沙门氏菌检验

沙门氏菌检验革兰氏阴性杆菌前增菌增菌分离生化试验多价血清凝集试验革兰氏染色前增菌固体样品：25g（电子天平）液体样品：25mL（25mL吸量管）+225mL缓冲蛋白胨水（BPW，量筒），混匀。于36℃±1℃培养8~18h注意：液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。稀释瓶或具塞广口瓶增菌取阳性前增菌液1mL+10mLTTB1mL+10mLSC42℃±1℃18~24h培养36℃±1℃18~24h培养科玛嘉显色平板BS琼脂平板分离取阳性TTB试管和阳性SC试管阳性TTB1环BS平板，划线36℃±1℃40~48h培养1环显色平板，划线36℃±1℃18~24h培养阳性SC1环BS平板，划线36℃±1℃40~48h培养1环显色平板，划线36℃±1℃18~24h培养平板划线示意图开始处开始处沙门氏菌在科玛嘉显色平板上的菌落特征：紫红色菌落沙门氏菌在BS琼脂平板上的菌落特征：黑色有金属光泽，棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色，有些菌落呈绿色，周围培养基不变色。生化试验在阳性BS或显色平板上挑取可疑菌落。三糖铁斜面：先划线，后穿刺接种赖氨酸脱羧酶试验培养基营养琼脂平板划线尿素斜面：先划线，后穿刺连做，接种针不要灭菌36℃±1℃18~24h培养灭菌后，取1环，加入胰蛋白胨水培养取阳性胰蛋白胨水（放阳性物品处）靛基质试剂用滴管取1~2滴加入阳性胰蛋白胨水中。结果：多数为阴性三糖铁斜面培养结果：底层（+）、产H2S（黑色）、产气（有气泡）或不产气红色：产碱黄色：产酸黑色：产硫化氢尿素斜面培养结果：颜色变黄（产酸）尿素斜面三糖铁斜面培养结果：底层（+）、产H2S（黑色）、产气（有气泡）或不产气赖氨酸脱羧酶试验结果：颜色变化（加深），为阳性尿素斜面培养结果：颜色变黄（产酸）革兰氏染色结果：G-（红色，无芽孢，杆菌）凝集试验②从有典型沙门氏菌三糖铁斜面上用接种环取1环玻片用记号笔在玻片中间画条线①滴1~2滴灭菌生理盐水①滴1~2滴沙门氏菌多价血清结果：沙门氏菌多价血清：凝固灭菌生理盐水：不凝固另：从有典型沙门氏菌三糖铁斜面取1环，染色。在无菌室中固定，到微生物实训室染色涂片——火焰固定——结晶紫初染——水洗——碘液媒染——乙醇脱色——水洗——吸干——番红或沙磺复染——水洗——干燥——镜检染色涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。火焰固定：载玻片通过火焰1~2次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，染色1min。水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20~30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸水纸吸干水分。番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1~2min。水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。干燥：于室温下自然干燥。观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油镜下观察。结果:革兰氏阳性菌——紫色；革兰氏阴性菌——红色。