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一、荧光信号的检测荧光标记信号的产生荧光标记基团在某波长的激发光刺激下，产生一个更长波长的发射光FRET？某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。荧光信号•荧光染料SYBRgreen——特异性结合双链，释放荧光信号•特异性荧光探针Taqman双荧光标记探针molecularBeacon荧光标记探针荧光标记杂交双探针Taqman•特异性荧光双标记探针•Taqman5’→3’外切酶活性Molecularbeacon荧光标记杂交双探针二、典型的荧光PCR扩增曲线阳性标本扩增曲线阴性标本扩增曲线Bio-radiCycler扩增曲线PE-5700扩增曲线PE-7700扩增曲线RocheLightCycler扩增曲线三、Ct值样本扩增曲线与阈值线交叉点的循环数00.40.81.21.6201020213040阈值样本扩增曲线Ct值四、荧光PCR定量的原理Unknown未知样本拷贝数的确定五、荧光PCR区别于其他PCR方法主要有以下优点1)全封闭反应，无需PCR后处理2)特异性强，灵敏度高3)采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确4)定量范围宽，可达到10个数量级5)仪器在线式实时监测，结果直观，避免人为判断6)可实现一管双检或多检7)操作安全，缩短时间，提高效率8)利于自动化和联网管理