乳与乳制品检验

食品安全国家标准食品微生物学检验乳与乳制品检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Milkandmilkproducts2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布前言本标准代替GB/T4789.18-2003《食品卫生微生物学检验乳与乳制品检验》。本标准与GB/T4789.18-2003相比，主要变化如下：——修改了标准的中英文名称；——修改了“范围”和“规范性引用文件”；——修改了采样方案和各类乳制品的处理方法。本标准所代替的历次版本发布情况为：——GB4789.18-1984、GB4789.18-1994、GB/T4789.18-2003。食品安全国家标准食品微生物学检验乳与乳制品检验1范围本标准适用于乳与乳制品的微生物学检验。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3设备和材料3.1采样工具采样工具应使用不锈钢或其他强度适当的材料，表面光滑，无缝隙，边角圆润。采样工具应清洗和灭菌，使用前保持干燥。采样工具包括搅拌器具、采样勺、匙、切割丝、刀具（小刀或抹刀）、采样钻等。3.2样品容器样品容器的材料（如玻璃、不锈钢、塑料等）和结构应能充分保证样品的原有状态。容器和盖子应清洁、无菌、干燥。样品容器应有足够的体积，使样品可在测试前充分混匀。样品容器包括采样袋、采样管、采样瓶等。3.3其他用品包括温度计、铝箔、封口膜、记号笔、采样登记表等。3.4实验室检验用品3.4.1常规检验用品按GB4789.1执行。3.4.2微生物指标菌检验分别按GB4789.2、GB4789.3、GB4789.15执行。3.4.3致病菌检验分别按GB4789.4、GB4789.10、GB4789.30和GB4789.40执行。3.4.4双歧杆菌和乳酸菌检验分别按GB/T4789.34、GB4789.35执行。4采样方案样品应当具有代表性。采样过程采用无菌操作，采样方法和采样数量应根据具体产品的特点和产品标准要求执行。样品在保存和运输的过程中，应采取必要的措施防止样品中原有微生物的数量变化，保持样品的原有状态。4.1生乳的采样4.1.1样品应充分搅拌混匀，混匀后应立即取样，用无菌采样工具分别从相同批次（此处特指单体的贮奶罐或贮奶车）中采集n个样品，采样量应满足微生物指标检验的要求。4.1.2具有分隔区域的贮奶装置，应根据每个分隔区域内贮奶量的不同，按比例从中采集一定量经混合均匀的代表性样品，将上述奶样混合均匀采样。4.2液态乳制品的采样适用于巴氏杀菌乳、发酵乳、灭菌乳、调制乳等。取相同批次最小零售原包装，每批至少取n件。4.3半固态乳制品的采样4.3.1炼乳的采样适用于淡炼乳、加糖炼乳、调制炼乳等。4.3.1.1原包装小于或等于500g（mL）的制品：取相同批次的最小零售原包装，每批至少取n件。采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。4.3.1.2原包装大于500g（mL）的制品（再加工产品，进出口）：采样前应摇动或使用搅拌器搅拌，使其达到均匀后采样。如果样品无法进行均匀混合，就从样品容器中的各个部位取代表性样。采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。4.3.2奶油及其制品的采样适用于稀奶油、奶油、无水奶油等。4.3.2.1原包装小于或等于1000g（mL）的制品：取相同批次的最小零售原包装，采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。4.3.2.2原包装大于1000g（mL）的制品：采样前应摇动或使用搅拌器搅拌，使其达到均匀后采样。对于固态制品，用无菌抹刀除去表层产品，厚度不少于5mm。将洁净、干燥的采样钻沿包装容器切口方向往下，匀速穿入底部。当采样钻到达容器底部时，将采样钻旋转180°，抽出采样钻并将采集的样品转入样品容器。采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。4.4固态乳制品采样适用于干酪、再制干酪、乳粉、乳清粉、乳糖和酪乳粉等。4.4.1干酪与再制干酪的采样4.4.1.1原包装小于或等于500g的制品：取相同批次的最小零售原包装，采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。4.4.1.2原包装大于500g的制品：根据干酪的形状和类型，可分别使用下列方法：（1）在距边缘不小于10cm处，把取样器向干酪中心斜插到一个平表面，进行一次或几次。（2）把取样器垂直插入一个面，并穿过干酪中心到对面。（3）从两个平面之间，将取样器水平插入干酪的竖直面，插向干酪中心。（4）若干酪是装在桶、箱或其它大容器中，或是将干酪制成压紧的大块时，将取样器从容器顶斜穿到底进行采样。采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。4.4.2乳粉、乳清粉、乳糖、酪乳粉的采样适用于乳粉、乳清粉、乳糖、酪乳粉等。4.4.2.1原包装小于或等于500g的制品：取相同批次的最小零售原包装，采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。4.4.2.2原包装大于500g的制品：将洁净、干燥的采样钻沿包装容器切口方向往下，匀速穿入底部。当采样钻到达容器底部时，将采样钻旋转180°，抽出采样钻并将采集的样品转入样品容器。采样量不小于5倍或以上检验单位的样品。5检样的处理5.1乳及液态乳制品的处理将检样摇匀，以无菌操作开启包装。塑料或纸盒（袋）装，用75%酒精棉球消毒盒盖或袋口，用灭菌剪刀切开；玻璃瓶装，以无菌操作去掉瓶口的纸罩或瓶盖，瓶口经火焰消毒。用灭菌吸管吸取25mL（液态乳中添加固体颗粒状物的，应均质后取样）检样，放入装有225mL灭菌生理盐水的锥形瓶内，振摇均匀。5.2半固态乳制品的处理5.2.1炼乳清洁瓶或罐的表面，再用点燃的酒精棉球消毒瓶或罐口周围，然后用灭菌的开罐器打开瓶或罐，以无菌手续称取25g检样,放入预热至45℃的装有225mL灭菌生理盐水（或其他增菌液）的锥形瓶中，振摇均匀。5.2.2稀奶油、奶油、无水奶油等无菌操作打开包装，称取25g检样,放入预热至45℃的装有225mL灭菌生理盐水（或其他增菌液）的锥形瓶中，振摇均匀。从检样融化到接种完毕的时间不应超过30min。5.3固态乳制品的处理5.3.1干酪及其制品以无菌操作打开外包装，对有涂层的样品削去部分表面封蜡，对无涂层的样品直接经无菌程序用灭菌刀切开干酪，用灭菌刀（勺）从表层和深层分别取出有代表性的适量样品，磨碎混匀，称取25g检样，放入预热到45℃的装有225mL灭菌生理盐水（或其他稀释液）的锥形瓶中，振摇均匀。充分混合使样品均匀散开（1min～3min），分散过程时温度不超过40℃。尽可能避免泡沫产生。5.3.2乳粉、乳清粉、乳糖、酪乳粉取样前将样品充分混匀。罐装乳粉的开罐取样法同炼乳处理，袋装奶粉应用75%酒精的棉球涂擦消毒袋口,以无菌手续开封取样。称取检样25g，加入预热到45℃盛有225mL灭菌生理盐水等稀释液或增菌液的锥形瓶内（可使用玻璃珠助溶），振摇使充分溶解和混匀。对于经酸化工艺生产的乳清粉，应使用pH8.4±0.2的磷酸氢二钾缓冲液稀释。对于含较高淀粉的特殊配方乳粉，可使用α-淀粉酶降低溶液粘度，或将稀释液加倍以降低溶液粘度。5.3.3酪蛋白和酪蛋白酸盐以无菌操作，称取25g检样，按照产品不同，分别加入225mL灭菌生理盐水等稀释液或增菌液。在对粘稠的样品溶液进行梯度稀释时，应在无菌条件下反复多次吹打吸管，尽量将粘附在吸管内壁的样品转移到溶液中。5.3.3.1酸法工艺生产的酪蛋白：使用磷酸氢二钾缓冲液并加入消泡剂，在pH8.4±0.2的条件下溶解样品。5.3.3.2凝乳酶法工艺生产的酪蛋白：使用磷酸氢二钾缓冲液并加入消泡剂，在pH7.5±0.2的条件下溶解样品，室温静置15min。必要时在灭菌的匀浆袋中均质2min，再静置5min后检测。5.3.3.3酪蛋白酸盐：使用磷酸氢二钾缓冲液在pH7.5±0.2的条件下溶解样品。6检验方法6.1菌落总数：按GB4789.2检验。6.2大肠菌群：按GB4789.3中的直接计数法计数。6.3沙门氏菌：按GB4789.4检验。6.4金黄色葡萄球菌：按GB4789.10检验。6.5霉菌和酵母：按GB4789.15计数。6.6单核细胞增生李斯特氏菌：按GB4789.30检验。6.7双歧杆菌：按GB/T4789.34检验。6.8乳酸菌：按GB4789.35检验。6.9阪崎肠杆菌：按GB4789.40检验GB/T4789.18-2003检验方法中华人民共和国国家标准GB4789.35—2010食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Lacticacidbacteria2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布前言本标准代替GB/T4789.35-2008《食品卫生微生物学检验食品中乳酸菌检验》。本标准与GB/T4789.35-2008相比，主要变化如下：——修改了乳酸菌总数、乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌的计数方法。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB4789.35-1996、GB/T4789.35-2003、GB/T4789.35-2008。1范围本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lacticacidbacteria）的检验方法。本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3术语和定义3.1乳酸菌lacticacidbacteria一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和链球菌属（Streptococcus）。5培养基和试剂5.1MRS（ManRogosaSharpe）培养基测乳酸菌总数蛋白胨10.0g牛肉粉5.0g酵母粉4.0g葡萄糖20.0g吐温801.0mLKHPO·7HO2.0g醋酸钠·3H2O5.0g柠檬酸三铵2.0gMgSO·7HO0.2gMnSO·4HO0.05g琼脂粉15.0gpH6.2莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS培养基BifidobacteriumA.1.1莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）加入到50mL蒸馏水中，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。（莫匹罗星，其化学名为：9-{4-[5-(2,3-环氧-5-羟基-4-甲基己基)-3,4-二羟基四氢吡喃-2-基]-3-甲基丁-2-烯酰氧}壬酸化学结构式：分子式：C26H44O9分子量：500.6）将A.1.1成分加入到950mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后于121℃高压灭菌15min～20min。临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48℃，用带有0.22μm微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）储备液加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）的浓度为50μg/mL。MC培养基Streptococcus大豆蛋白胨5.0g牛肉粉3.0g酵母粉3.0g葡萄糖20.0g乳糖20.0g碳酸钙10.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mL1％中性红溶液5.0mLpH6.0乳酸杆菌糖发酵管牛肉膏5.0g蛋白胨5.0g酵母浸膏5.0g吐温800.5mL琼脂1.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液1.4mL蒸馏水1000mL制法按0.5%加入所需糖类，并分装小试管,121℃高压灭