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6.1微生物的纯培养纯培养：在无菌（无活的微生物存在）条件下通过分离和培养就可获得只含一种微生物的培养物即纯培养。纯培养的分离技术——重点（一）微生物接种技术（二）微生物分离纯化技术无菌技术概念：将微生物分离、转接及培养时防止被其他微生物污染的技术，称为无菌技术。1、对使用的器具及培养基的灭菌2、创造无菌的环境无菌箱、超净工作台、无菌室工作服、酒精消毒手及台面操作过程，使用前需灭菌工作完的材料需消毒处理不许吃东西123456（一）微生物接种技术1.斜面接种法P215菌种管在前，接种管在后，管口对齐，斜面向上，斜持试管10～45°，不要持成水平（一）微生物接种技术2.穿刺接种法P215（一）微生物接种技术3.液体接种法（二）微生物分离纯化技术无菌吸取方法123摇平冷却倒入量：15～20ml倒入温度：45～50℃4倒置培养（二）微生物分离纯化技术1.稀释平板法起点1灼烧起点2起点3待分离菌液1）连续划线法2）分区划线法（二）微生物分离纯化技术2.平板划线法（二）微生物分离纯化技术3.平板涂布法15稀释平板测数法（混融法和涂布法）.wmv6.1.3微生物的培养方法1、好氧培养（1）固体培养（2）液体培养2、微需氧培养3、厌氧培养焦性没食子酸法厌氧罐法CO2培养法【实验】十一微生物分离纯化及无菌操作技术P组别培养基名称实验材料(稀释液)实验方法（平板法）培养对象培养时间一组牛肉膏蛋白胨培养基土壤稀释液稀释平板法(半)平板划线法(半)细菌2~3d二组豆芽汁葡萄糖培养基活性干酵母稀释液涂布法(半)平板划线法(半)酵母菌3~4d三组高氏一号培养基土壤稀释液稀释平板法(半)涂布法(半)放线菌7~10d四组PDA培养基霉变橘皮稀释液稀释平板法(半)涂布法(半)霉菌5~7d【备注】每人做相应的平板1个，相应的斜面1支【今天实验】十四食品中细菌总数测定（P218）原理：细菌菌落总数/1g(1ml)样品中操作要点：注意无菌操作1.取样：25g(ml)样品＋225ml无菌水＝10倍稀释样液样液处理:(P192)饼干、酱油、冰激凌、果冻、自来水2.稀释：1ml样液＋9ml无菌水→一次稀释至10－73.到平板：1ml样液＋培养基25～30ml→混匀→冷却4.贴标签→倒置→37℃培养48h结果记录：P177结果分析：对照组1641365164×106＝1.64×108菌落/1g20295取平均菌落数30~300的结果报告27604646×107/295×106=1.6＜2,取二者平均值27602716060×107/271×106=2.2＞2,取稀释度较小的值无法计数4650513所有稀释度均﹥300，取稀释度最大的值所有稀释度均＜30，取稀释度最小的值27115无法计数30512所有稀释度均不在30～300，取最接近30或300的稀释度的值10倍稀释样液实验报告总结一：关于菌落特征单个或少数细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。大肠杆菌平板菌落细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征因种而异。有“臭气味”大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。有“酒香味”酵母菌落放线菌菌落放线菌菌落特征：放线菌菌丝相互交错缠绕形成质地致密的小菌落，干燥、不透明、难以挑取，当大量孢子覆盖于菌落表面时，就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线菌菌落，由于基内菌丝和孢子常有颜色，使得菌落的正反面呈现出不同的色泽。有泥腥味霉菌的菌落较大，有的霉菌的菌丝蔓延，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径1-2厘米或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。微生物类别菌落特征单细胞微生物菌丝状微生物细菌酵母菌放线菌霉菌菌落含水情况很湿或较湿较湿干燥较干燥外观特征小而突起或大而平坦大而突起小而紧密大而疏松或大而致密参考特征菌落透明度透明或稍透明稍透明不透明不透明菌落与培养基结合度不结合不结合牢固结合较牢固结合菌落的颜色多样单调十分多样十分多样正反面颜色差别相同相同一般不同一般不同细胞生长速度一般很快较快慢一般较快气味一般有臭味多带酒香有泥腥味有霉味菌名菌落特征描写大小形态干湿透明度结合度颜色正反差别气味生长速度大肠杆菌葡萄酵母放线菌黑根霉黑曲霉桔青霉黄曲霉小而突起圆点状光滑湿润粘稠半透明不结合土黄色无臭快较大而厚圆形同上不透明同上乳白色无酒香较快小薄致密放射状干燥不透明紧密土黄色有泥腥慢大而疏松蔓延无网状干燥干燥干燥干燥不透明不透明不透明不透明较紧密较紧密较紧密较紧密有有有有较快较快较快较快大而疏松大而疏松大而致密圆形绒状圆形绒状圆形皱褶黑色黑色黄色灰绿色霉味同上同上同上考考你实验报告总结二