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1、仪器与试剂。中性改良罗氏（L—J）培养基及含药培养基由我院汉光国际感染性疾病研究中心按照标准自制。BacT/ALERT3D全自动培养仪及其配套试剂，包括MB/BacT培养管、MAS分枝杆菌抗生素补充液均购自法国Bio—Merieux公司。2、抗结核药。异炯肼（INH）、利福平（RFP）、盐酸乙胺丁醇（EMB）和硫酸链霉素（SM）由国家结核病参比实验室提供，为美国Sigma公司产品。对氨基水杨酸钠（PAS，辽宁倍奇药业有限公司）、盐酸环丙沙星（cIP，广州南新制药有限公司）、对氨基水杨酸异烟肼（PNA，重庆华邦制药股份有限公司）、盐酸左氧氟沙星（LOF，扬子江药业集团有限公司）、硫酸阿米卡星（AMK，山东鲁抗辰欣药业有限公司）、硫酸卷曲霉素（CPM，南宁中科药业有限公司）均为药品生产企业提供的原料药，按照有效成分折算。3、标准菌株。结核分枝杆菌标准菌株H37RvFh上海市肺科医院提供。4、方法5、抗结核药应用分析。采用世界卫生组织（WHO）推荐的限定日剂量（DefinedDailyDose，DDD）分析法计算用药频度（DDI）s）。各药品的DDD值参考《中华人民共和国药典·临床用药须知（化学药和生物制品卷）》（2005年版）和《新编药物学》（第16版）或结合我院临床用药习惯确定。药品消耗的总量除以其相应的DDD值，即得到DDDs。相同通用名药品的）DDs值具有量的相加性，DDDs值越大，表明该种药品的使用频率越高。在计算DDDs时，有些药品不能直接以年消耗总量除以DDD值，如每支lg的SM，其实际应用中的DDD值为0.75g·d-1，若以年消耗总量除以O.75g·d-1，则所得DDDs高于实际用药情况，因为肌肉注射SM0.75g实际消耗1支；每支0.5g的CPM的DDDs计算同理。6、药物敏感性试验。标本前处理方法：痰及其它污染标本加入到50mi。尖底离心管与新鲜配制4％NaOH+0.5%N-乙酰-L一半胱氨酸（NALc）消化液充分混合，室温静置15min；脑脊液等非污染标本不需去污染处理。加入无菌pH6.8的磷酸盐缓冲液（PBS）至45mL，3000mmin。离心15min，弃上清液，加入1mL无菌pH6.8的PBS使沉淀重悬浮。分离培养：每份标本同时接种1只MB/Bat：T培养瓶和2只L—J培养基。取接种后的改良罗氏培养基置5％CO2。培养箱37℃孵育，每周观察2次，有菌落生长者，抗酸染色确认后报告“分枝杆菌培养阳性”。每只MP培养瓶接种处理后的标本0.5mL，每瓶加入0.5mL分枝杆菌抗生素补充液。将培养瓶放人BacT/ALERT3D培养仪内自动培养检测。仪器报告阳性时，取培养液涂片抗酸染色确认后报告阳性。培养6周未报告阳性者，报告阴性。耐药的判定标准：对照培养基菌落生长良好，含药培养基上菌落＞20个为耐药；含药培养基上无菌落生长为敏感，菌落介于l～20个之间时重新检测。7、数据处理。标本的检测数据来自试验记录，结果的初步统计由我院实验室信息管理系统完成数据整理使用Mi-crosofiExcel，药物敏感性分析使用WHO的SDRTB4结核病耐药监测软件，统计分忻采用X2检验。8、耐药情况分类标准。本研究中，单耐药(Monoresis-tance，MR)是指结核菌对INH、RFP、EMB和SM中的1种抗结核药耐药；多耐药(Polyresistance，PDR)是指埘上面4种抗结核药中的1种以上耐药(同时耐INH和RFP除外)；MDR是指至少对INH和RFP耐药；XDR—TB则是指除MDR—TB之外对氟喹诺酮类药以及2种二线沣射药(CPM和AMK)中至少l种具有耐药性的结核病。9、结果10、各年度抗结核药应用情况统计经统计发现，我院2006～2009年抗结恢药的总销售金分别为2017853.96、l83942640、2280241.59、3053242元，具体应用情况统计表1。表1各年度各种抗结核药的DDDs统计Tab1DDDsofantituberculosisdrugsinourhositaldur-ingtheperiodof2006～2009药品名称DDD/g·d-1-12006年2007年2008年2009年DDDs/日排序DDDs/日排序DDDs/日排序DDDs/日排序EMB0.753723581458198156105116716801INH0.33557372455970257859226700952RFP0.452926133339450343144435048763吡嗪酰胺（PZA）1.51906524227393426273243346794利福喷汀（RFT）0.131641485234765527586553385915AMK0.4245208276888323148368758PAS8.0232609237399259979332749SM0.751395210108691045231037001011、各年度各种抗结核药的耐药情况统计除PZA、RFT和1321TH外，我院对其它抗结核药均开展了药敏试验，包括LOF和CIP一剔除同一患者在本年度的重复药敏试验(按最近的药敏结果统汁)．我院2006--2009年进行药敏试验的患者分别为436、510、583、675例，各药品的耐药统计见表2。表2各年度各种抗结核药的耐药率统计(％)Tab2Drugresistanceratesofantituberculosisdrugsin0hospitalduringtheperiodof2006～2009(％)药品名称药物浓度/μg·mL-12006年2007年2008年2009年INH115.6018.0414.4117.78RFP5014.9116.6715.7815.26SM1020.1820.3918.7021.63EMB53.902.354.123.11PAS11.612.351.722.81根据我院的药敏榆测结果，把结核菌耐药情况按敏感（S）、MR、PDR、MDR和XDR进行统计，结果见表3：表3各年度抗结核药耐药情况统计(n，％)Tad3Drugresistanceofantituberculosisdrugsinourhos．pitalduringtheperiodof2006~2009(n，％)分类2006年2007年2008年2009年S320（73.39）367（71.96）440(75.47)493（73.04）MR45（10.32）55（10.78）45（7.72）71（10.52）PDR29（6.65）29（5.69）41（7.03）25（3.70）MDR35（8.03）51（10.00）43(7.38)77（11.41）SDR7（1.61）8（1.57）14（2.40）9（1.33）合计436（100.00）510（100.00）583（100.00）675（100.00）12、分析与讨论由表1可见，我院抗结核药除SM外，其余药品的DDDs均呈逐年上升趋势，表明越来越多的结核病患者在我院得到了治疗。但总消费金额却变化不大，2007年甚至比2006年下降了8.84%，就是2008年也仅比2006年增长了13.00%，这是由于我院对一线抗结核药进行了集中招标采购，使其价格大幅下降，从而减轻了结核病患者的经济负担。2009年总消费金额增幅稍高，是由于《国家基本药物目录》中收载的抗结核药调价所致。从单个品种来看，2006、2007年和2009年DDDs排在第1位的均是EMB，似乎不符合常理。这是因为RFT和PNA的大量应用减少了RFP和INH的DDDs造成的，但INH与PNA、RFP与RFT的DDDs之和这4年中仍排在前3位。与RFP相比，RFT具有高效、长效和不良反应较轻的特点，因而RFT的DDDs从2007年之后上升到了第4位，超过了PZA。2008年由于PNA用量上升较慢，从而使INH的DDDs排在了榜首。SM用量的逐年少，主要是因为其耐药率较高（见表2），另外SM有时出现的较严重的不良瓜如而毒性、肾毒性、过敏反应等，以及使用不便，需要肌肉注射等因素也一定程序上影响了其应用。从表1中各抗结核药的DDDs还可以看出，一线抗结核药仍牢牢占据着抗结核化疗的主导地位。参考文献[1]王陇德主编.结核病防治[M]第1版.北京：中国协和医科大学出版社，2005.2。[2]胡忠义，蔡慧梅，屠梅欣.比例法和绝对浓度法测定结核分枝杆菌耐药性[J].临床肺科杂志，1999,4(3):167.[3]刘宇红，姜广路，赵立平等第四次全国结核病流行病学抽样调查——结构分枝杆菌耐药性分析与评价[J]中华结核和呼吸杂志，2002.25(4):224