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实验六植物细胞骨架的光学显微镜观察一实验目的1通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。2掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法。二实验原理细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，成分有微丝、微管和中间纤维。TritonX-100可溶解抽提细胞中的蛋白质和脂质，但不破坏细胞骨架系统。戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色，光学显微镜观察网状结构的由微丝组成的细胞骨架。三实验仪器、材料和试剂1仪器、用具：普通光学显微镜等2材料：洋葱鳞茎3试剂：⑴M-缓冲液⑵6mmol/L磷酸缓冲液⑶1%TritonX-100⑷0.2%考马斯亮蓝R250三实验仪器、材料和试剂3试剂：⑸3%戊二醛⑹50%、70%、95%乙醇⑺叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶四实验方法(Ⅰ)1洋葱鳞茎内表皮（1cm大小）→50ml烧杯（磷酸缓冲液）→下沉2吸去缓冲液→加1%TritonX-10020~30分钟3吸去TritonX-100→M-缓冲液洗3次/10分钟43%戊二醛固定0.5-1小时四实验方法5PH6.8磷酸缓冲液洗3次/10分钟60.2%考马斯亮蓝R250染色20~30分钟7蒸馏水洗1-2次→装片→观察8制作永久切片四实验方法(Ⅱ)取洋葱内皮1cm左右置于含PBS液的载玻片上湿润后，吸去PBS加2滴1%TritonX-100/M-缓冲液，5min吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB溶液，固定30min加PBS洗2次，共3min加0.2%考马斯亮蓝R250染色30min用PBS洗2次，共2min，吸干镜检并绘图细胞骨架标本制作过程五作业1绘出植物细胞骨架微丝结构图。2分析和论述在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。3为什么用TritonX-100的缓冲液处理材料？植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架的形态特征细胞骨架观察结果光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如图），细胞壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞的密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不同。植物细胞骨架的形态特征细胞骨架观察结果10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。