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生物化学教研室实验七血糖测定（葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响实验安排1.第一次取血(未施药)2.皮下注射肾上腺素3.实验内容的讲解4.第二次取血(注射药物后30min)5.血糖测定操作(比较注射肾上腺素前后血糖水平)尿糖检测血糖测定家兔抓取实验动物：饥饿16小时家兔采血部位：耳缘静脉一、采血放血部位剪毛,酒精棉球擦拭二甲苯擦拭兔耳,使血管充血在放血部位涂一层凡士林用三菱针刺破静脉放血离心管收集,(3ml以上)干棉球压迫止血。二.皮下注射肾上腺素0.4ml/kg皮下注射30min后再采血！选择皮肤较薄、皮下组织疏松而血管较少的腹部，在注射局部用消毒棉球将毛向四周分开，以左手的拇指、食指和中指将皮肤轻轻捏起，形成一个皱褶，右手将注射器针头刺入皱褶皮下，深约1.5-2厘米，药液注完后，用酒精棉球按住进针部皮肤，拔针，轻按进针部皮肤。实验四血糖测定（葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响实验目的1、掌握葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖的基本原理及方法2、观察肾上腺素对血糖浓度的影响3、熟悉尿糖的半定量检测血糖概念及意义：血糖：指血液中的单糖：葡萄糖血糖生理意义：通过分解代谢保证人体各种组织器官的能量供应。血糖总维持在恒定水平：3.89~6.11mmol/L血糖的来源和去路血糖80~120mg/dl食物糖消化吸收肝糖原分解非糖物质糖异生氧化分解CO2+H2O糖原合成肝(肌)糖原磷酸戊糖途径等其它糖脂类、氨基酸合成代谢脂肪、氨基酸血糖的去路血糖的来源动态平衡血糖的平衡调节因素1.神经系统：下丘脑+自主NS2.某些器官组织：主要为肝脏3.各种激素一、升高血糖1.肾上腺素2.胰高血糖素3.糖皮质激素二、降低血糖：胰岛素(体内唯一)交感神经(+)肝糖原分解升高迷走神经(+)肝糖原合成增加血糖调节全过程示意图血糖升高血糖降低下丘脑某一区域胰岛B细胞胰岛素分泌增多肾上腺髓质下丘脑另一区域胰岛A细胞－+胰高血糖素分泌增多肾上腺素分泌增多肾上腺素升血糖作用机制肾上腺素+肝细胞膜受体无活性磷酸化酶b糖原合酶有活性磷酸化酶a糖原合酶-cAMP-蛋白激活系统p加速肝糖原分解，使血糖升高临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。测定血糖的意义测定血糖的方法及优缺点特异血液量或试剂要求低易操作“真值”※葡萄糖氧化酶法Folin-Wu法邻－甲苯胺法超微量还原法己糖激酶法※方法不是基于葡萄糖的还原性测定，不受血液中非糖还原物质的影响，即“真值”。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测血糖浓度葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋O2＋红色醌类化合物过氧化物酶（POD）Trinder反应505nm光吸收法测定相对血糖浓度正常注射后血清(mL)－0.020.02－葡萄糖标准液(mL)0.02－－－蒸馏水(mL)－－－0.02酶酚混合试剂(mL)3.003.003.003.00表2葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度测定管空白管标准管四、血糖测定混匀→37℃水浴15min→冷却→波长→505nm比色肾脏在血糖调节中的作用尿糖主要指尿中的葡萄糖。正常情况下，肾小管能将肾小球滤过的葡萄糖全部重吸收回血液当血糖160-180mg/dl,超过肾小管的重吸收能力,部分葡萄糖随尿排出,这就是糖尿，这一血糖水平称为——肾糖阈血浆尿糖尿糖检测原理糖还原实验：葡萄糖含有醛基在热碱性溶液中可将Cu2+还原为低价的氧化亚铜葡萄糖含量（g﹪）试管变化结果无糖蓝灰色―﹤0.5绿色＋0.5~1黄绿＋＋1~2土黄＋＋＋﹥2红棕色＋＋＋＋表1尿糖半定量检测20滴班氏剂煮沸5min五、尿糖检测步骤A尿液2滴B尿液2滴实验结果记录表一葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度试管标准管注射前注射后吸光度（A）表二尿糖变定量检测试管AB试管变化结果符号计算1、注射肾上腺素前后的血糖浓度测定管吸光度2、注射肾上腺后血糖浓度增高率A肾－A正标准管吸光度葡萄糖含量(mol/L)=×5×100％A正抓取家兔操作规范，避免抓伤。正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般现用现配。注意事项