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药物分析实验二药物特殊杂质检查1.掌握本实验中药物特殊杂质的来源途径和检查原理2.掌握薄层色谱法用于特殊杂质检查的一般操作一、实验目的要求二、薄层层析概述1.薄层层析（ThinLayerChromatography,TLC）将固定相均匀地涂铺在表面光洁的玻璃板或其他支持物上制成的一薄层，在此薄层上进行混合物分离的一种色谱。主要特点：设备简便、操作方便、快速分离、显色方便，同时与柱色谱相比，它具有多路柱效应，可同时进行多个样品的分离，并可以对同一块板采用多种方法进行检测。分离原理：吸附、分配（一）分离原理及基本参数ABL0L1前沿起始线（原点）2.定性参数（1）比移值（Rf）Rf=L1L0（2）相对比移值（Rr）Rr=LaLs3.分离参数分离度（R）=d(W1+W2)/24.理论塔板数（N）WN=16（）L2（二）薄层色谱操作技术1.制板（1）吸附剂选择依据样品的性质较常用的吸附剂：硅胶和氧化铝软板硬板加粘合剂（煅石膏、CMC-Na、聚丙烯酸）硅胶H硅胶G硅胶HF254硅胶GF254（2）铺板方法①载板的准备②薄层板的涂铺厚度一般为0.25-0.5mma.硅胶G板的铺制硅胶G：水（1：2-3）b.硅胶CMC板的铺制CMC-Na0.25%-0.75%水溶液加入乙醇防止薄层表面出现气泡c.铺板方法手动和机械d.活化105-110℃活化1小时2.点样（1）样品一般溶解于低沸点的溶剂里（2）点样量1-10μl（3）可以用点样毛细管或微量点样器（4）点样距板下端1.5-2cm，点之间距离一般1-2cm（5）样品点可以是圆点（2-3mm）或条状（制备）3.展开（1）展开剂的选择常用的单一溶剂极性顺序：石油醚四氯化碳苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇吡啶酸水被分离物质的极性和展开剂的极性相近一般Rf在0.2-0.8之间（2）展开软板选用近水平展开的方式，而硬板常用上行法展开。点样后的薄层板下端浸入展开剂0.5cm左右由于薄层板展开距离短，分离效果受到一定限制，所以，也采用双向展开、多次展开等。消除边缘效应：展开槽和薄层板充分饱和4.检测（1）物理检测利用化合物在紫外灯下的光学性质进行检测（2）化学检测①蒸气显色比如固体碘、浓氨水②喷雾显色注意：展开剂要挥干；雾滴要细小均匀；控制好显色条件等。（三）定性与定量（1）定性分析多种不同极性的展开系统中Rf值一致。（2）定量分析①目视比较法分析精度可达10%，常用于杂质检查。②洗脱法③薄层扫描法三、药物的特殊杂质检查——氢化可的松中其它甾体的检查特殊杂质的来源：不同的药物，由于其合成工艺、原料和结构性能不同，在生产和贮藏过程中可能引入特有的杂质。薯蓣皂素是合成氢化可的松等甾体类药物的原料。特殊杂质的检查：根据药物和杂质在物理和化学性质上的差异来进行的。氢化可的松中其它杂质用薄层法薄层板的制备：硅胶G5g，加0.3%CMC-Na溶液15ml，研磨至适宜稠度，铺0.2-0.3mm厚薄层板1块。自然干燥后，于105℃活化1小时。检测法：取供试液（3.0mg/ml）和对照液（0.06mg/ml）各5μl在薄层板上点样，在层析缸中用展开剂二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（385：60：30：2）饱和后展开，在通风橱内吹风机吹干，105℃干燥10min，放冷，喷碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。