22免疫学诊断

免疫学诊断与防治天津医科大学免疫学教研室目的要求（一）掌握抗原抗体反应的原理；凝集反应、沉淀反应与免疫标记技术的原理和应用。（二）熟悉淋巴细胞的分离与类型鉴定的方法；T细胞功能测定的方法,B细胞功能测定（三）了解吞噬细胞功能测定。免疫学诊断免疫学检测技术已成为当今生命科学主要的研究手段之一，为基础和临床医学的发展以及疾病的诊断、预后判断、防治和药物疗效评价提供了重要的方法和手段。一、抗原或抗体的检测（一）抗原抗体反应的原理抗原与抗体反应的物质基础是抗原的抗原决定簇与抗体的可变区之间的相互结合。特异性抗原与抗体反应的体系中，若两者的浓度和比例适当，则形成的抗原抗体复合物体积大、数量多，出现肉眼可见的反应。AbexcessAgexcessEquivalence–Latticeformation抗原抗体反应的影响因素时间电解质温度酸碱度（二）抗原或抗体的检测方法1、凝集反应（agglutinationreaction）细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被有抗原的颗粒状物质（如聚苯乙烯乳胶等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象，称为凝集反应。直接凝集反应直接凝集反应(directagglutination)：颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。参与反应的抗原称为凝集原，相应的抗体称为凝集素。间接凝集反应间接凝集反应(indirectagglutination):将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象.载体可溶性抗原致敏致敏颗粒凝集颗粒间接凝集抑制试验免疫妊娠试验（1）免疫妊娠试验（2）2、沉淀反应（Precipitationreaction）毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，也可以在半固体琼脂凝胶中进行。沉淀反应包括：单向免疫扩散双向免疫扩散免疫电泳免疫比浊3、免疫标记技术（immunolabelingtechniques）为了提高单纯的抗原和抗体检测的灵敏性，将已知的抗体或抗原标记上示踪物质，通过检测标记物，间接测定抗原抗体复合物。常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。标记物荧光素酶放射性核素免疫荧光法酶免疫测定（EIA)放射免疫测定（RIA)化学发光物质化学发光分析免疫酶测定法（enzymeimmunoassay,EIA）应用最广泛的方法是酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）间接法：检测抗体包被Ag加入待检Ab加入酶标二抗加入底物显色夹心法：检测抗原包被Ab加入待检Ag加入酶标二抗加入底物显色1.Addantigen5.Addsubstrateforenzyme2.Wash,blockthewells.WashwithPBST3.AddfivesamplesWashwithPBST4.AddlabeledantibodyObservecolourdevelopmentWashwithPBSTstop免疫荧光技术荧光素标记的抗体（抗原）与组织或细胞中的相应抗原（抗体）结合，借助于荧光显微镜或流式细胞仪对抗原（抗体）进行鉴定或定位。直接免疫荧光法间接免疫荧光法二、免疫细胞功能的检测（一）免疫细胞的分离根据细胞的密度、粘附性能、表面标志等，采用不同方法分离外周血单个核细胞、淋巴细胞及不同亚群。密度梯度离心法:用淋巴细胞分层液(葡聚糖-泛影葡胺)除去红细胞、粒细胞,所获细胞称外周血单个核细胞(PBMC)的方法，其中淋巴细胞90%。免疫吸附分离法磁珠分离法流式细胞术等等（二）免疫细胞功能的测定T细胞功能测定1、T细胞增殖试验T细胞表面含有有丝分裂原受体,能接受植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）或美州商陆（PWM）等有丝分裂原的刺激，转化成为淋巴母细胞。（1）3H-TdR掺入法（2）51Cr释放法培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时细胞毒试验（51Cr释放法）示意图2、E花环形成试验（ERosetteTest）T细胞CD2/E受体SRBC/绵羊红细胞可用于鉴定人外周血中的T细胞并计数。酶联免疫斑点法（Enzyme-LinkedImmunospot,ELISPOT)是在ELISA的基础上建立的检测抗体生成细胞及细胞因子产生细胞的方法。CK抗体包被的反应板CK抗原包被的反应板加入淋巴细胞加入酶标记二抗加入底物检测抗原特异性B细胞加入底物T细胞产生CK的检测加入淋巴细胞加入酶标的CK抗体淋巴细胞转化试验（形态学示意图）原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。PHA刺激48~72小时B细胞功能测定1、抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验思考题名词解释：凝集反应，沉淀反应间接ELISA和夹心ELISA的基本步骤