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实验六土壤中真菌分离、纯化和培养一、目的要求掌握从土壤中初步分离培养真菌的方法，从而获得真菌纯培养技能；了解基本接种技术。二、实验原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多；其次为放线菌和霉菌。本次实验从土壤中分离真菌。三、仪器和材料样品：新鲜土壤培养基：加有2ml链霉素的PDA培养基或孟加拉红培养基。无菌水：装有9mL无菌水的试管4支。其它：无菌培养皿4皿、无菌吸管、酒精灯、培养箱等。四、真菌纯种分离的操作方法1、土壤稀释液的制备用“稀释平板计数法”中的方法进行，将土样稀释至10－5。将1瓶土壤菌液（称取土样10g放入盛90mL无菌水）和4管9mL的无菌水排列好，按10-1、10-2、10-3、10-4及10-5依次编号。在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管吸取lmL10-1浓度的菌液于一管9mL无菌水中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓度菌液。同样方法，依次稀释到10-5。注意：在土壤稀释过程中，吸取不同梯度的菌液需换用不同的吸管。土壤稀释液的制备和稀释液的取样2、分离方法采用稀释平板分离法。又可分为两种方法。混菌法和涂抹法。混菌法涂抹法3、培养将上述接种土壤悬液的平板倒置于28℃培养3-5d。4、挑菌纯化5、计数6、菌种保存将分离到的真菌转接到PDA斜面上培养，待长好后，置于冰籍中保存，必要时进行深入研究。六、注意事项1、混菌法接种时温度不能过高，应低于45℃，如不用温度计，则以不烫脸、手为宜。2、涂布法接种时一定要涂抹均匀，否则就会无法记数。3、接种后的培养皿应静置15分钟以上，然后倒置培养。七、作业题1．在分离真菌时为什么需加链霉素（庆大霉素或氯霉素），而不加青霉素？2．用一根无菌移液管接种几种浓度的水样时，应从哪个浓度开始？为什么？