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园艺植物病理学目录实验实习规则须知1实验部分实验一植物病害症状观察实验二、植物病原真菌的一般形态观察实验三、鞭毛菌亚门和接合菌亚门真菌形态观察实验四、子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门真菌形态观察实验五、培养基的配制和灭菌实验六、植物病原真菌的分离和培养实验七、果树病害的症状和病原观察实验八、蔬菜病害的症状和病原观察实验九、观赏植物病害的症状和病原观察实习部分实习一、植物病害标本的采集和制作实习二、园艺植物病害的调查与损失估计实习三、园艺植物病害的诊断实验实习须知实验室的操作是从事植物病理工作的基本训练，所有操作均需按一定程序进行，借以加深和巩固对教学内容的了解。学习植物病理学研究的基本方法并能通过实验结果的观察，初步学习科学分析和推理的方法，以培养良好的工作习惯。教学实习的目的是让学生将课本上学习到的理论知识应用到具体实践中，提高同学们解决实际生产问题的能力，特别是鉴定病害标本的能力。教学实习将为开展科研和技术推广工作打下一定的理论基础。因此，实验实习时应切实注意以下各点：一、实验实习前，必须认真对实验实习指导内容进行认真预习，明确目的要求、方法和步骤，熟悉主要操作环节，做好准备工作。二、准备好实验用具3H-4H绘图钢笔、橡皮、直尺或三角板、绘图纸、报告纸、记录本。三、实习小组在实习前应仔细清点实习用具、材料，填写仪器使用卡片，如有不符或损坏，应及时报告指导教师。四、严格遵守操作规程，服从教师指导，认真完成实验实习规定的操作和观察项目，培养严肃认真、一丝不苟的科学态度和工作作风。五、在实验实习场所，必须保持安静；爱护仪器，珍惜标本，节约药物，实验实习用品、材料等用后要及时整理，放归原处，不得乱拿乱用或随意丢弃，如有损坏按规定处理。六、注意安全，严防着火、触电和药物中毒。七、认真记录实验实习结果，写好实验实习报告（用统一规定的实验实报告纸）或完成其他作业，按时交批，由指导人员进行考核、评定成绩。作业力求简明扼要，清晰正确，反对单纯抄袭、临摹参考书。如实验实习报告不符合要求，必须退回重做。缺实验、实习时，应申请补做。八、每次实验实习结束时，由指导人员检查后，方可离开现场。实验部分实验一、植物病害症状观察一、目的要求本次实验目的在于了解植物病害的种类及多样性，认识病害对园艺植物生产的危害性，并掌握病征和病状的一般类型，以便在田间病害诊断中加以利用。二、仪器和用品体视显微镜、幻灯机、投影仪及多媒体教学设备、放大镜、镊子、挑针、搪瓷盘等。三、实验材料蔬菜幼苗猝倒病、立枯病、黄瓜霜霉病、黄瓜花叶病、黄瓜白粉病、黄瓜细菌性角斑病、白菜软腐病、茄子褐纹病、番茄晚疫病、番茄叶霉病、番茄病毒病、辣椒疫病、辣椒疮痂病、菜豆锈病、苹果树腐烂病、苹果根癌病、苹果树缺素病、梨锈病、葡萄霜霉病、桃细菌性穿孔病、桃缩叶病、枣疯病、杨树溃疡病、大豆菟丝子、花生根结线虫病、牵牛花白锈病、油菜菌核病等新鲜材料或干制标本。以上材料为实物标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片、多媒体教学课件(包括幻灯片、录像带、光盘等影像资料)等。四、观察内容及方法(一)、病状类型：1、变色：由于叶绿素发育受到破坏，而使叶片的颜色发生改变，这种变色可以是普遍的也可以是局部的，变色的细胞本身并不死亡。（1）褪绿：叶片普遍变为淡绿色或淡黄色。观察苹果树缺铁病（2）黄化：叶片普遍变为黄色。观察番茄病毒病（黄顶型）（3）花叶：叶片局部褪绿，使之呈黄绿色或黄白色相间的花叶状。观察黄瓜花叶病2、坏死：植物细胞和组织的死亡引起坏死。植物的根、茎、叶、花、果实都能发生坏死。（1）斑点：局部组织变色，然后坏死而形成斑点。观察芹菜斑枯病（2）枯死：植物组织连片坏死而呈现黄白色，褐色的或黑色，形成叶斑，叶枯、环斑、条斑或轮纹斑。（3）穿孔：叶片的局部组织坏死后脱落。观察桃细菌性穿孔病（4）疮痂：植物体表先呈现皮包状隆起，然后表皮细胞破裂。观察辣椒疮痂病。（5）溃疡：树木枝干的局部组织腐烂。观察杨树溃疡病。（6）猝倒或立枯：幼苗的茎基部或根部组织坏死而使幼苗枯死，死苗倒下者为猝倒，死苗直立者为立枯。茄子、辣椒幼苗猝倒病、立枯病3、腐烂：多汁而幼嫩的植物组织受害后植物细胞和组织易发生腐烂。根据组织分解的程度不同，有干腐、湿腐和软腐之分，比较坚硬的植物组织发生腐烂称为干腐，柔软而多汁的植物的组织发生腐烂称为湿腐，寄主组织细胞间中胶层的破坏称为软腐。观察苹果树腐烂病、苹果树干腐病、白菜软腐病。4、萎蔫：指植物根部或茎部的维管束组织受到侵染而发生的枯萎现象，萎蔫可以是局部的也可以是全株性的。典型的萎蔫病害无外表病征，植物皮层组织完好，但内部维管束组织受到破坏。观察茄子黄萎病、黄瓜枯萎病5、畸型：植株生长反常，促使植物的各个器官发生变态。（1）矮化：植株生长较正常的矮小。（2）徒长：植株生长较正常的植株生长高大。（3）丛生：枝干的节间停止伸长而使叶片呈丛生状。（4）卷叶、蕨叶和缩叶：叶片的卷曲和皱缩。（5）发根：根系过度分枝而成丛生状。（6）瘿瘤：部分组织细胞过度生长而形成的变态。（7）剑叶：叶片发育受到控制，使宽大的叶片变为细小狭长状。（8）菌瘿：病部变成菌的集合体，如黑粉病。(二)、病征类型：1、粉状物：病原真菌在植物受害部位形成黑色、白色、铁锈色的粉状物。观察黄瓜白粉病、菜豆锈病、慈菇黑粉病2、霉状物：病原真菌在植物受害部位形成白色、褐色、黑色的霉层。观察葡萄霜霉病3、小黑点：病原真菌在植物受害部位形成的黑色小颗粒。观察苹果树腐烂病4、菌核：病原真菌在植物受害部位形成大小不同的褐色或黑色颗粒。观察油菜菌核病5、白锈：病原真菌在植物受害部位形成的白瓷状物。观察牵牛花白锈病。6、菌脓和菌痂：病原细菌在植物受害部位形成的粘液和胶痂状物。观察黄瓜细菌性角斑病的菌溢现象。*注意：以上病征只针对真菌和细菌，病毒、植原体、线虫病害和寄生性种子植物，以及非侵染性病害无病征表现。五、作业与思考题1.将上述病害标本的发病部位，病状类型和病征类型，填于下表：植物病害症状观察表病害名称发病部位病状类型病征类型2.植物病害的主要特征是什么?3.症状在病害诊断上有什么作用?4.植物病害对农业生产的危害性如何?实验二、植物病原真菌的一般形态观察一、目的要求通过本次实验熟悉真菌的营养体和繁殖体的基本形态，为以后真菌病害的病原物鉴定和病害诊断奠定初步基础，并初步掌握徒手切片、制片和绘制病原菌草图技术。二、仪器与用品显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备，灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂(蒸馏水和乳酚油)、挑针、镊子、双面刀片、擦镜纸、无菌水等。三、实验材料南瓜软腐病菌、茄科蔬菜猝倒病菌、立枯病菌、油莱菌核病菌、梨褐腐病菌、番茄晚疫病菌、黄瓜圆叶枯病菌、苹果白粉病菌、茄黄萎病菌、番茄早疫病菌、黄瓜根腐病菌、牵牛花白锈病菌等。以上材料为实物标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片、多媒体教学课件(包括幻灯片、录像带、光盘等影像资料)等。四、观察内容和方法(一)、真菌的菌丝体及其变态和菌组织1、无隔菌丝挑取培养皿中的南瓜软腐病菌或瓜果腐霉的少许菌丝体，用蒸馏水或乳酚油作浮载剂，制临时玻片镜检。观察其菌丝形态特点。提示：浮载剂放得太多容易使盖玻片和观察物飘浮移动，不易镜检。一般情况下，浮载剂只需加半滴即可。2、有隔菌丝挑取培养皿中的镰刀菌的少许菌丝体，用蒸馏水或乳酚油作浮载剂，制临时玻片镜检。观察其菌丝形态特点。提示：对一些无色透明的病菌，显微镜下观察时，注意调节光源，光线不宜过强。挑取菌丝量尽量要少，并将其分散，以便观察。3、菌丝变态(1)吸器从幻灯片或照片观察吸器形态。(2)假根取永久玻片，观察孢囊梗基部的假根——外表像根的根状菌丝。(3)附着胞从幻灯片或照片观察炭疽病的附着胞形态。4、菌组织体(1)菌核观察油菜菌核病菌核的外形、颜色、大小，并镜检菌核切片，比较菌核外部组织和内部组织菌丝细胞的形状、大小及排列情况。(2)菌索观察幻灯片上的根状菌索，是由菌组织形成的绳索状结构，外形与高等植物的根相似。(3)子座切片观察苹果树腐烂病菌所形成的子座制片。提示：切片时要注意切得要薄，观察切片时往往看到的只是菌组织体整体结构的一部分，一定要注意从局部联想其整体轮廓。(二)、真菌的繁殖体1、无性孢子(1)游动孢子囊和游动孢子。挑取腐霉菌培养物，制作临时切片，镜检游动孢子囊和游动孢子。(2)孢子囊和孢囊孢子挑取根霉菌培养物，制作临时切片，镜检孢子囊和孢囊孢子。注意观察孢子囊的结构、囊轴、孢囊梗、假根及匍匐丝和孢囊孢子形态特征。(3)分生孢子其色泽、形态变化较大，从无色至深色，单胞到多胞，并具多种形态。采用挑、刮或切片的方法，取黄瓜圆叶枯病菌、苹果白粉病菌、番茄早疫病菌的病害标本，制作临时切片，观察分生孢子形态。注意观察其分生孢子的颜色、分隔及其形状。(4)厚垣孢子挑取镰孢霉菌的培养物制片、镜检。菌丝中或孢子中个别细胞膨大、细胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。2、有性孢子(1)休眠孢子囊挑取玉米褐斑病菌，镜检观察休眠孢子囊形态。(2)卵孢子取谷子白发病病穗，制作临时切片，镜检卵孢子形态。(3)接合孢子取永久玻片观察接合孢子形态。(4)子囊孢子取山楂白粉病病叶，用解剖针将白粉上的小黑点(闭囊壳)仔细拨至载玻片上的水滴中，加盖片并轻轻压破闭囊壳，镜检闭囊壳，子囊、子囊孢子和附属丝的形态，特别注意子囊的数目和附属丝的特点。(5)担孢子观察梨锈病冬孢子萌发形成的担子及担孢子的形态五、作业及思考题1.绘制有隔菌丝、无隔菌丝、营养体变态结构、各类无性孢子和有性孢子的形态图。2.针对不同的病征类型在显微观察时应采用何种制片方法?实验三、鞭毛菌亚门和接合菌亚门真菌形态观察一、目的要求了解鞭毛菌亚门和接合菌菌亚门真菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关的重要属的形态特征及所致病害的症状特点，为病害诊断打下初步基础。二、仪器与用品显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；蒸馏水、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、刀片、通草、酒精灯、无菌水等。三、实验材料立枯丝核菌、瓜果腐霉菌、致病疫霉菌、霜霉菌菌、牵牛花白锈病菌、根霉菌等。以上病害有标本、新鲜材料、挂图、多媒体教学课件。四、观察内容和方法1.腐霉属观察瓜果的腐烂病病果上的白色菌丝体，将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中培养24～48h，菌丝顶端即形成大量游动孢子囊，用针挑取在清水中培养过的菌丝，观察腐霉菌的游动孢子囊。游动孢子囊丝状、姜瓣状或球状等，顶生或间生，无特殊分化的孢囊梗。孢子囊不脱落，萌发时在其顶端产生一管状物，原生质经管状物排出而形成泡囊。游动孢子产生在泡囊内。2.疫霉属取马铃薯或番茄晚疫病标本制片观察。孢囊梗2--3支成丛，自气孔伸出，假轴状分枝，小梗基部膨大，多次产生孢子囊，使孢子囊梗上部呈节状；孢子囊近球状、卵形或梨形等，具乳突。3.单轴霉属观察葡萄霜霉病标本，注意为害部位及症状特点，挑取葡萄霉病病叶病斑上的霉层制片镜检孢子囊梗的形态，注意分枝特点及分枝末端的特征。4.霜霉属观察十字花科霜霉病和大豆霜霉病标本，注意为害部位的症状和特点，然后挑取少许霉层制片镜检孢囊梗和孢子囊，注意孢子囊的梗分枝特点。5.假霜霉属观察黄瓜霜霉病标本，注意为害部位和病状特点，挑取霉层制片或取制备片镜检孢囊梗和孢子囊，注意孢囊梗的分枝特点，与霜霉属形态有何异同。6.白锈菌属镜检牵牛花白锈病菌组织切片，或取以上病叶徒手切片制成临时玻片镜检。孢囊梗平行排列在寄主表皮下，短棍棒形，孢子囊串生。白锈菌为害症状是在寄主表面产生乳白色或粉状的疱斑，这是病菌在寄主表皮下形成的孢子囊堆，白色粉状物是成熟的孢子囊。7、接合菌亚门根霉属用挑针仔细地从培养的匐枝根霉菌中挑取少许连有培养基的培养物，制成临时玻片，在低倍镜下观察孢囊孢子、孢囊梗及囊轴、假根、匍枝状的菌丝。五、作业及思考题1.绘黄瓜霜霉病菌、番茄晚疫病菌孢囊梗、孢子囊、卵孢子图。2.绘匍枝根霉菌孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐菌丝形态图。3.鞭毛菌亚门真菌的共同特征和分类依据是什么?4.接合菌亚门真菌的主要特点是什么?与鞭毛菌亚门有何区别?实验四、子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚