实验一中药显微鉴定技术（一）

1实验二中药显微鉴定技术（二）【目的要求】1.掌握常用细胞壁显微鉴定技术2.掌握常用细胞内含物显微鉴定方法3.练习显微观察方法【仪器、试剂、材料】1.仪器生物显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，显微描绘器，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，酒精灯，单面刀片，粉碎机，绘图板，铅笔等。2.试剂水合氯醛试剂，苏丹Ⅲ试液，稀甘油试剂，盐酸，硝酸，碘化铋钾试剂，氯化锌碘试液，硫酸，α-萘酚浓硫酸试液，碘试液，间苯三酚试液，钌红试液，硝酸汞试液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，α-萘酚乙醇溶液，稀盐酸，稀醋酸等。3.药材样品牛膝、薄荷、石斛、4.药材粉末大黄、肉桂、山药、黄芪、金银花、红花、洋金花、半夏、桔梗、木香、穿心莲【实验内容】一、用于组织切片及粉末药材的封藏剂1．水合氯醛试液为常用优良的化学透明剂之一，特点是能迅速透入组织，使干燥收缩的细胞逐渐膨胀复原，并能溶解大多数细胞内含物，如淀粉粒、叶绿体、菊糖、树脂、蛋白质、挥发油等，使细胞组织清晰透明，易于观察。用水合氯醛装片可观察各种组织特征，各种结晶，如草酸钙结晶、碳酸钙结晶和硅质块，各类细胞形状，如导管、纤维、石细胞、木栓细胞等。不加热装片可观察菊糖、橙皮苷结晶等。天冷时，水合氯醛装片后易析出结晶，可加一滴稀甘油避免。2．稀甘油为物理性透明剂，能较快的透入组织，形成良好的透光条件，一般作临时封藏剂，常用于观察胡粉粒和菌丝等。3．甘油醋酸（斯氏液）用于观察淀粉粒或测量其大小的封藏剂。也可以用乳酸酚溶液代替。4．乙醇根据不同目的，选用不同浓度的乙醇装片。50％以上浓度的乙醇可以固定乳管；80～90％浓度的乙醇可以固定和观察菊糖；95％的乙醇可以观察黏液细胞；100%乙醇可用于植物叶绿体脱色；低浓度（10～30％）乙醇可以代替水软化含黏液质的材料。5．蒸馏水可以溶解水溶性物质，透入组织较快，但不能溶解大多数细胞内含物，透明度差，易干燥。可用于检查淀粉粒的有无或配合其他试剂检查细胞壁和细胞内含物的性质。二、用于检查细胞壁和细胞内含物性质的试剂1.间苯三酚试液常与浓盐酸配用，检查木化细胞壁。加间苯三酚试液1～2滴，稍放置，再加浓盐酸1滴，木化细胞壁因木化程度不同，显淡红色、红色或紫红色。2．氯化锌碘试液检查纤维素细胞壁。加氯化锌碘试液或先加碘试液后，稍放置，用滤纸条吸去多余的碘液，再加66％硫酸溶液，纤维素细胞壁显蓝色或紫色。3．苏丹Ⅲ试液检查角质化或栓质化细胞壁，以及脂肪油、挥发油和树脂等细胞内含物。加苏丹Ⅲ试液，放置15min以上，或微加热，角质化、栓化细胞壁显桔红色至红色；脂肪油、挥发油和树脂显桔红色、红色或紫红色。4．碘试液检查淀粉粒和糊粉粒。加碘试液，淀粉粒显蓝色或蓝紫色；糊粉粒显棕色或黄棕色，后者加硝酸汞试液，显砖红色。5．α－萘酚试液常与浓硫酸配用，检查菊糖等。26．钌红试液检查黏液质。加钌红试液，黏液质显红色。也可用95％乙醇装片，观察黏液细胞形状后，自玻片的一边引入1滴蒸馏水，可见黏液细胞逐渐膨胀，黏液质溶解而扩散。7．稀醋酸草酸钙结晶加稀醋酸后不溶解。8．稀盐酸加稀盐酸，草酸钙结晶和碳酸钙结晶均溶解，而碳酸钙结晶溶解并产生气泡。9．稀（20％）硫酸加20％硫酸，草酸钙结晶和碳酸钙结晶均溶解，并可产生硫酸钙针晶，而碳酸钙结晶溶解并产生气泡。硅质块在各种稀酸中均不溶解。三、试验观察1.淀粉粒取半夏粉末水装片，观察淀粉粒的类型、形状，观察脐点的形状、位置，层纹的有无。用碘试液检验。2.石细胞取黄柏粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述石细胞的形状、颜色，观察细胞壁及孔沟的特征。用间苯三酚-浓盐酸制片，观察和描述石细胞壁的木化情况。3.纤维取肉桂粉末少许，制水合氯醛透化片，观察并描述韧皮纤维的分布状态、形状、颜色、细胞壁的特征，测量细胞的长度和直径。用间苯三酚-浓盐酸制片，观察和描述细胞壁的木化情况。4.木栓细胞取黄芪粉末少许，制水合氯醛透化片，观察并描述木栓细胞的存在状态、切面观和表面观的形状、颜色。用间苯三酚-浓盐酸试液制片，观察和描述木栓细胞的木化情况；用苏丹Ⅲ试液制片，观察和描述木栓细胞的木栓化情况。5.草酸钙针晶取山药粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述草酸钙晶体的类型、存在状态。6.碳酸钙晶体（钟乳体）取穿心莲粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述碳酸钙晶体的分布状态、形状、颜色。在制片边缘滴加少许盐酸，观察钟乳体的变化和产生的现象。7.草酸钙晶体取大黄粉末少许，制水合氯醛加热透化片，观察并描述草酸钙晶体的形态、大小、颜色。加20％硫酸检查。8.硅质块晶体取石斛粉末或药材纵切，制水合氯醛加热透化。观察并描述硅质块形状、大小、颜色。加稀酸检查。9.菊糖取木香或桔梗粉末少许，用水或水合氯醛制片（不透化），观察并描述菊糖的分布状态、形状、颜色，表面特征。加α－萘酚试液与浓硫酸检查。10.非腺毛分别取石韦、金银花、艾叶粉末或药材碎片少许，制水合氯醛透化片，观察并描述非腺毛的分布状态、类型、形状、颜色、表面特征、细胞的数目和组成情况。11.腺毛分别取金银花、洋金花等粉末少许，制水合氯醛透化片，观察并描述腺毛的分布状态、形状、颜色、表面特征、腺头和腺柄细胞的数目和组成情况。12.腺鳞取薄荷粉末或药材碎片少许，制水合氯醛透化片，观察并描述腺鳞的分布状态、形状、颜色、表面特征、腺头和腺柄细胞的数目和组成情况，测量腺毛头部柄部的直径。13.花粉粒分别取洋金花、红花等粉末，水合氯醛透化，观察并描述花粉粒的形状、颜色、表面特征等。【作业】1.熟记常用显微鉴定试剂的性质和应用方法。2.记录实验观察内容和检查结果。3实验三中药品质常规检测技术【目的要求】1.掌握中药水分测定法2.掌握中药灰分测定法3.熟悉中药浸出物测定方法4.熟悉中药挥发油测定方法【仪器、试剂、材料】1.仪器水分测定仪，坩埚、马福炉、挥发油测定仪，粉碎机，电热套、玻璃冷凝器、硬质圆底烧瓶、干燥器、电子天平、扁型称量瓶、二号筛、锥形瓶、沸石或玻璃珠等。2.试剂甲苯、蒸馏水、乙醇、五氧化二磷干燥剂、稀盐酸、乙醚。3.药材样品牛膝、薄荷、石斛、4.药材粉末大黄、肉桂、山药、黄芪、金银花、红花、洋金花、半夏、桔梗、木香、穿心莲【实验内容】一、中药品质常规检测技术介绍1．水分测定法测定用的供试品，一般先破碎成直径不超过3mm的颗粒或碎片；直径和长度在3mm以下的可不破碎；减压干燥法需通过二号筛。第一法(烘干法)本法适用干不含或少含挥发性成分的药品。测定法取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm。疏松供试品不超过l0mm,精密称定。打开瓶盖在100～105℃干燥5h，将瓶盖盖好,移置干燥器中，冷却30min，精密称定，再在上述温度干燥1h.冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量〔%)。第二法(甲苯法)本法适用于含挥发性成分的药品。仪器装置，如图。A为500ml的短颈圆底烧瓶；B为水分测定管；C为直形冷凝管，外管长40cm。使用前，全部仪器应清洁。并置烘箱中烘干。测定法取供试品适量{约相当于含水量l～4ml}，精密称定，置A瓶中，加甲苯约200ml，必4要时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒。将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加人甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度。使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时。将冷凝管内部先用甲苯冲洗。再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离〔可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色。以便分离观察〕。检读水量，并计算供试品中的含水量〔％〕。[附注]用化学纯甲苯直接测定，必要时甲苯可先加水少量、充分振摇后放置。将水层分离弃去，经蒸馏后使用。第三法（减压干燥法）本法适用于含有挥发性成分的贵重药品。减压干燥器取直径12cm左右的培养皿，加人五氧化二磷干燥剂适量，使铺成0.5～lcm的厚度，放人直径30cm的减压干燥器中。测定法取供试品2～4g，混合均匀，分取约0.5～1g，置已在供试品同样条件下干燥并称重的称量瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入上述减压干燥器中，减压至2.67kPa(20mmHg)以下持续半小时，室温放置24小时。在减压干燥器出口连接无水氧化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上瓶盖，取出称量瓶迅速精密称定重量，计算供试品中的含水量(%)。五氧化二磷和无水氧化钙为干燥剂，干燥剂应保持有效状态。第四法(气相色潜法)详见《中国药典》2005年版附录ⅨH。2.灰分测定（1）总灰分测定法测定用的供试品须粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品2～3g（如须测定酸不溶性灰分，可取供试品3～5g)，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.01g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600'C'，使完全灰化并至恒重；根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(%)。如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10％硝酸铵溶液2ml，使残渣湿润、然后置水浴上蒸干，残渣照前法炽灼，至坩埚内容物完全灰化。（2）酸不溶性灰分测定法取上项所得的灰分，在坩埚中小心加人稀盐酸约l0ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10min，表面皿用热水5ml冲洗、洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移置同一坩埚中、干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量(%)。3.浸出物含量测定（1）水溶性浸出物测定法测定用的供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。冷浸法取供试品约4g，精密称定，置250～300m]的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外、以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（％）。热浸法取供试品约2～4g，精密称定，置100～250ml的锥形瓶中，精密加水50～100ml,密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管。加热至沸腾、并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）。（2）醇溶性浸出物测定法照水溶性浸出物测定法测定。除另有规定外。以各品种项下规定浓度的乙醇代替水为溶剂。（3）挥发性醚浸出物测定法取供试品(过四号筛)2～5g，精密称定，置五氧化二磷干燥器中干燥12小时。置索氏提取器中，加乙醚适量，除另有规定外，加热回流8小时，取乙醚液，置干燥至5恒重的蒸发皿中，放置，挥去乙醚，残渣置五氧化二磷干燥器中干燥18小时，精密称定，缓缓加热至姆105℃，并于105℃干燥至恒熏。其减失重量即为挥发性醚浸出物的重量。4.挥发油测定测定用的供试品。除另有规定外，须粉碎使能通过二号至三号筛，井混合均匀。仪器装置如图。A为1000ml(或500m1,2000ml)的硬质圆底烧瓶。上接挥发油测定器B，B的上端连接回流冷凝管C，以上各部均用玻璃磨口连接，测定器B应具有0.1ml的刻度。全部仪器应充分洗净，并检查接合部分是否严密、以防挥发油逸出。注：装置中挥发油测定器的支管分岔处应与基准线平行。测定法甲法适用于测定相时密度在1.0以下的挥发油。取供试品适量(约相当于含挥发油0.5～1.0ml)，称定重量(准确至0.01g)，置烧瓶中，加水300-500ml(或适量)与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流人烧瓶时为止。置