多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床应用中的评价

1多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床应用中的评价李心河1，单宁宁1，2,高扬1，王惠敏1，刘延红1，夏洪印1，邹雄1，侯明21.山东大学齐鲁医院检验科中心实验室，济南，2500122.山东大学齐鲁医院血液科，济南，250012[摘要]目的:评价多肿瘤标志物蛋白芯片在健康人群的普查、肿瘤的早期诊断及监测预后的应用。方法:使用HD-2OO1A多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统（C-12）测定分析8330例恶性肿瘤患者，9657例良性疾病患者和23531例健康体检者血清12种常见肿瘤标志物(CA199，NSE，CEA，CA242，CA125，CA153，AFP，FER，f-PSA，PSA，β-HCG及HGH)的水平。同时对恶性肿瘤组的153例阴性标本用E170全自动免疫分析仪进行比对分析。结果:恶性肿瘤组的阳性率(85.6%)显著高于良性疾病组(41.2%)和健康体检组(7.03%)(P0.05)。C-12对健康人群检测的特异性为95%，对健康人群肿瘤的检出率为0.2%。结论:多肿瘤标志物蛋白芯片检测技术具有较高灵敏度和特异性。运用蛋白芯片技术联合检测多种肿瘤标志物可以明显提高恶性肿瘤诊断的敏感性，可应用于预后及疗效观察，同时也可以作为无症状人群的早期肿瘤普查手段之一，对肿瘤高危人群的普查具有一定的指导意义。关键词:肿瘤标志物;蛋白芯片；化学发光分析EvaluationofClinicalApplicationofDetectiveSystemofMulti-tumorMarkersProteinChipLiXin-he1,ShanNing-ning1，2,GaoYang1,WangHui-min1,LiuYan-hong1,XiaHong-yin1，ZouXiong1，HouMing2(1.ClinicalLaboratryofQiLuHospital,ShandongUniversity,Jinan250012China2.HaematologyOncologyCentre,QiluHospital,ShandongUniversity,Jinan250012,China)[ABSTRACT]Objective:Identificationofclinicalapplicationstocancerdiagnosiswithmulti-tumormarkersproteinchipanditsspeeificityandsensitivityindetectionofnon-caneersubjeetsandhealthycontrols.Methods:Theserumlevelsof12tumormarkers，includingCA199，NSE，CEA，CA242，CA125，CA153，AFP，Ferritin，Free一PSA，PSA，β-HCGandHGH-----------------------------------------[通讯作者]邹雄(1955-),男,教授,博士研究生导师,研究方向:肿瘤免疫。电话：[phone]e-mail:[e-mail]:ThePositveratesweremeasuredwiththedetectivesystemin8330malignanttumorPatients，9657Patientswithwere(85.6%)inmalignanttumor，(41.2%)benigndiseaseand(7.03%)healthygroups，respectively.Themalignanttumorgrouphadsignifieantlyhigherpositiveratethanthatofthecontrols.Conclusion:Combinedmeasurementofmultipleserumtumormarkersusingproteinbiochiptechniquecansignificantlyincreasethediagnosticsensitivityformalignanttumor，andcanalsobeusedasanearliertumor-screeningtooltoasymptomaticpeople，especiallytothehighriskones.KeyWords:tumormarkers;proteinbioehip;chemiluminescenceassay肿瘤是严重危害人类健康的恶性疾病，其发病率和死亡率有逐年上升的趋势[1]，故早发现、早诊断、早治疗是提高患者生存率的关键。肿瘤标志物的检测在其诊断中有着非常重要的参考价值。多数研究者主张采用联合检测肿瘤标志物的方法,可弥补单项检测的不足,有助于提高肿瘤检出率[2]。上海数康生物科技有限公司研制开发的C-12型肿瘤用蛋白芯片主要是指通过微细加工工艺在固体芯片表面构建的微型化学分析系统,从而实现对12种肿瘤标志物的准确快速与大信息量的检测[3]。本实验室采用该诊断系统自2003年1月至今，对8330例各期肿瘤患者、9657例良性疾病患者、163例肿瘤术后监测者和23531名正常健康人群血清中甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖原199(CA199)、糖原242(CA242)、糖原(CA125)、糖原153(CA153)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、前列腺特异抗原(PSA)、游离前列腺特异抗原(f-PSA)、铁蛋白(FER)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG),人生长激素(HGH)含量进行分析。利用多因素判别分析探讨其在临床诊断中的使用价值。材料和方法1.检测对象:恶性肿瘤组8330例均为本院2003年1月至2008年4月住院及门诊患者，经临床手术及病理检查确诊，男性4693例，女性3637例，年龄15-89岁，平均年龄53岁；肿瘤术后监测组163例，均为恶性肿瘤组患者经手术、放3化疗后定期监测者，男性91例，女性72例。年龄16-79岁，平均46岁；良性疾病组9657例为同期住院及门诊患者，男性4569例，女性5088例，年龄17-81岁，平均49岁；健康体检组:健康体检者23531例,8-92岁，平均年龄51岁。2.血清的检测方法：按照数康生物科技有限公司多种肿瘤标志物蛋白质芯片诊断系统进行多肿瘤标志物测定。3.检测项目的正常参考范围:试剂盒提供的正常参考值见表1。表1C-12蛋白芯片肿瘤标志物正常参考值肿瘤标志物参考值肿瘤标志物参考值CA12535kU/LNSE13ng/mlCA19935kU/LPSA5ng/mLCA15335kU/Lf-PSA1ng/mLCA24220kU/Lβ-HCG3mIU/mLCEA5ng/mlHGH7.5ng/mLAFP20ng/mlFER322ng/mL(男)；219ng/mL(女)4.评价方法:分组统计阳性例数：如有指标超过临界值即阳性(铁蛋白单独升高不计入阳性数)。5.统计方法所有数据均应用SPSS11.0统计学软件处理。各统计学指标用均值士标准差表示。结果1.恶性肿瘤组与良性疾病组，健康体检组阳性率比较恶性肿瘤组的阳性率(81.4%)显著高于良性疾病组(38%)及健康体检组(7.5%)(P0.05)。结果见表2。表2蛋白芯片对各组检测的阳性率(%)组别例数阳性数阴性数阳性率恶性肿瘤组83307130120085.6良性疾病组96573979567841.2健康体检组235311656218757.034随机抽取蛋白芯片测得的153例肿瘤标志物为阴性的样本同时用E170进行单个肿瘤标志的检测。结果显示没有显著性差异，蛋白芯片检测为阴性的单个肿瘤标志物检测亦为阴性。2.恶性肿瘤组的检测结果用蛋白芯片技术联合检测不同恶性肿瘤患者血清,肝癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、结直肠癌阳性率较高，分别为85.6%，88.7%，79.4%，69.9%，61.9%，76.4%。各种恶性肿瘤的肿瘤标志物的阳性率详见表3（图1），表4。表3蛋白芯片检测常见肿瘤的阳性率组别例数阳性数阳性率肝癌102586083.9胃癌126878561.9食管癌76842755.6结直肠癌1381105576.4肺癌2112147669.9胰腺癌42137388.7卵巢癌96176379.4子宫癌1568956.9前列腺癌1268063.5鼻咽癌983536.1睾丸癌14431.2图1蛋白芯片检测常见肿瘤的阳性率5020406080100肝癌食管癌肺癌卵巢癌前列腺癌睾丸癌阳性率表4恶性肿瘤各种肿瘤指标的阳性率(总数11256例)组别例数CA199NSECEACA242FERβ-HCGAFPf-PSAPSACA125HGHCA153肝癌102551.25.636.29.668.49.475.12.32.335.45.213.8胃癌126856.26.157.639.374.115.811.90.350.5161.54.8719.1食管癌76837.50.216.79.753.56.20.10.20.634.508.5结直肠癌138157.66.042.439.148.609.680.30.547.50.116.3肺癌211218.713.640.821.870.67.521.62.35.647.56.811.5胰腺癌42174.10.950.653.461.39.610.30.10.926.670.67.3卵巢癌96121.50.414.51.430.541.510.20062.50.112.4子宫癌15612.21.849.113.742.322.813.90060.313.19.5前列腺癌12610.81.93.90.720.90.10.865.780.9004.6鼻咽癌9816.90.36.914.257.20.35.40022.106.4睾丸癌140.1001.611.25271.63.63.60002.肿瘤术后监测组检测结果：对49例C-12阳性的肺癌患者，52例肝癌患者，14例卵巢癌患者，48例结直肠癌患者分别于根治性手术后第3-4周、第6-9周、3个月、6个月、12个月进行跟踪检测。检测值在第3-4周明显下降，与术前检测值有明显差异（P＜0.05）。但术后3个月，6个月，12个月血清肿瘤标志物之间无明显差异，见表5。在随访过程中，5例肺癌，6例肝癌，1例卵巢，4例结直肠癌患者检测中出现阳性并呈上升趋势，后经临床检查如CT，B超或手术后病理检测确定为肿瘤复发或发生转移。6表5C-12阳性的肝癌组术前、术后肿瘤标志物血清水平(X±S)组别术前（52例）术后3-4周（51例）术后6-9周（49例）术后3月（47例）术后6月（40例）术后12月（39例）CA19975.24±83.7244.58±35.1425.65±24.3820.54±23.6319.98±17.4419.54±20.63NSE3.25±2.242.11±2.152.94±3.112.44±2.332.10±1.982.83±1.17CEA39.47±40.7517.75±18.347.76±10.486.58±6.134.37±5.133.96±7.11CA24215.64±25.198.52±9.2812.54±11.7310.72±11.436.19±5.3611.44±7.51FER410.73±125.78211.14±98.63256.19±111.61278.51±142.82212.85±101.77199.52±191.77β-HCG0.97±0.770.81±0.650.55±0.550.54±0.600.67±0.590.47±0.74AFP332.73±125.7846.14±58.6319.19±18.1118.51±16.8217.85±23.7712.85±30.77f-PSA0.