P＝3、精密度1100%()1niixxnxRSD＝附：质量分数保留小数点后二位；加标回收率保留三位有效数字；质量分数平均值保留小数点后二位。实验总结：试验的整个步骤过程都比较简单，更多的是细节问题。只要我们在过程中注重细节，比如移液管的使用、洗耳球的使用、放液的速度、液面的调节、桌面的整洁等问题，再克服种种困难，我们就能成功的笑到最后；而数据处理基本都是数学题目，只要我们看清题目，理解清题意，注意单位换算，基本就不会有问题；关于离线工作站，以为我们还没有接触仪器分析和液色谱分析这几门课程，所以我们要抽时间恶补一下相关理论知识，至于实践操作在有了一点理论的基础下都能比较快的学会。但不论是实际操作还是数据处理和离线工作站都一定要总览题目，然后再进行操作和做题。而实践也证明了一切，说明我们的努力是有用用功。不足与改进：1、移液管的使用：移液管在移液时不直，我们可以通过互相间观察纠正，然后定型，而我们最终总结出来的规律就是大多数情况下最累的姿势就是正确的姿势，而我们也可以在吸好液后调节液面前及时纠正错误的姿势，或者在天花板上挂一根绳子垂直下来，然后进行比对，长此以往就可以纠正错误的姿势；移液管在吸液时可以尽量往液面下一点，更不会吸空，也要把握好度，不然也很容易触，而最好的方法就是把移液管放溶液中的正中间，更容易查看和调节。2、移液管和烧杯的润洗：润洗时速度很慢，浪费了很多不必要的时间，随意我们在平时时应多练习，同时掌握润洗技巧很关键。一要动作优美规范，二要动作熟练快。所以我们可以在润洗时可以同时转动烧杯和移液管，而且转动时两手方向是相反的；也可以单独转动移液管或者烧杯都可以。握烧杯的手记得要用手指抓，且最好是用拇指、食指、中指抓，而无名指和小拇指只有展开放置便可，切记最好不要用虎口握，这样会很难看不美观；移液管洗好之后，管内下方口还有溶液，可以用滤纸吸或者用洗耳球吹下去；最关键的是转动时不要用手臂的力量，而是用手腕的力量。原因是更好把握力度、手不会很累和动作更加美观。3、洗耳球的使用：在操作规程里洗耳球的操作没有明确的规范，所以在不影响美观的情况下如何使用都是正确的。而根据我个人的经验总结得出，用拇指和中指在洗耳球的两个相对面拿着，而后用食指在洗耳球的正顶方压下去，而后拇指和中指往中间夹，同时在吸液时三个手指可以同时或者单个松动来控制吸液速度和量，同时也可以避免重吸，而且要看用的移液管的不同而决定手指压的程度（一般20ml的移液管要用食指压到底部，拇指和中指往两边压到食指即可）；基本上使用到移液管的时候都要使用到洗耳球，所以在放置洗耳球时应尽量避开一点（也就是放到比较空旷和远离一点手的地方），以免一不小心把洗耳球碰倒，减少不必要的扣分。4、放液的速度和调节液面：我曾做过尝试，放液的速度不同也会影响测定的结果。放液速度不同在于手的调节，只有一点一点的放液，达到匀速时测得的结果才是最好的；液面的调节在于看准一个点（也就是说这次实验我的第一次吸液的液面是与刻度线下方相切，那么后面的看液面都要与第一次吸液看液面的那个标准来，不论用的什么样规格的移液管），这个很关键，也是很考验人的一个重要环节。而且关键在于每一次吸液的液面要在同一个点和每一次看液面的姿势和高度要相同，所以比较难也比较考验人，也因如此做的越规范结果就越准确；如果手的湿度不好调节或者干的快，我们可以适当的在脸上抹一下（因为我们出了汗脸上就有油，而油比较润滑和密封性比较好，只要力度适度示意裁判时也更不会掉液，放液面的速度也更好控制）。5、称量和配平：第一次称量牛肉时可以试着一点点加（五次内搞定），然后第二次开始就要在加两次内搞定（不要纠结于那么一点，只要在范围之内就可以），而这些也要基于平时的经验积累（多练）；以为是肉末，所以很容易粘住药勺，所以我们可以在装肉末的烧杯中尽量用一点力压一下弄成团，这样就更好的放到离心管中，而更不会因为下不去掉用力抖出外面；清零后和读数时最好停留约3秒钟，这样数值更加稳定，更不会影响记录数据，也可以避免涂改；配平时应正确使用托盘天平（先调节螺母使之平衡，然后再用烧杯配平），配平前先看上清液那支离心管刻度线，然后拿另一个空离心管直接把水倒到差不多时再用胶头滴管滴加配平，这样可以缩短配平的时间，称完后一定要记得把游码归位。6、震荡：震荡因为时间长，如果离心管的放置不好和姿势不好，离心管就很容易被甩出去，而手就很容易酸痛，而我们只要把离心管密集的放成一个三角形，手握成一个手窝自然下放在离心管上方，五个手指和另一个手负责固定离心管，这样手又不累也不用担心离心管被甩出去（主要是为了不会因为手累而影响后面的移液）。7、萃取上柱：萃取时压力阀不好控制流速，所以我们可以通过用手指控制空闲的萃取阀开关。首先，装上萃取柱，打开开关，然后打开三个或者更多个空闲的阀开关，观察三根柱子的流速，然后看柱子上的溶液大概还有多少。如果流速大概在一秒一滴的情况下（这是比较快的情况），可以在溶液大概还有0.8ml左右就可以开始吸下一个溶液，等吸好了，差不多溶液也就流完了，不要等，一抽完就马上放液，因为有空气在就更不好控制流速，而比较慢的大概在柱子上还有0.4ml的左右就开始吸液，但是一定要拿本子记好来，不然很容易乱；放液的时候最好与流速同步，这样出来的结果会更好一点，等放完2.5ml左右，就可以把阀关了去的同时把剩下的溶液一次性放到柱子里去，然后等到后面两根柱子上好了后再一起打开开关进行抽液（等的这一步只是指的上上清液和流动相的时候，其他的一概不等），而我们放的时候只需要靠一边，只有在拿出来的时候在对边靠一下，把最后一滴靠下去，如果靠到柱子壁上下不去，可以用手握住洗耳球，用母指快速轻轻的压一下，把溶液吹下去；反复上面的操作直到萃取完成，这样可以节约很多时间，同时保证不会超时，也可以利用到更多的时间去润洗、移液和清理，同时也可以保证质量。8、清理工作：一定要记得，用完的东西就要马上清洗干净，特别是比较细小的仪器。比如：药勺、玻璃棒、镊子等，因为这些比较细小，很容易遗忘在角落，所以在当时清理干净就可以避免不必要的扣分；清洗好了仪器之后记得要倒置过来晾干。9、整合：不论在吸液、润洗和倒液的时候都可以把抹布垫到烧杯的下面平摊开来，溶液掉下去时才不会掉到桌面上，也可以及时的擦干净；而在润洗和同一种溶液最后一次吸液时，因为溶液少就容易吸空和触底，而把抹布折一下踮起烧杯的一角，就可以很好地减少不必要的扣分。心德体会：从最初开始，自己的成绩就不是好，有想过放弃，但是又想到，居然选择了，就坚持到底吧！而后面老师也说了：“没人逼着你来，是你们自己选择的，居然选择了，就坚持到底”，更是坚定了我的信念；机会是自己争取的，更多时候是等不来的；很多东西就应该当时就去争取，不然后悔也没用；机会把握在自己的手上，想到了，就去做，不要留下遗憾；练在手，熟在心；心态决定一切，只有在坚定的心态下才能取得永久的成功；压力就是无形的动力；三人行，必有我师焉；实在过程，美在不足，慨在结果；在坚持不懈的努力中吸收借鉴才能取得永远的成功！