醋酸纤维素薄膜电泳

血清蛋白质的醋酸纤维素薄膜电泳实验目的1．掌握电泳的基本原理，了解电泳仪和电泳槽的功能。2．熟悉电泳的基本过程与操作方法。电泳实验原理优点:快速、准确、重现性好。应用:1.分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等；2.分析某种物质的纯度及分子量。对生物大分子而言：电场力:F=QE阻力:F’=6πrηυ当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动:F=F’QE=6πrην•迁移率:即ν/E，表示单位电场强度时粒子运动的速度。该值在一定条件下决定于粒子本身的性质，即其所带电荷、大小和形状.6πrηQE=ν影响电泳速度的因素•样品本身：带电量、分子大小、形状•电场强度：电压•缓冲液：成分、pH、离子强度(0.02-0.2M)•支持介质：电渗作用、吸附作用•温度负极正极－－－－－－－－－－－－－－－－表面带负电荷带正电荷的水层携带粒子向负极移动如果样品应移向负极，则泳动速度加快；如果样品应移向正极，则泳动速度减慢。＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋显微电泳等电聚焦电泳等速电泳密度梯度电泳电泳自由电泳(无支持体)区带电泳(有支持体)滤纸电泳(常压及高压)薄层电泳(薄膜及薄板)凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺)分类水平电泳槽垂直板电泳槽圆盘电泳槽双向电泳醋酸纤维薄膜电泳•醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为支持物。1.样品吸附极少，无拖尾现象，条带清晰。2.快速省时。3.灵敏度高，样品用量少。4.制成透明干膜用于定量扫描分析与长期保存。5.操作简单、快速、价廉.•醋酸纤维素是纤维素的醋酸酯，将其溶于丙酮等有机溶液中，可涂布成均一细密的微孔薄膜。待有机溶剂挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。染色方法–氨基黑10B–考马斯亮蓝R250–银染色法考马斯亮蓝R250考马斯亮蓝G250人血浆蛋白质的等电点及迁移率蛋白质名称等电点泳动度/(cm2·V-1·S-1)分子量白蛋白4.88-5.9×10-569,000α1-球蛋白5.06–5.1×10-5200,000α2-球蛋白5.06–4.1×10-5300,000β-球蛋白5.12-2.8×10-59,000-150,000γ-球蛋白6.85-7.50-1.0×10-5156,000-300,000病名白蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白肾病↓↓↑↑↑↑↓弥温性肝损害↓↓↑↓↓↑肝硬化↓↓↓↓β-γ桥原发性肝癌↓↓AFP↑多发性骨髓瘤↑↑↑慢性炎症↓↑↑↑妊娠↓↑↓无丙种球蛋白血症↓↓双白蛋白血症双峰实验器材和试剂•实验器材电泳槽、电泳仪、染缸、滤纸、醋酸纤维素薄膜、点样器•试剂1.血清2.巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6、I=0.06)3.染色液:氨基黑10B0.25g，甲醇50mL+冰醋酸10mL+水40mL溶解(可重复使用)4.漂洗液：甲醇45mL+冰醋酸5mL+蒸馏水50mL实验步骤1.点样面为不光滑面，勿用手触摸；2.点样量适中，垂直居中点样；3.点样端靠近电泳仪负极；4.膜条背面朝上放置，需与滤纸贴紧，拉直。注意事项思考题•分析影响电泳的各个因素。•分析自己的实验结果，针对本实验的各项操作提出改进意见。