动物性食品中有机氯农药多残留测定方法研究

1动物性食品中有机氯农药多残留测定方法研究卓黎阳1陈惠京2周蕊2赵云峰2吴永宁2*曾凡刚1（1中国人民大学环境学院，北京100872）（2中国疾病预防控制中心营养与食品安全所，北京100050）摘要：本文以GB/T5009.162-2003国标方法为基础，采用全自动凝胶色谱系统（GPC）净化，对动物性食品肉、蛋、奶中26种有机氯农药多残留进行分析，在给定的浓度范围内，各农药组分呈现良好的线性相关，进一步拓展了国家标准方法的检测能力。关键词：有机氯农药多残留、凝胶色谱净化、气相色谱法尽管我国于1983年停止有机氯农药的生产和使用，但是由于过去长达30年的使用历史，再加上有机氯农药的化学性质稳定，在环境中难以降解，这使得环境中仍存在有机氯农药残留，并通过食物链的富集作用，造成对食品的危害。2000年中国总膳食研究结果显示，HCH和DDT仍是我国膳食中农药残留的主要监测品种。为加强持久性有机污染物的监测与控制，我国也于2004年6月通过了《关于持久性有机污染物的斯德哥尔摩公约》（以下简称《公约》）。《公约》中公布的12中持久性有机污染物中有机氯杀虫剂就有7种，包括了艾氏剂、氯丹、滴滴涕、异狄氏剂、七氯、灭蚁灵、毒杀芬。这其中有些是在我国登记但未曾使用过的品种，CAC已制定其共限量标准。为加强我国食品的监测能力，保护消费者健康，有必要建立能覆盖多组分的检测方法。本文在国家标准方法（GB/T5009.162-2003）的基础上增加了氯丹、硫丹和异狄氏剂等的异构体组分，并采用全自动凝胶渗透色谱（GPC）系统进行样品的净化处理，提升分析速度，进一步提高GB/T5009.162-2003的检测灵敏度，从而为我国开展禁用有机氯农药再残留限量标准的研究提供良好的技术保证。1材料与方法1.1仪器Varian气相色谱仪（CP3800，CP8400自动进样器，具电子捕获检测器）；旋转蒸发仪（RotaryEvaporatorN-1000，Eyela公司）；AccuPrepTM自动凝胶色谱系统（GPC，美国J2Scientific公司），264nm固定波长紫外检测器。21.2试剂丙酮（分析纯，重蒸）；石油醚（沸程：30～60℃，分析纯，重蒸）；乙酸乙酯（分析纯，重蒸）；环己烷（分析纯，重蒸）；正己烷（农残级，J.T.Baker公司）；氯化钠（分析纯）；无水硫酸钠（分析纯）；氮气（≥99.5%，北京普莱克斯实用气体有限公司）。1.3农药标准品及标准溶液26种有机氯农药标准品（纯度99％）。标准溶液的配制：准确称取各农药标准品，用少量苯溶解，再以正己烷稀释成一定浓度的储备溶液。量取适量标准储备溶液，以正己烷稀释为系列混合标准溶液。1.4样品制备1.4.1样品预处理：蛋品去壳，制成匀浆；鱼肉去骨刺，制成鱼肉糜；乳品混匀。1.4.2提取1.4.2.1称取蛋类样品20g（精确到0.01g），于200mL具塞三角瓶中，加水5mL，加40mL丙酮，振摇30min，加氯化钠6g，充分摇匀，再加30mL石油醚，振摇30min。静置分层后，将有机相全部转移至100mL具塞三角瓶中经无水硫酸钠干燥过夜，取35mL上清液于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加2mL乙酸乙酯－环己烷（1:1，V/V）溶液再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1mL并转移至GPC自动进样系统配套试管中，用乙酸乙酯－环己烷（1:1，V/V）溶液洗涤旋转蒸发瓶数次，将洗涤液合并至试管中并定容至10mL。1.4.2.2称取鱼肉样品20.0g（精确到0.01g），加水15mL。加40mL丙酮，振摇30min，其后的提取方法同1.4.2.1蛋类样品的提取步骤。1.4.2.3称取牛奶样品20.0g（精确到0.01g），直接加40mL丙酮，振摇30min，其后的提取方法同1.4.2.1蛋类样品的提取步骤。1.4.3净化样品通过5mL样品环注入GPC柱，泵流速5.0mL/min，弃去0~7.5min流3分，收集7.5~15min流分，15~20min冲洗GPC柱。洗脱液为乙酸乙酯－环己烷（1:1，V/V）混合溶液。将收集的流分旋转蒸发浓缩至约1mL，用氮气吹至近干，以正己烷定容至1mL，待GC分析。1.5色谱条件色谱柱：DM-5石英弹性毛细管柱，30m×0.32mm×0.26µm。柱温：程序升温为。进样口温度280℃。检测器温度300℃。载气流速N2：流速1mL/min，柱前压0.5MPa。不分流进样，进样量1µL。2结果2.1GPC淋洗曲线样品运行前，须对J2Scientific公司的GPCAccuPrepTM自动凝胶色谱系统（GPC）的淋洗条件进行选择。采用推荐流速5.0mL/min洗脱，以紫外检测器检测26种有机氯农药的流出时间以确定组分收集。4图1有机氯农药混标的紫外吸收图由紫外吸收图可见，有机氯农药混标溶液的流出时间在7.5~12.5min之间。在溶剂洗脱条件下，以混标溶液进样，由表1结果可见，在7.5~15min收集，除添加水平2中六氯苯的回收率为81.35%，异狄氏剂醛76.46%外，其他各组分的回收率均大于90%，以此确定了本方法的洗脱曲线。表1.GPC净化的回收试验结果加标水平1加标水平2编号农药组分添加量(µg/L)平均回收率（%）RSD％（n＝7）添加量(ng/mL)平均回收率（%）RSD％（n＝7）1α-六六六1.2099.975.886.0095.175.472六氯苯1.56100.603.087.8081.353.553β-六六六3.8098.535.9019.0090.486.154γ-六六六1.50100.887.477.5098.324.045五氯硝基苯2.0299.779.2110.0892.767.186δ-六六六1.5099.169.117.5095.662.807五氯苯胺2.2099.988.8911.00103.283.5158七氯2.02102.601.6510.10103.341.879五氯苯酚1.20101.188.846.0099.943.7910艾氏剂2.16100.197.8410.8095.136.6411氧氯丹3.00101.087.5115.00100.214.8312环氧七氯2.42101.348.0512.12100.665.4613反氯丹2.40101.868.9612.0098.795.4814α-硫丹3.20101.328.3416.00100.695.3715顺氯丹2.40101.288.3212.00100.195.6416p,p'-DDE3.78101.388.8218.88103.486.3817狄氏剂2.50102.039.0612.50101.065.3918异狄氏剂5.32105.074.9626.60110.717.8119β-硫丹4.00101.809.4720.00100.165.7120p,p'-DDD4.20100.278.1121.0098.704.2821o,p'-DDT6.00103.379.7230.00106.376.8622异狄氏剂醛2.4099.0310.8312.0076.4610.1323硫丹硫酸盐5.20101.306.2726.0096.755.2724p,p'-DDT4.50104.035.2722.50101.498.3725异狄氏剂酮2.0099.524.7210.0094.835.0826灭蚁灵2.0098.372.8510.00100.231.022.2色谱图采用1.5的色谱条件可以得到有机氯农药混标的GC色谱图，如图2。图2有机氯农药混标溶液的GC色谱图出峰顺序1.α-六六六2.六氯苯3.β-六六六4.γ-六六六5.PCNB6.δ-六六六7.PCA8.七氯9.PCPs10.艾氏剂11.氧氯丹12.环氧七氯13.反氯丹14.α-硫丹15.顺氯丹16.p,p’-DDE17.狄氏剂18.异狄氏剂19.β-硫丹20.p,p’-DDD21.o,p’-DDT22.异狄氏剂醛23.硫丹硫酸盐624.p,p’-DDT25.异狄氏剂酮26.灭蚁灵2.3检测限与定量限试验将最低浓度水平的混标溶液添加在鸡蛋、鱼肉、牛奶中，以各目标组分的3倍平均信噪比为检测限(limitofdetection,LOD)，10倍平均信噪比为定量限(limitofquantification,LOQ)，获得该方法的LOD及LOQ，结果见表4。7表4检出限和定量限的试验结果（单位：µg/kg）LODLOQ农药鸡蛋鱼牛奶鸡蛋鱼牛奶α-六六六0.0530.0390.0500.1770.1290.166六氯苯0.0600.0300.0560.2010.1000.188β-六六六0.1790.1790.0820.5970.5970.275γ-六六六0.0960.0640.0420.3190.2130.141五氯硝基苯0.1140.0400.0500.3810.1350.168δ-六六六0.1610.0380.1990.5360.1260.662五氯苯胺0.2910.1390.1530.9710.4620.508七氯0.0530.0270.0430.1760.0900.143五氯苯酚0.0820.1310.0650.2750.4370.215艾氏剂0.0870.1380.0990.2890.4610.330氧氯丹0.1260.1870.0860.4210.6220.285环氧七氯0.0890.1320.0600.2970.4390.201反氯丹0.0940.0480.0540.3150.1610.179α-硫丹0.1910.0600.0920.6370.2010.306顺氯丹0.0660.0400.0580.2200.1340.192p,p'-DDE0.1740.1260.1520.5790.4210.506狄氏剂0.1010.0500.0610.3360.1680.202异狄氏剂0.4810.1010.4311.6030.3361.435β-硫丹0.0800.0630.1210.2670.2100.405p,p'-DDD0.1510.2110.2300.5050.7030.766o,p'-DDT0.0480.1560.0600.1600.5190.200异狄氏剂醛0.0720.0780.0780.2390.2690.269硫丹硫酸盐0.4670.2000.4741.5560.6671.578p,p'-DDT0.4610.1980.1191.5360.6580.395异狄氏剂酮0.2220.0410.0700.7400.1360.235灭蚁灵0.1000.0500.0600.3330.1670.2002.6准确度试验选择鸡蛋为基质，进行多次重复测定，得到样品的背景值。在基质中，分别添加两个水平的混标溶液，按给定方法平行测定7次，结果见表5。8表5加标回收试验结果鸡蛋鸡蛋农药添加水平(µg/kg)平均值（％）RSD%添加水平(µg/kg)平均值（％）RSD%α-六六六1.500102.716.576.00104.263.04六氯苯1.95099.154.647.80100.825.24β-六六六4.75088.387.3619.0086.892.76γ-六六六1.875104.995.387.50109.873.22五氯硝基苯2.52085.624.7710.0895.712.53δ-六六六1.875101.568.757.5091.103.75五氯苯胺2.75095.505.0111.0094.954.69七氯2.52699.649.0410.10103.233.40五氯苯酚1.50088.416.676.0092.084.55艾氏剂2.7089.009.9110.8087.105.22氧氯丹3.75070.676.6015.0071.353.96环氧七氯3.03075.166.9212.1276.692.98反氯丹3.00074.436.7012.0067.244.65α-硫丹4.00082.486.3716.0086.403.11顺