网织红细胞检测

网织红细胞检测技术及临床应用任燕歌概念网织红细胞（reticulocyte,Ret或Reti）界于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞。因其胞质中残存的核糖核酸经碱性染料活体染色后，呈现点状或线网状结构，故名网织红细胞。单能干细胞原始红细胞早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞多能干细胞红细胞发育过程图各种网织红细胞网织红细胞检测技术网织红细胞计数方法活体染色手工镜检血液自动分析仪法流式细胞术检测法手工镜检法原理活体染料的碱性着色基团（带正电荷）可与网织红细胞RNA的磷酸基（带负电荷）结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成有色的点状、线状甚至连缀成网状结构，而血红蛋白着色相对较淡。借此在光镜下与成熟红细胞相区别。操作方法①取干净试管一只，加入10g/L煌焦油蓝溶液2~3滴，然后加入等量的血液混匀后放置15~20min，使红细胞充分染色；②取少许染色好的血液，在洁净载玻片上推成薄而均匀的血膜，干燥后用瑞氏染液复染(也可不复染）；③在显微镜低倍镜下选择细胞分布均匀着色清晰的部位，用油镜在血片上计数至少1000个红细胞分布区域内的网织红细胞再除以1000计算出网织红细胞的百分率。同时进行红细胞计数，可计算网织红细胞的绝对值。活体染色图常用仪器检测ADVIA120仪器对Retc可提供6个参数，包括网织红细胞总数（Retic#）、网织红细胞百分比（Retic%）、网织红细胞平均体积（MCVr）、单个网织红细胞平均血红蛋白浓度（CHCMr）、网织红细胞分布宽度（RDWr）、单个网织红细胞血红蛋白含量（CHr）等其中意义最大的除了总数，百分比以外，最重要的网织红细胞血红蛋白含量（CHr）参数。最大的优点之一是随时可计数Retic,十分便利，而且计数的细胞多，故很准确。检测仪器根据网织红细胞发射荧光强弱来判别区分网织红细胞成熟程度，不同成熟阶段的网织红细胞含有不同量的RNA，从而根据荧光强度而获得低、中、高荧光强度网织红细胞群。LMH检测技术流式细胞术（flowcytometry）原理RNA经碱性荧光染料处理后，根据荧光强度反映细胞内RNA含量，可将Reti分为高荧光强度网织红细胞（HFR）、中等荧光强度网织红细胞（MFR）和低荧光强度网织红细胞（LFR）三部分。利用上述三个指标可计算网织红细胞的成熟指数（reticulocytematerationindex,RMI）。RMI对评价骨髓移植后造血功能恢复情况和EPO的疗效，以及监护放、化疗对骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。检测图示网织红细胞平面散射图方法学评价手工镜检法的优点是便捷、成本低。目前仍为临床实验室的常规检验方法。但致命的缺点是影响因素多、重复性差，CV≥20%，以低Reti的标本尤为明显。即使进行绝对值计算，也因Reti计数不准确、某些贫血网织红细胞提前释放而失去其可靠性。这些不足严重影响了该指标的临床应用。须加强质量控制，必要时对计数结果加以校正。方法学评价自动化仪器在许多方面具有标准化程序，试剂稳定、反应时间一致，计数细胞量大、具有质控和校准能力，因此在精密度和准确度上明显优于显微镜计数法。但仪器价格比较偏高，试剂成本和质控成本大，影响到基层医院、小型实验室的使用期望及推广。临床应用部分临床参考范围目前临床上网织红细胞的参考范围为成人：0.8%~2.0%,绝对值（25~75）*109/L新生儿：2.0%~6.0%网红的总数或百分比对贫血的临床诊断及疗效观察非常有价值，是血液最常做的项目之一。临床意义网织红细胞不仅仅是个计数参数问题，更有许多新的参数被引入临床应用、科研和基础研究。网织红细胞的增加或减少直接反映了骨髓红细胞的生成能力，主要用于对红细胞减少性疾病、溶血性贫血、治疗监测或骨髓移植后骨髓造血功能的恢复、监测放疗和化疗对骨髓造血功能的影响评估等方面。网织红细胞增高提示骨髓造血功能旺盛见于各种增生性贫血如缺铁性贫血、巨幼细胞性(缺乏叶酸、维生素B12)贫血、失血性贫血,尤以溶血性贫血时增加最为显著,常10%。缺铁性贫血及巨幼细胞性贫血在给予铁剂、维生素B12、叶酸治疗之后,可见网织红细胞明显增加。小细胞贫血单个网红内血红蛋白含量（CHr）,小红细胞比率（%Micro）/低色素红细胞比率（%Hyp）即M/H对缺铁性贫血是很好的指标。缺铁性贫血缺铁性贫血正细胞贫血网织红细胞增高正常或减低急性出血溶血综合征骨髓衰减慢性贫血网织红细胞减低提示骨髓造血功能低下,常见于再生障碍性贫血。绝对值低于5×109/L可做为急性再生障碍性贫血的辅助诊断指标。此外，还可见于骨髓浸润性贫血如急性白血病等。图2骨髓浸润性贫血图1再障性贫血大细胞贫血网织红细胞降低增高叶酸、VitB12缺乏未经治疗的叶酸、VitB12缺乏叶酸或VitB12缺乏的急性失血网织红细胞反应缺铁性贫血或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2-3d后，网织红细胞计数值开始上升，7-10d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。该过程表示贫血得到纠正。若网织红细胞居高不下，提示尚未达到治疗效果。重要分析参数网织红细胞血红蛋白含量（CHr）BAYERADVIA120血液分析特有的测定参数之一，目前被认为具有诊断和疗效观察价值的新的网织红测定参数。CHr已经被FDA认可作为临床报告参数，正常人CHr28.0pg/L网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数（RMI）计算参数计算公式：RMI=（MFR+HFR）/LFR×100%※RMI对评价骨髓移植后造血功能恢复情况和EPO的疗效，以及监护放、化疗对骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。临床价值血液病的诊断和治疗网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，在周围血液中的数值可反映骨髓红细胞的生成功能，因而对血液病的诊断和治疗反应的观察均有其重要意义。放、化疗监测机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。前景展望网织红细胞分析具有很广泛的应用前景，新技术和新参数的应用给临床诊断治疗和监测带来新的研究方向和发展。谢谢！