1基因工程复习题一、名词解释:(10~20%)基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶的Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交:将细胞或组织的核酸固定保持在原来的位置上,然后用探针与之杂交的一种核酸分子杂交技术,该方法可较好地反映目的基因在细胞或组织中的分布和表达变化。粘性末端:双链DNA被限制性内切酶切割后,形成的两条链错开几个碱基,而不是平齐的末端。转化:受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。停滞效应:PCR中后期,随着目的DNA扩展产物逐渐积累,酶的催化反应趋于饱和,DNA扩增产物的增加减慢,进入相对稳定状态,即为停滞效应,又称平台期。逆转录PCR:以mRNA为原始模板进行的PCR反应。PCR:即聚合酶链式反应。在模板,引物,4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下,特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。α-互补(α-complementation):指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中,插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列(又称α-肽),该序列不能产生有活性的β-半乳糖苷酶。感染(infection)特指以λ噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。其中,由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导(transduction)。47、转染(transformation)指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。二、填空题(20%)1、DNA片段重组连接的方法主要有平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接。2、感受态细胞是指具有摄取外源DNA分子能力的细胞。3、λ噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时,包装长度为野生型λDNA的75~105%。5、PCR反应体系含有耐热的TaqDNA聚合酶,化学合成的寡核苷酸引物,四种dNTP,合适的缓冲液体系。6、核酸探针包括:cDNA探针;基因组DNA探针;寡核苷酸探针和RNA探针。7、部分酶切可采取的措施有:(1)____________(2)___________(3)___________等。(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积8、DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性:(1)____________;(2)________________的活性。枯草杆菌蛋白酶;(1)5'-3'合成酶的活性;(2)3'-5'外切核酸酶29、为了防止DNA的自身环化,可用_____________去双链DNA__________________。碱性磷酸酶;5’端的磷酸基团10、基因工程中有3种主要类型的载体:_______________、_____________、______________。质粒DNA;病毒DNA;质粒和病毒DNA杂合体11、pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于,它的四环素抗性基因来自于,它的氨苄青霉素抗性基因来自于。pMBl;pSCl01;pSF2124(R质粒)13、DNA重组连接的方法大致分为四种:(1)_________________(2)_______________(3)_____________(4)_______________________。(1)黏性末端连接;(2)平末端连接;(3)同聚物接尾连接;(4)接头连接法14、差示杂交(differentialhybridization)技术需要__________________________。两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。基因组DNA克隆;基因组DNA文库17、根据Northern杂交的结果可以说明:_____________________________。外源基因是否进行了转录18、在________________技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的DNA探针杂交。Southern印迹19、可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有____________和_______的活性。5’3’合成酶;3’5’外切核酸酶20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素:(1)_______________(2)__________________(3)_________________。(1)克隆的是完整的基因;(2)使用的是表达载体;(3)不含内含子21、放射免疫筛选的原理基于以下三点:(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;(2)同一个抗原可以同几种抗体结合;(3)抗体能够被标记22、黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自、COS位点序列来自,最大的克隆片段达到kb。质粒;噬菌体;4523、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自_______,第二、三两个字母取自_________,第四个字母则用___________表示。属名的第一个字母;种名的前两个字母;株名24、第一个分离的限制性内切核酸酶是___________;而第一个用于构建重组体的限制性内3切核酸酶是_____________。EcoK;EcoRl25、切口移位(nicktranslation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。DNA聚合酶I:5'一3'外切核酸酶;5'一3'合成酶26、就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:_______________、_____________、______________。另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。复制区:含有复制起点;选择标记:主要是抗性基因;克隆位点:便于外源DNA的插入27、pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过和两种质粒改造而来。它的复制子来自,Amp抗性基因则是来自。pBR322和M13;pMBl;转座子28、噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:一是;二是。它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;对某些噬菌体(如噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽29、Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别:(1)__________________________________________________________________(2)_________________________________________________________________。(1)印迹的对象不同:Northern是RNA,Southern是DNA;(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件30、限制与修饰是宿主的一种保护体系,它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。31、II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性(RFLP)。33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA,___________时摄人DNA。0C;42C34、野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是:(1)(2)(3)。(1)分子量大,(2)酶的多切点,(3)无选择标记35、形成平末端的方法有:用产生平末端的限制酶切,用S1核酸酶切除粘末端,用DNA聚合酶填平粘末端。36、回收DNA片段时,在确定DNA条带位置时,应使用长波长紫外灯,以最大限度减少对DNA的照射损伤。437、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型,m-表示修饰缺陷型,rec-表示重组缺陷型。38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时,DNA以DNA-Ca2+复合物形式吸附于细胞表面。39、TaqDNA聚合酶具有,缺乏因此无。5‘→3‘聚合酶活性,3’→5‘外切酶活性,校正功能40、PCR循环次数一般设定为,过多的循环次数会导致的出现。25-30次,PCR反应“平台效应”。41、如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端,则可以用__________进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端,可以用__________________进行3’末端标记。Klenow酶填补的方法;T4DNA聚合酶42、限制酶是一类专门切割DNA的酶,它能特异性识别切割双链DNA。43、需要部分酶切时可采取的方法有:减少酶的用量;缩短反应时间;增大反应体积。45、重组DNA技术的基本过程:①目的基因的制备;②载体的选择和制备;③DNA分子的体外连接;④将重组DNA导入宿主细胞;⑤重组体的筛选和鉴定;⑥重组体的扩增、表达和其他研究。46、在分离质粒DNA的菌体培养过程中,加入氯霉素有两个好处:可以扩增质粒DNA;抑制了菌体的数量,有利于裂解。48、II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。50、基因工程受体菌的基因型常为r-m-rec-,r-表示限制缺陷型,m-表示修饰缺陷型,rec-表示重组缺陷型。52、核酸的体外标记法分为和。化学法;酶法53、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。125I;光敏生物素标记。54、影响核酸分子杂交的因素有:(1)核酸分子的浓度与长度;(2)温度;(3)离子强度;(4)甲酰胺;(5)核酸分子的复杂性;(6)非特异性杂交反应等。三、选择题(20%)1、下列有关基因工程技术的叙述,正确的是()CA.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达2、下列不属于获取目的基因的方法是()B5A.“鸟枪法”B.转录法C.反转录法D.根据已知氨基酸序列合成法3、以下说法正确的是()AA.在真核细胞的基因结构中,编码区也含有不能编码蛋白质的序列B.终止子是转录终止的信号,因此它的DNA序列与终止密码TAA相同C.基因的非编码区通常不起什么作用D.启动子的作用是阻碍RNA聚合酶的移动,并使其从DNA模板链上脱离下来4、Ⅱ型限制性内切核酸酶:()B(A)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(B)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供(C)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(D)有外切核酸酶和甲基化酶活性(E)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供5、关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有()不太恰当。B(A)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(B)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶(C)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(D)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统6.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好?()B(A)反应时间(B)酶量(C)反应体积(D)酶反应的温度7、限制性内切核酸酶可以特异性地识别:()B(A)双链DNA的特定碱基对(B)双链DNA的特定碱基序列(C)特定的三联密码(D)以上都正确8、在基因工程中,可用碱性磷酸酶()A(A)防止DNA的自身环化(B)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5′末端标记(C)制备突出的3′末端(D)上述说法都正确9、下面关于松