分析方法验证-实例部分

ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证徐禾丰第三部分:盐酸氟西汀验证实例第-2-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰1.1－目的•掌握色谱方法验证所需要的项目•掌握色谱验证基本实验方法•了解稳定性指示性方法验证的要求•了解析因分析在验证中应用第-3-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰1.2－简介•美国某公司生产10mg和20mg盐酸氟西汀两种相胶囊•其重量与配方相同•仅盐酸氟西汀与辅料比例不同•所验证方法是公司内部对美国和欧盟市场产品产品放行和稳定性研究中使用的含量和杂质分析的方法•该分析方法已经建立第-4-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰1.3－验证项目清单1.精密度2.线性3.范围4.准确性5.低浓度盐酸氟西汀验证6.m-盐酸氟西汀验证7.选择性8.耐用性第-5-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.0－精密度•项目:•系统重复性•方法重复性•中间精密度第-6-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.1－系统重复性•方法•按照分析方法要求,配制盐酸氟西汀标准溶液•重复进样5次•计算•峰面积平均值与相对标准偏差第-7-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.2－方法重复性•方法•按照分析方法要求,分别配制20mg盐酸氟西汀样品溶液6个•分别进样•计算•含量相对标准偏差第-8-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3－中间精密度•方法•由另外一个分析员,在不同日期,另外的仪器上,按照分析方法•分别配制20mg盐酸氟西汀样品溶液6个•计算•含量及相对标准偏差第-9-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.0－线性•方法•正常含量分析用标准溶液浓度的50%到200%范围内•均匀选择5个点•并配制相应浓度的盐酸氟西汀含量标准溶液•分别进样•计算•线性回归分析•相关系数,斜率,Y轴截距第-10-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰4.0－范围•方法•正常20mg样品含量分析浓度50%到200%范围内•均匀选5个点•配制盐酸氟西汀样品溶液•分别进样•计算•线性回归分析•相关系数,斜率,Y轴截距第-11-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰5.0－准确性•项目:•标准品准确性•样品准确性第-12-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰5.1－标准品准确性•方法•按照分析方法要求,配制盐酸氟西汀标准溶液•重复进样5次•计算•准确性•测定浓度值用峰面积按照回归方程进行计算第-13-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰5.2－样品准确性•方法•按照产品的标示量,在70%到180%正常标示量选均匀选择4个点,混合辅料与及盐酸氟西汀•每点3个样品,分别进样•计算•回收率•测定浓度值用峰面积按照回归方程进行计算第-14-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.0－低浓度盐酸氟西汀验证•项目:•线性•准确性•系统重复性•定量限度•检测限度第-15-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.1－线性•方法•按照分析方法要求,均匀选择6个点,配制标示量的0.02%到1.0%含量标准溶液•分别进样•计算•线性回归分析•相关系数,斜率,Y轴截距第-16-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.2－准确性•方法•配制杂质浓度的标准溶液•进样6次•计算•按峰面积用回归线性方程来计算测量浓度•平均值,相对标准偏差第-17-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.3－系统重复性•方法•配制工作浓度的0.02%和0.05%标准溶液•分别进样6次•计算•峰面积的平均值与相对标准偏差第-18-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.4－定量限度•用系统重复性实验中的标准偏和线性回归方程中的斜率差计算第-19-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.5－检测限度•用系统重复性实验中的标准偏和线性回归方程中的斜率差计算第-20-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.0－m-盐酸氟西汀验证•项目:•线性•检测限度•定量限度•准确性•精密度•方法重复性•中间精密度第-21-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.1－m-盐酸氟西汀简介•m-盐酸氟西汀是产品中的一个杂质•m-盐酸氟西汀在0.05%－1.0%区间呈线性•相对响应因子(对盐酸氟西汀)•F=132.73952/74859534=1.8第-22-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.2－定量限度•根据•盐酸氟西汀定量限度相对响应值•计算盐酸m-氟西汀定量限度第-23-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.3－检测限度•根据•盐酸氟西汀检测限度相对响应值•计算盐酸m-氟西汀检测限度第-24-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.4－回收•方法•分别6个标空白中加0.05%的m-盐酸氟西汀•进样•计算•回收率•实际检测值用峰面积按照回归线性方程计算第-25-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.5－准确性•方法•在已知m-盐酸氟西汀含量的样品中分别在0.4%,0.5%和0.6%3个水平加入m-盐酸氟西汀标准品•每组3个样品中•计算•回收率•实际检测值用峰面积按照回归线性方程计算第-26-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.6－重复性•项目:•方法重复性•中间精密度第-27-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.61－方法重复性•方法•按照要求配制溶液•反复进样6次•计算•平均值•标准偏差•相对标准偏差第-28-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.62－中间精密度•方法•另外一个分析员,在不同日期,另外的仪器上按照方法重复性方法•配制溶液6次•分别进样•计算•含量及相对标准偏差第-29-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.0－选择性1.降解1)原样2)酸降解3)碱降解4)氧化降解5)日光降解6)溶液加热降解7)粉末加热降解2.系统适应性3.空白第-30-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.1－简介•降解产物的选择性试验是分析方法稳定性指示性验证的一个重要部分•主要目的是通过试验证明各种降解的产物与所要分析的物质可以完全分开•本试验中的主要设备是二极管矩阵检测器。并通过计算:纯度角,匹配角,纯度阈值,匹配阈值,含量来证明峰的纯度第-31-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.2－原样品•方法:•20mg胶囊按照规定的方法进样分析•标准品按照规定的方法进样分析第-32-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.3－酸降解•方法:•样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加1ml的浓盐酸。放置18小时。用10N氢氧化钠中和到pH5.5。稀释到刻度。过滤。•标准品:称量大约22mg的标准品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,加2ml的盐酸。放置18小时。用10N氢氧化钠中和到pH5.5。稀释到刻度。第-33-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.4－碱降解•方法:•样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加1ml的5N氢氧化钠。放置18小时。用5N盐酸中和到pH5.5。稀释到刻度。过滤。•标准品:称量大约22mg的标准品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,加2ml的5N氢氧化钠。放置18小时。用5N盐酸中和到pH5.5。稀释到刻度。第-34-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.5－氧化降解•方法:•样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。加1ml的30%过氧化氢。放置5小时。稀释到刻度。过滤。•标准品:称量大约22mg的标准品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,2ml的30%过氧化氢。放置5小时。稀释到刻度。第-35-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.6－光降解•方法:•样品:称量大约等量20mg的样品。在500w/hr.cell下曝光1小时。设定BST35C,ACT45C。•标准品:称量大约等量20mg的样品。在500w/hr.cell下曝光1.5小时。设定BST35C,ACT42C。第-36-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.7－溶液加热降解•方法:•样品:称量大约等量20mg的样品,转移到50ml容量瓶中,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。稀释到刻度。取4ml溶液并转移到坩埚内。与105C加热2小时。冷却到室温。过滤。•标准品:4ml的工作标准液转移到坩埚内。与105C加热2小时。冷却到室温。过滤。第-37-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.8－粉末加热降解•方法:•样品:称量大约等量20mg的样品,转移到合适的试管中。于100C加热4小时。冷却到室温。转移到50ml容量瓶,加入20ml稀释剂,并超声处理10分钟。稀释到刻度。过滤。•标准品:称量大约等量45mg的标准品,转移到合适的试管中。于100C加热4小时。冷却到室温。转移到100ml容量瓶。稀释到刻度。过滤。第-38-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.9－系统适应性•系统适应性按照规定方法进行。•氟西汀与m-氟西汀间分离度应不小于2.0。•氟西汀峰拖尾因子应不大于2.0。•氟西汀的典型保留时间大约在9.5到10.0分之间。第-39-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.10－空白•分析两个批号的空白与氟西汀,并分析混合样品•没发现干扰峰第-40-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰9.0－标准与样品溶液的稳定性•项目:•标准溶液•样品溶液第-41-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰9.1－标准溶液稳定性•方法:•配制标准溶液,冷藏于4C－8C放置30天以上•与两个新配制的标准溶液一道测试第-42-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰9.2－样品溶液稳定性•方法•配制样品溶液,冷藏放置48小时•重新分析第-43-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰10.0－耐用性•项目:•提取效率•析因设计第-44-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰10.1－提取效率•方法•取三个样品,按照要求配置溶液,但超声分为5,10和15分钟•每个样品测定3次第-45-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰10.2－析因设计因素UVdetector=227nm,FlowCell=10mm.检测器10L进样量三乙胺缓冲液:乙腈:四氢呋喃(65:20:15)溶液B溶液B稀释剂30C(2C)温度1.4－1.6mL/min流量三乙胺缓冲液:乙腈:四氢呋喃(75:15:10)溶液A溶液A:溶液B(55:45)流动相Shandon,HypersilBDSC-8,5,1504.6mm柱规格项目第-46-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰10.3－析因设计参数•流动相构成•流量参数•柱温•柱生产商第-47-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰10.4－柱生产商Hypersil,BDSC-8,5u,150x4.6mm601.027-1Shandon,Hypersil,BDSC-8,5u,150x4.6mm551.5301柱型号溶液A(%)流量(mL/min)柱温(C)事件第-48-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰10.5－析因设计15.72.81.4-1-1-1-1815.22.81.51-11-1714.82.81.3-1-111613.42.81.51-1-11510.62.71.4-111-149.92.71.311-1-139.62.61.3-11-1129.42.61.511111保留时间min分离度拖尾因子柱温(C)流量(ml/min)柱溶液A(%)序号第-49-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰讨论•本验证方法中有什么优点,缺点?•什么项目的方法可以改进?•我们自己所做的验证有什么不足?ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证徐禾丰第三部分:盐酸氟西汀验证实例