1 兰花组织培养

兰花组织培养•兰花是整个兰科植物(Orchidaceae)的总称，是开花植物中最大的家族之一，是单子叶植物中最高度演化的一科，有6个亚科730多属25000余种，广泛分布于全球各地。•兰花在中国约有170个属1200余种，分布较为广泛，几乎全国各省都有分布。•兰花具有极高的观赏价值，形成兰花产业。•兰花具有药用价值。兰花主要繁殖方法•分株繁殖•种子繁殖•组织培养原球茎和类原球茎•原球茎(Protocorm)是指兰花种子萌发过程中的一种形态学结构：种子的幼胚吸水膨胀，中部的胚细胞分裂增殖，突破合点端种皮形成球形或椭球形。•在兰科植物的组织培养中，根尖、叶片等适宜外植体也可诱导类似原球茎组织结构，即类原球茎或拟原球茎。•类原球茎(Protocorm-likebody,PLB)一词是由Morel在1960年提出的，用来描述兰科植物组培过程中产生的类似种子萌发过渡形态——原球茎的一种特殊组织结构:在兰花组织培养中，可由茎尖分生组织等（而不是种子）诱导形成类似其种子原球茎的组织结构。兰花外植体的选择和类原球茎增殖•外植体的选择直接关系到类原球茎的诱导。•在组织培养中幼嫩部位一般不容易褐化，因此常选取较幼嫩且生长旺盛的部位诱导类原球茎。•茎尖、叶片和种子是诱导类原球茎的理想外植体来源。•花瓣、萼片、子房、休眠芽、侧芽、花梗节间段、根尖等均可作为外植体诱导出原球茎。茎尖和侧芽作为外植体•茎尖和侧芽是最早也是使用频率最高的兰花外植体。•茎尖和侧芽顶端分生区细胞的分裂能力强，容易诱导出类原球茎。大花蕙兰（Cymbidium）、卡特丽亚(Cattleya)、石斛兰(Dendrobium)、墨兰和建兰等均成功用茎尖诱导出大量类原球茎。•对蝴蝶兰(Phalaeanopsis)、仙指甲兰(Aerides)等用茎尖作为外植体有可能影响开花性状，因此需要寻找其他外植体。叶片作为外植体•叶片作为外植体既可减少对母株的伤害，取材又不受季节的限制，且数量多，是比较理想的外植体材料来源。•研究表明虽然叶片具有诱导出类原球茎的能力，但成熟叶诱导出类原球茎的能力极弱。•幼叶诱导出类原球茎能力较成熟叶强，但诱导率也很低对，于大花蕙兰仅为33%左右PlantregenerationthroughdirectsomaticembryogenesisfromleafexplantsofPhalaenopsisamabilis:种子作为外植体•在自然条件下兰花种子虽多，但由于其不具有发育完全的胚，且种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物使种子很难萌发。•自NoelBernared在1899年创立了兰花种子共生萌发法后，研究者们接着发现大部分兰花种子可以通过无菌萌发的方式进行，即非共生萌发。•兰花种子的非共生萌发已在蝴蝶兰、石斛兰、文心兰等兰花中取得成功。兰花蒴果消毒及果实内部开裂果实种子消毒方法——过滤方法1开裂果实种子消毒方法——过滤方法2兰花种子离体萌发花梗节间作为外植体•一般较少用花梗节间段作为外植体。•但蝴蝶兰组织培养中多采用花梗作为外植体，从花梗节间段诱导出类原球茎，并且通过研究表明花梗节间段形成类原球茎的频率明显高于其它外植体（茎尖、根尖）。栽培条件下蝴蝶兰花梗节间分化幼芽蝴蝶兰花梗组织培养根作为外植体•Stewart等用树兰(Epidendrum)的根首次成功地培养出了原球茎和从愈伤组织分化出不定芽。•之后，根的离体培养相继在不同兰花中获得了成功。•由于兰花的根部共生菌根，根作为外植体较难彻底消毒，在组织培养的过程中较容易污染。兰花的离体开花组织培养基和添加物•培养基•兰花组织培养中常用培养基为MS、VW、KnudsonC、Kyoto、White和它们的改良型，应根据不同品种而选择合适的培养基。•目前，市场中有很多商业化培养基。•大花蕙兰MS、1/2MS、VW、KC均可应用于原球茎的增殖，但以KC效果最好。•植物生长调节剂•生长素类：IAA、2,4-D和NAA•细胞分裂素类：BA、ZT和KT。•不同的兰花、不同的生长发育阶段所需激素的量和种类也不尽相同。