常用药品检验仪器介绍_下_李晓东

二、常用药物检验仪器II光谱分析分光光度法*通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度和发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法*常见的波长范围:（1）200～400nm的紫外光区；（2）400～760nm的可见光区；（3）2.5～25m的红外光区。*朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律:A=lg(1/T)=ECLA为吸光度,T为透射比,是投射光强度比上入射光强度E为吸收系数；C为吸光物质浓度,g/100mL；L为吸收层厚度，cm二、常用药物检验仪器II光谱分析*利用物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析的方法。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法(60-400nm)和可见分光光度法(400-750nm)，合称为紫外-可见分光光度法。紫外-可见分光光度法（UV-Vis）光源单色器吸收池数据记录检测器紫外-可见分光光度仪基本组成二、常用药物检验仪器II紫外-可见分光光度法（UV-Vis）*光源:在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区-钨灯为光源；紫外区：氢、氘灯*单色器:将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。*吸收池:放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。*检测器:利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。二、常用药物检验仪器II-单波长单光束、单波长双光束、双波长紫外-可见分光光度仪的类型二、常用药物检验仪器II*操作简单，灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml*准确度高，相对误差为2％～5％，重现性好*测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收强度等都可能发生变化。*同一种物质使用不同的溶剂，得到的紫外-可见吸收光谱的峰形和最大吸收位置可能不一样；*尽量选用低极性溶剂，pH一致，能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性；*溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。紫外-可见分光光度法（UV-Vis）的特点紫外-可见分光光度法（UV-Vis）的影响因素二、常用药物检验仪器II紫外-可见分光光度仪的应用（一）定性鉴别：是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。1、对比吸收光谱特征数据2、对比吸收度（或吸收系数）比值3、对比吸收光谱的一致性（二）纯度检查：杂质检查与杂质限量检测（三）含量测定：1、吸收系数法2、标准曲线法3、对照比较法二、常用药物检验仪器II光谱分析*红外线：波长大于0.76µm，小于500µm（或1000µm）的电磁波。红外线的划分区域波长(µm)波数(cm-1)能级跃迁类型近红外区0.76-2.513158-4000OH、NH及CH键的倍频吸收区中红外区2.5-504000-200振动、伴随转动远红外区50-5000200-20转动红外分光光度法（IR）*利用样品的红外光谱进行定性、定量分析及测定分子结构的方法，称为红外分光光度法二、常用药物检验仪器II红外分光光度法的特点*红外光谱法是有机药物分子的振动-转动光谱，分子中每个基团一般都有相应的吸收峰，且特征性强。药物的红外光谱能反映药物分子的结构特点，具有专属性强、准确度高的特点，是验证已知药物的有效方法。*《中国药典》要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与《药品红外光谱集》中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。二、常用药物检验仪器II红外分光光度法的样品制备*气体：对气体样品应采用气体槽来进行测量*液体：液体样品常采用液体槽来进行测定*固体：糊状法～石蜡油调糊、薄膜法、KBr压片法*色散型*傅立叶变换（FTIR）红外光谱仪分类红外光谱仪的校正*0.04mm聚苯乙烯薄膜（波数校正，分辨深度、分辨率）二、常用药物检验仪器II红外光谱的测定*原料药鉴别*制剂鉴别*晶型、异构体限度检查或含量测定二、常用药物检验仪器II红外光谱的测定丙二醇二甘醇二、常用药物检验仪器II原子吸收分光光度法*其测量对象是呈原子状态的金属元素和部分非金属元素，系由待测元素灯发出的特征谱线通过供试品经原子化产生的原子蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，通过测定辐射光强度减弱的程度，求出供试品中待测元素的含量。光谱分析*分析对象：元素周期表中70多种元素进行定量分析二、常用药物检验仪器II原子吸收分光光度法*基本组成：由光源、原子化系统、单色器和检测系统等组成，另有背景校正系统、自动进样系统等。二、常用药物检验仪器II原子吸收分光光度计*光源－空心阴极灯作用：辐射待测元素的锐线光谱，以作入射光源。*原子化系统：将试样转化为所需基态原子1、火焰原子化系统:包括喷雾器、混合室、燃烧器和火焰火焰最高温度空气-H22300K空气-乙炔2500KN2O-乙炔2960K2、石墨炉原子化器:电源、保护气、冷却水及石墨管*可大幅度提高原子化效率和利用率，提高灵敏度10～20倍二、常用药物检验仪器II原子吸收分光光度计3、低温原子化器:某些特殊元素（As、Se、Hg等）在低温利用某些化学反应使其原子化，又称化学原子化法。－冷蒸气发生原子化器:将Hg离子还原为金属汞－氢化物发生原子化器:在一定酸度下，将As、Sn、Bi等待测元素还原为易挥发易解离的氢化物，如AsH3、SnH4、BiH3，氢化物可将待测元素与基质分离，检出限较火焰法低。二、常用药物检验仪器II原子吸收分光光度计*单色器－光栅型，从光源发射的电磁辐射分离所需辐射入射狭缝、反射镜、色散元件和出射狭缝组成。*检测系统：光电倍增管为检测器*背景校正系统：校正供试品原子化时蒸气相对吸收测定的干扰，常用有四种:连续光源、塞曼效益、自吸效应、非吸收线。二、常用药物检验仪器II原子吸收分光光度计类型：单道单光束单道双光束二、常用药物检验仪器II原子吸收分光光度法实验技术*样品处理：避免污染*测定条件的选择*定量分析：标准曲线法和标准加入法*干扰及其抑制：电离、物理、光学、背景*检测形式：直接测定和间接测定二、常用药物检验仪器II质谱分析-将目标化合物形成离子和碎片离子，按照其质荷比(m/z)的不同进行分离测定，进行成分和结构分析的一种分析方法。计算机控制系统样品导入离子源质量分析放大记录检测器真空系统GCHPLCICP二、常用药物检验仪器II气质联用测试流程图待测样品待测样品1.0DEG/MINHEWLETTPACKARDHEWLETTPACKARD5972AMassSelectiveDetectorDCBAABCDGasChromatograph(GC)MassSpectrometer(MS)色谱分离质谱定性BACD接口Interface质谱单元构造检测器1.气相色谱2.直接进样1.电子轰击2.化学电离3.负化学电离1.四极杆2.离子阱3.双聚焦4.飞行时间进样系统离子源质量分析器高真空（10-4～10-5Pa）电子倍增管二、常用药物检验仪器II水中痕量药物残留的GC/MS分析质量色谱图（TIC）气相色谱—质谱联用测定玉米中36种农药残留量－FullScan质谱图、SIM质谱图二、常用药物检验仪器II二、常用药物检验仪器II质谱图及谱库检索70eV下，电子轰击后得到的碎片比较稳定，可以在不同的时间和不同的仪器上实现比较。*目前比较应用广泛的谱库是：•NIST（NationalInstituteofScienceandTechnology）库：64K张谱图•NIST/EPA/NIH库：129K张谱图•Wiley库：275K（可能包括不同来源的质谱图，内容为相同化合物）二、常用药物检验仪器II气相色谱-质谱联用仪VarianSaturnSeriesPerkinElmerClarus600ShimadzuGCMS-QP2010PlusAgilent7890A/5975CThermoElectronDSQ二、常用药物检验仪器IIGC/MS/MSVarian1200L&320MSLECOPegasusHTTOFTSQQuantumGC/MS/MSGC/TOFJEOLAccuTOFGC-TOFWatersQuattromicroGCWatersGCTPremier二、常用药物检验仪器II液相色谱质谱联用液质联用(LC-MS)主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定；没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。样品进样系统质量分析器检测器离子源计算机控制及数据处理系统真空控制系统二、常用药物检验仪器II液质联用离子源（API）－ESI源（电喷雾电离）－APCI源（大气压化学电离）－APPI源（大气压光电离）ESI源原理及结构二、常用药物检验仪器II质谱离子源的选择200,000高极性非极性APCIESIGC-EI分子量15,0001,00010二、常用药物检验仪器II*通常小分子得到[M+H]+,[M+Na]+或[M-H]-单电荷离子，生物大分子产生多电荷离子，由于质谱仪测定质/荷比，因此质量范围只有几千质量数的质谱仪可测定质量数十几万的生物大分子。*电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定的极性化合物；其易形成多电荷离子的特性可分析蛋白质和DNA等生物大分子；通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）测定化合物结构。ESI源（电喷雾电离）的特点二、常用药物检验仪器II液质联用谱图解析RT:0.00-6.070123456Time(min)050100501000uAU1.862.640.971.433.444.513.974.755.520.095.762.661.894.224.915.873.415.181.610.361.890.230.93NL:4.88E5ChannelAUVXDNF&TDLF_Std_10NL:8.35E7m/z=105.0-700.0F:-cESIFullms[150.00-700.00]MSXDNF&TDLF_Std_10NL:1.20E7m/z=105.0-700.0F:-cESIFullms2388.00@32.00[105.00-500.00]MSXDNF&TDLF_Std_10RT:0.00-6.070123456Time(min)50100501000uAU1.862.640.971.433.444.513.974.755.520.095.762.711.682.063.744.155.113.344.705.520.432.723.494.305.811.145.124.711.421.830.44NL:4.88E5ChannelAUVXDNF&TDLF_Std_10NL:2.80E8m/z=105.0-700.0F:+cESIFullms[150.00-700.00]MSXDNF&TDLF_Std_10NL:2.65E7m/z=105.0-700.0F:+cESIFullms2475.20@39.00[130.00-600.00]MSXDNF&TDLF_Std_10XDNF&TDLF_Std_10#78-91RT:1.89-2.01AV:2SB:31.35-1.48,2.27-2.41NL:1.69E7F:-cESIFullms[150.00-700.00]150200250300350400450500550600650700m/z020406080100RelativeAbundance447.5448.5388.0446.5238.9389.0298.3226.9449.4356.7507.4178.6544.3643.9617.0558.5671.7XDNF&TD