翟文哲PPT

奶牛子宫粘液中细菌的分离鉴定及药敏试验答辩人：翟文哲指导老师：陶大勇教授严光文老师2011年5月试验的目的和意义了解阿克苏地区奶牛子宫内膜炎的病原菌感染情况与耐药性状，在前人研究基础上，进一步通过试验研究抗生素对奶牛子宫内膜炎主要致病菌体外抑菌。找出对本地区奶牛子宫内膜炎致病菌效果较好的用药配方。为本地区奶牛子宫内膜炎临床用药和预防提供理论根据和技术支持论文简介试验材料试验方法试验结果与分析讨论一、试验材料1、病料2、实验器材3、培养基和生化管4、药敏试验药物病料于2009年4月在阿克苏地区金牛公司三场，根据奶牛临床子宫内膜炎的诊断标准，选择20头典型病例奶牛，病牛阴户用温水清洗、0.2%新洁尔灭消毒后，按直肠把握法用输精管抽取子宫分泌物1~5ml放入无菌试管中采取20份（多为白色，粘稠，内有絮状物)置于-20℃冰箱，待检。实验器材立式电热压力蒸汽灭菌器（LDZX-50KB，上海申安医疗器械厂）、数显不锈钢电热培养箱（HPX-9272MBE，上海博远实业有限公司医疗设备厂）、电热恒温鼓风干燥箱（GZX-9240MBE，上海博远实业有限公司医疗设备厂）、洁净工作台(SW-CT-2F1，上海博远实业有限公司医疗设备厂）生物安全柜（BSC-1100A2）、全自动摄影生物显微镜（DP70-BIO-OLYSIA）、OLYMPUS生物显微镜（CX31，日本奥林巴斯光学工业株氏会社），试管、平皿、酒精灯、锥形瓶、玻璃棒、pH试纸、“L”棒、移液管等。所需各种仪器由塔里木大学动物科学学院微生物实验室提供。培养基及生化管普通肉汤培养基、普通琼脂培养基，硫化氢生化反应管、麦芽糖生化反应管、蔗糖生化反应管、甘露醇生化反应管、葡萄糖生化反应管、葡萄糖磷酸盐蛋白胨水反应管、蛋白胨水（靛基质用）反应管，以上生化管均由杭州微生物剂有限公司生产，有效期至2011年3月。药敏实验药物洁霉素（2μg／片，生产日期2009.06.01）、青霉素（10ug/片，生产日期2009.06.04）、甲氧苄啶（5μg／片，生产日期2009.06.16）、氨苄青霉素（10μg／片，生产日期2009.07.20）、氟苯尼考（75μg／片，生产日期2009.07.17）、奥复星（5μg／片，生产日期2009.08.03）、链霉素（10μg／片，生产日期2009.07.20）、庆大霉素（10μg／片，生产日期2009.07.07），以上药物均由杭州微生物试剂有限公司生产，执行标准WS/T125-1999，有效期均为一年。二、试验基本程序细菌分离培养细菌的生化鉴定药敏实验病料直接涂片革兰氏染色镜检取可疑菌落鉴定试验和药敏试验结果分离培养继续培养纯化三、试验结果1、细菌鉴定的结果表1所分离的革兰氏阴性菌株在不同培养基中的生长情况菌名普通肉汤普通琼脂革兰氏染色后检溶血现象大肠杆菌静置时较清亮，振荡后较浑浊菌落中等大小，圆形边缘整齐，表面光滑，稍隆起的白色半透明菌落细杆状革兰氏阴性直杆菌，两端顿圆溶血所分离的革兰氏阳性菌株在不同培养基中的生长情况菌名普通琼脂革兰氏染色后检溶血现象链球菌不易生长，培养36h后，出现少量细菌，菌落中等大小，圆形，边缘整齐，表面光滑球状、链状革兰氏阳性圆形菌，多呈双球形或短链状溶血所分离的革兰氏阳性菌株在不同培养基中的生长情况菌名普通琼脂革兰氏染色后检溶血现象葡萄球菌生长良好，菌落厚、有光泽、圆形凸起，初呈灰白色，继而为金黄色革兰氏阳性球菌呈葡萄串状、成双或成对排列不溶血所分离的革兰氏阳性菌株在不同培养基中的生长情况菌名普通琼脂革兰氏染色后检溶血现象蜡样芽孢杆菌菌落较大，形状不规则，边缘不整齐，表面粗糙、干燥的灰白色不透明菌落较大杆菌革兰氏阳性杆菌呈链状排列，芽孢呈卵圆形，菌体两端较平整完全溶血2、菌株进行革兰氏染色后显微镜图片大肠杆菌革兰氏染色图显微镜10×100葡萄球菌革兰氏染色图显微镜10×100链球菌革兰氏染色图显微镜10×100蜡样芽孢杆菌革兰氏染色图显微镜10×1003、生化鉴定结果表3大肠杆菌的生化鉴定结果菌名三铁糖乳糖葡糖糖甘露醇麦芽糖吲哚M-RV-P枸橼酸盐过氧化氢酶大肠杆菌⊕△⊕⊕++++--+注：△表示生长；⊕表示产酸、产气；○表示产H2S气体；+表示产酸或阳性反应：-表示阴性反应。表4链球菌、葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌的生化试验结果菌名葡萄糖乳糖甘露醇三糖铁吲哚M-RV-P过氧化氢酶尿素蔗糖麦芽糖链球菌++-+-----+⊕葡萄球菌++++++++蜡样芽孢杆菌++-++++注：⊕表示产酸、产气；○表示产H2S气体；+表示产酸或阳性反应：-表示阴性反应。4、药敏试验结果表5分离细菌药敏实验抑菌圈直径平均值结果（mm）抗生素大肠杆菌链球菌葡萄球菌蜡样芽胞杆菌洁霉素10.8121322青霉素79.310.916.7甲氧苄啶2614720氨苄青霉素1081025.5氟苯尼考2116.32028奥复星2021.419.719.8链霉素21.56.46.422.2庆大霉素14.28.7818.2大肠杆菌大肠杆菌链球菌链球菌葡萄球菌葡萄球菌蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌四讨论1、奶牛子宫内膜炎中的病原菌2、奶牛子宫内膜炎的危害3、细菌药物敏感性试验4、奶牛子宫内膜炎的预防1、奶牛子宫内膜炎中的病原菌病原菌是引起奶牛子宫内膜炎的主要原因。研究发现，子宫内膜炎通常是由条件性致病菌引起的，由于内外因素的变化，某些正常条件下作为非致病菌的微生物在子宫内环境发生变化、机体抵抗力下降时可变成致病菌，甚至变成子宫内的优势菌。统计此次奶牛子宫内膜炎分离出的单一菌株、两种及两种以上的检出率分别为80%（16/20）、5%（1/20）、15%（3/20），这与王京仁[16]等的报道的一致,说明阿克苏地区奶牛子宫内膜炎单一病原菌感染占优势，两种以上病原菌混合感染占弱势。2、奶牛子宫内膜炎的危害子宫内膜炎在牛比较常见，它使受精卵不能着床或胚胎早期死亡，延迟了产犊间隔，是造成奶牛不孕的主要原因之一，起奶牛子宫内膜炎的病因有多种原因，其中细菌感染是主要原因。该病多继发于分娩异常及子宫的其他疾病如子宫炎、子宫积脓、倡导损伤等。场后处理不当或处理不及时均可引起继发感染。由此可见，奶牛子宫内膜炎所造成的繁殖和经济损失是相当严重的。3、细菌药物敏感性试验预防和控制奶牛子宫内膜炎，目前仍以抗生素为主。常用的抗生素如青霉素类、链霉素、庆大霉素等己存在抗药性，可能与其长期使用这些药物而产生耐药性有关。因此用药时需合理配伍，不随意加大剂量，以免产生耐药菌株。在临床抗菌药物的使用中，应考虑停用对细菌不敏感的药物，治疗中建议采取联合用药方法等，避免耐药性产生，从而取得最佳疗效。药敏试验对指导兽医临床用药具有十分重要的意义，不仅能提高疗效，而且还可以节省药物成本，增加效益。4、奶牛子宫内膜炎的预防饲养管理不善而导致各种病原微生物的感染是奶牛子宫内膜炎发生的主要原因，要想更好地控制奶牛子宫内膜炎的发生，除了在治疗该病时选择比较敏感的药物外，还应加强奶牛子宫内膜炎的监控，定期进行奶牛子宫内膜炎的检测，必须坚持早发现、早治疗的原则，避免延误有效地治疗时机。