美天旎细胞治疗全线-130723

细胞治疗概述生物治疗造血系统再生医疗干细胞移植干细胞分选被动去T、B移植物处理免疫治疗T细胞（CD3）去除B细胞（CD19）去除DC治疗NK治疗CIK治疗Ag特异性T细胞去除肿瘤细胞去T、BTreg(CD4/CD25)去除自体异体活化Ｔ,Ｂ的去除T去除CD6T去除（BMT）TCRα/β去除CD45RA（naïveT细胞去除）病毒感染Treg治疗CTL：细胞毒性T淋巴细胞，白细胞的亚群，为一种特异T细胞，专门分泌各种细胞因子参与免疫作用。对某些病毒、肿瘤细胞等抗原物质具有杀伤作用。淋巴细胞在体外通过靶细胞抗原和淋巴因子的诱导，分化扩增成具有强大杀伤力的CTL细胞LAK：淋巴因子激活的杀伤细胞。将外周血淋巴细胞在体外经高剂量淋巴因子IL-2激活3～5天而扩增为具有广谱抗瘤作用的杀伤细胞TIL：肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），它是一种新型的抗肿瘤效应细胞，具有高效、特异、副作用小等优点。经测试TIL细胞的抗肿瘤效果是LAK的50~100倍，TIL中绝大多数细胞CD3+CD3AK：LAK细胞的培养液中加入CD3单克隆抗体可以将这些细胞的肿瘤杀伤活性提高十几倍，扩增的数量也大幅提高。CIKCD8+T特异性T细胞疗法CD4+T自体辅助性T细胞疗法ACTL：ACTL靶向性抗肿瘤细胞免疫技术，是将无致病性的腺相关病毒(AAV)通过基因重组技术改建为携带特定肿瘤相关抗原决定簇基因的重组腺相关病毒(rAAV)，感染患者的外周血单核细胞，经细胞因子诱导，单核细胞转化为具有强大抗原提呈功能的树突状细胞。获得的DC可刺激产生有效杀伤肿瘤细胞的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。所产生的CTL具有肿瘤抗原特异性，即靶向性。经rAAV感染的DC刺激产生的CTL仅针对某种或数种肿瘤相关抗原阳性的肿瘤细胞具有杀伤作用，对抗原阴性的细胞无作用。ACTL无明显毒副作用，并可逆转肿瘤细胞对抗激素和生物靶向药物治疗产生的耐药性，这是该技术的显著特点。CIK治疗介绍CIK（Cytokine-inducedKiller）是一种用外周血单个核细胞（PBMC）在体外经过多种细胞因子培养激活后获得的非MHC限制性的对肿瘤细胞具有高效溶解毒性的T细胞，也叫NK样T细胞。主要效应细胞为：CD3+CD56+CIK应用：肿瘤微小残留病灶的清除；CIK细胞治疗技术CIK细胞(Cytokine-InducedKiller)，即细胞因子诱导的杀伤细胞，它是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗CD3McAb、CD28McAb、IL-2、IFN-γ、IL-1α）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。CIK细胞疗法是将人体自身的免疫细胞在体外进行多因子诱导、激活、培养扩增，然后再输回到体内杀伤癌细胞。CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。国内外大量动物试验和临床应用研究表明：CIK细胞疗法无严重不良反应，无任何近期和长期毒副作用。TexMACSTMGMPMediumCIKTherapyCIK细胞杀死肿瘤细胞模式图美天旎CIK细胞培养方案一：从病人抽取30-50ml外周血，用ficoll提取液进行PBMC的提取，获得约3~5×107个单个核细胞二：将细胞悬浮于30mlTexMACSGMP培养液，调整细胞浓度为约1.5~2.0×106/ml三：加入1000U/mLIFN-γ,置于37℃，5％CO2培养箱条件下培养。四：培养第2天，加入50ng/mlOKT3，500U/mIIL-2培养五：从第3~4天开始，每两天加入500U/mIIL-2，40ng/mlIL-7,40ng/mlIL-15添加新鲜TexMACSGMP培养基进行培养，扩增到第18~21天收细胞，使用1%白蛋白的生理盐水重悬细胞，约100~200ml，静脉回输病人其中需要每周取样做流式鉴定表型（CD3,CD4,CD8,CD56,CD25），细菌真菌检测，内毒素检测，回输前需要做细胞活性检测。TexMACSTMGMPMediumCIKTherapy+IL-2/IL-15起始日:获得人类外周血单个核细胞完全培养基悬浮这些非粘附细胞，调整细胞浓度到3x106cells/mL，加入1,000U/mlIFN-+100ng/mLOKT3第一天:500U/mlIL-2第四天:调整细胞浓度到1x106cells/mL，加入500U/mLIL-2或50ng/mLIL-15每隔三天加入新鲜的培养基，加入500U/mLIL-2或50ng/mLIL-15培养十天ERettinger,SKuci,INaumann,PBecker,HKreyenberg,MAnzaghe,AWillasch,UKoehl,GBug,MRuthardt,TKlingebiel,SFulda,andPBader(2012)Thecytotoxicpotentialofinterleukin-15-stimulatedcytokine-inducedkillercellsagainstleukemiacells.Cytotherapy,14(1):91-103.Rettingeretal.(2012)–CIK+IL-15IL-15resultsinenhancementofcytotoxicactivityERettinger,VMeyer,HKreyenberg,AVolk,SKuci,AWillasch,EKoscielniak,SFulda,WSWels,HBoenig,TKlingebiel,andPBader(2012)CytotoxicCapacityofIL-15-StimulatedCytokine-InducedKillerCellsAgainstHumanAcuteMyeloidLeukemiaandRhabdomyosarcomainHumanizedPreclinicalMouseModels.FrontOncol,2:32.GMP级别无血清培养基竞争：高性能的优势，无需加血清Group:1,TakaraGTSerum-freemedia:5×106/well×6wells2,ourGMPSerum-freemedia:5×106/well×6wells3,GTSerum-freemediawith3%HSP:5×106/well×6wells4,ourGMPSerum-freemediawith3%HSP:5×106/well×6wellsThecellgrowthmultipleinthe14thdayGT:14.76multipleGMP:31.2multipleGT+HSP:31.2multipleGMP+HSP:33.6multiple对高抗原表达的癌症疗效最好，如：髓性白血病、黑色素瘤、肾细胞癌、转移性肾癌、非何杰金氏淋巴瘤等。其它癌症如肺癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、大肠癌等某些不适合手术、不能耐受放化疗的中晚期癌症非T细胞相关的白血病和淋巴瘤乙型肝炎，丙型肝炎，慢性寄生虫感染等对于手术、放化疗或造血干细胞移植后患者体内微小残留病灶的清除，防止癌细胞扩散和复发T细胞相关淋巴瘤和白血病；器官移植后，长期使用免疫抑制药物或正在使用免疫抑制药物的患者；自身免疫病患者CIK治疗适应症与禁忌症美天旎产品在CIK细胞治疗中的应用CIK细胞体外激活用到GMP级细胞因子。这些细胞因子包括IFN-γ，OKT3，IL-2，OKT28有些医院会用到：IL-1α、IL-7、IL-12、IL-15实验材料培养基TexMACSGMPMedium细胞因子HumanIFN-γOKT3OKT28HumanIL-1αHumanIL-2HumanGM-CSFHumanIL-4HumanTNF-α耗材细胞分化袋细胞扩增袋NK治疗简介NK（NaturalKiller）来源尚不清楚，体外实验表明，胸腺细胞在体外IL-2、IL-12、IL-15、IFN-α、TNF-α等细胞因子存在条件下培养也可诱导出NK细胞。NK细胞表面标记物为：CD3-CD56+NK细胞杀死肿瘤细胞特点广泛识别肿瘤细胞，自然杀伤活性无MHC限制分泌穿孔素及肿瘤坏死因子起效快、杀伤能力强对肿瘤干细胞拥有专一性的细胞毒性杀伤作用NKCellIsolationKit，humanNKCellActivation/ExpansionKit,humanAnti-BiotinMACSiBead™ParticlesbiotinylatedantibodiesagainsthumanCD335(NKp46)andCD2美天旎NK细胞培养方案MaincomponentsoftheCliniMACS®System细胞特异性的免疫磁性标记试剂管道CliniMACSPlus®仪器(含各种不同分选程序的软件)流式鉴定表型（CD3,CD4,CD8,CD56，CD25）MNCs（清血法，非动源）CD3去除CD56富集NK细胞2×10e9重悬NK细胞，调整浓度2×10e6过夜培养(1000U/mlIL-2)。用5%HSA溶液洗涤两次，重悬浮细胞NK细胞终产品，调整细胞浓度2×10e7，回输人体,注射Hi-Cy/Flu，连续14天注射IL-21（1.75*10e6IU/m2）使用CliniMACSPlus仪器实现NK细胞治疗细菌真菌检测，内毒素检测，回输前需要做细胞活性检测。NK细胞疗法可用于多种癌症，尤其对血液肿瘤，肺癌、淋巴癌、食道癌、乳癌、肝癌等血流旺盛且血管较密集的癌症有很好的疗效NK细胞用于治疗各种肿瘤，对低表达MHC-I、II类分子的肿瘤和恶性血液疾病效果更好NK治疗适应症DC治疗简介DC（DendriticCell）即抗原提呈细胞，能摄取、加工及呈递抗原，启动T细胞介导的免疫反应。DC细胞表面标记物为：CD14+（MoDCs）CD1C+（MDCs）CD304（PDCs）细胞毒性淋巴细胞DC细胞的作用MaincomponentsoftheCliniMACS®System细胞特异性的免疫磁性标记试剂管道CliniMACSPlus®仪器(含各种不同分选程序的软件)Mo-DCculture5~7ds2ds美天旎DC细胞治疗方案流式细胞检测CD11c，CD40，CD80，CD83，CD86GM-CSF1000IU/mLIL-61000IU/mLTNFα1100IU/mLIL-41000IU/mLIL-1β1900IU/mLPGE21µg/mL美天旎GMP级细胞因子MACSGMPRecombinantHumaninterleukin1β（人白介素1β）MACSGMPRecombinantHumanIL-2（人白介素2）MACSGMPRecombinantHumanIL-3（人白介素3）MACSGMPRecombinantHumanIL-4（人白介素4）MACSGMPRecombinantHumanIL-6（人白介素6）MACSGMPRecombinantHumanIL-7（人白介素7）MACSGMPRecombinantHumanIL-15（人白介素15）MACSGMPRecombinantHumanIL-21（人白介素21）MACSGMPRecombinantHumanGM-CSF（人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）MACSGMPRecombinantHumanTNF-α（人肿瘤坏死因子α）MACSGMPRecombinantHumanEGF-2（人上皮生长因子2）MACSGMPRecombinantHumanFGF-2(人纤维母细胞生长因子2)MACSGMPRecombinantHumanFLT3-ligand*（人Fms相关酪氨酸激酶3的配体）MACSGMPRecombinantHumanIFN-γ*（人γ干扰素）MACSGMPRecombinantHumanSCF*(人干细胞因子)MACSGMPHumanRapamyci