F1F0-ATP合酶的发现生物工程班三磷酸腺苷(ATP)——能量货币•三磷酸腺苷(ATP)是世间所有生命体的能最载体。在细胞中,ATP分子在形成之后1分钟内就消耗掉了。•ATP的转换率惊人之高:处在休息状态的人,42小时就消耗相当于自身重盘一半的ATP;在激烈运动时,1天能转化多达自身重盈20倍的ATP•光能营养生物即植物,靠捕获光中的自由能以形成ATP;而化学能营养生物即动物,则靠燃料分子的氧化以形成ATP。因为有了ATP的存在,才有了生物体内的能盆转换,一切生灵才得以生存和繁衍。•鉴此,生物学家们形象地将ATP誉为“能量货币”。能量货币不贬值•1997年诺贝尔化学奖,就颁发给探索“能量货币不贬值”真谛的3位生物化学家:奖金的一半由美国加利福尼亚大学教授保罗·博耶和英国剑桥大学教授约翰·沃克共享,另一半由丹麦奥尔胡斯大学教授廷斯·斯科获得。•博耶和沃克揭开了ATP合成酶的隐秘,从而探明“能量货币”ATP的形成过程。•斯科发现了离子传输酶,这种酶即ATP合成酶的一种存在形式,起着离子泵的作用。•他们共同说明了“能量货币不贬值”的道理。•这三位科学家的工作都围绕生物体能量的主要提供者——ATP•博耶和沃克的主要研究方向是ATP合酶。•斯科则由于发现Na+/K+泵而获此殊荣。•80年代初,沃克发现了ATP合酶,从而找到了第5种线粒体内膜脂蛋白—复合体V,与其他4种复合体在结构上互不相同。每种复合体都是内膜的结构成分,具有蛋白质的通性,与磷脂结成膜结构,并都有一套独特的载体,承担电子传递过程的部分酶促反应。约翰·沃克•沃克深入研究发现,ATP合酶的分子量约为50万道尔顿。当这种复合休处于分离状态时,便能够水解ATP;当处于正常自然位置时,起作用相反,能够合成ATP。•沃克证实,APT合成酶是由10个多肽链组成的复合体,其中5个是膜固有的蛋白质,5个是膜周围的蛋白质。周围蛋白质朝向内膜的基质面突伸,而构成整个复合体的一个亚单位,称作F1ATP酶,这就是ATP合成酶进行可逆反应的场所。固有本体蛋白质组成复合体的另一个亚单位,称作FoATP酶,对ATP合成起调控作用。沃克还利用分子生物技术对5种膜周围蛋白质进行了纯化和分析,并测定了氨基酸成分。•他的研究集中于ATP合酶,并且显示酶如何利用氢流从ADP和无机酸盐形成三磷酸腺苷所产生的能量。博耶假设一种不平常的机制解释三磷酸腺苷合酶的特性,被称做“束缚转变机制”,已部分被沃克的研究所证实。保罗·博耶成果:致力于ATP的合成机理研究并做出成功的解释ATP合酶的结构ATP合成的分子机制•1960年,在线粒体中找到了ATP合酶(或称F1F0-ATP酶),人们惊奇地发现,尽管ATP合酶可以被称为自然界中最小的“轮机”,但它本身却是一个巨大的蛋白质复合体,包括了多种亚基。ATP合酶可以分作两大部分,位于膜内的F0部分,以及位于基质的类似头部的Fl部分。•在70年代,科学家们证明ATP合成酶由3个部分组成:一是位于线粒体内膜的基部,二是由膜内伸出的“头部,在两者之间有一个“颈部使它们连接在一起。很多实验室的研究结果表明,ATP合酶的催化中心位于多亚基的“头部”,其中3个β亚基起着关键作用,称为催化亚基,同时“颈部”在表现催化活性方面也是很重要的,但是对整个ATP合酶如何合成ATP的机理仍然是一个谜。•博耶认为,上述3个β亚基的构象是不相同的:一种构象有利于合成ATP的前体ADP和Pi(磷酸)与之相结合。另一种构象可使结合的ADP和Pi合成ATP,第三种构象使ATP变成松驰结合状态,从而容易被释放下来。当ADP和Pi与一种构象的β亚基相结合以后,依次经历了两次构象的变化,从而导致ATP的合成并使之从ATP合成酶上释放下来。在ATP合成过程中3个β亚基通过转动,构象发生交替、反复的变化,所需的能量是由跨膜的H+流提供的。这就是博耶的ATP合成酶合成ATP的构象假说,即旋转催化假说。•Boyer认为,单拷贝的γ亚基处于其它亚基的中央,并且可以转动,如同三缸马达的机轴,带动与之相邻的β亚基旋转,发生构象上的变化。而穿过膜的质子流则如同水流一样驱动反应的进行,于是ATP被连续不断地合成出来,供给细胞活动之用。•Boyer的假说虽然在当时就已经受到很多间接实验证据的支持,但它的真正得到承认,是在1994年Walker小组发表了F1的晶体结构之后。Walker的研究表明,Boyer“结合变化机制”中对于Fl结构的预测基本上是正确的,只是γ亚基伸出到(αβ)3中的一个,从而带动它们进行构象的转换。•博耶假说也可以形象比喻为:ATP合酶犹如一部精密的分子水轮机,当H+流跨膜转运时,带动ATP合成酶基部轮子似的结构和与之相连接的轴进行旋转,就象水流带动水轮机一样。这一转动继而引起与轴相连的3个叶片(即ATP合成酶催化中心的3个β亚基)也随之转动起来并发生一定的构象变化,结果使ADP和Pi合成ATP并将它释放下来。•尽管Boyer与Walker为了解ATP合成的机制作出了突出贡献,但他们获得今年的诺贝尔奖,还得益于近两年发表的有关工作,包括Cross小组、Junge小组和Yoshid小组。其中Yoshid等的工作最为有趣,他们将荧光标记的肌动蛋白纤维丝附着在F1的γ亚基上,当向反应体系中加入Mg2+~ATP后,就可以观察到γ亚基的顺时针转动。很多人认为,上述堪称精美的工作大大影响了诺贝尔评奖委员会,使他们迅速作出决定,把化学奖授予Boyer和Walker。•由于他发现了一种被称为钠钾激活的三磷酸腺苷—钠钾ATP酶,而与博耶和沃克共获1997年诺贝尔化学奖。詹斯·斯科•1997年3位诺贝尔化学奖获得者,前两人对ATP合酶如何合成能源物质ATP的研究方面做出了重要贡献,第三位获奖科学家斯科的成就在于首先发现了一个利用ATP驱动离子跨膜运送的钠、钾一ATP酶,从而引起有关科学家的注意,并对此做了系统研究。