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促胃肠动力药物筛选—离体组织、器官水平药物筛选武汉大学药学院药理系1．了解离体器官试验特点及注意事项，掌握离体器官试验的基本技术。2．学习利用离体器官进行药物筛选的方法，观察受试物对离体胃、肠平滑肌的影响。3．了解科研课题设计原则，科研课题立项需阐述的相关内容。4．了解科研论文写作规范（包括图表制作技巧等）。5．掌握试验数据统计、处理方法。目的离体器官试验常用的离体器官有心脏、血管、肠段、子宫及神经肌肉标本，用离体标本可比较直观地观测药物的作用。不同的动物标本用于测定不同类的药物作用。背景知识在离体器官法中，不同动物的不同器官都要求最适宜的营养环境，因此各种动物的人工生理溶液成份和配制都有区别。在离体器官研究中应特别引起重视。背景知识渗透压：要等渗，但不同动物对同一物质的等渗浓度要求不同。如生理盐水溶液，冷血动物用0.6～0.75%；温血动物用0.8%～0.9%。各种离子：一定比例的不同电解质离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、H+、OH-等是维持组织器官功能所必须。组织器官不同，对生理溶液中离子的成份和浓度要求亦不同。pH影响：人工生理盐水中pH一般要求为中性，对于哺乳动物心脏冠状动脉，酸性生理深夜可使平滑肌松驰；碱性则可使节律加快，振幅缩小。其它条件：葡萄糖提供组织活动所需能量，临用时再加入，以防变质；有的离体器官需要氧气，如离体子宫、离体兔心、乳头肌等。而离体肠管通以空气就可以了。世界卫生组织调查表明，我国有80%的人患有不同程度胃肠病居世界首位。近年来，功能性胃肠病已受到广泛的关注，如功能性消化不良、肠胃激综合征、功能性便秘等，，西方国家人群患病率为5%～24%，每年花费高额的医疗费用，患者的生存质量亦受到不同程度的影响。在最常见造成工作、学习缺勤的疾病中，肠易激综合征的发病率仅次于普通感冒.目前主要采用解痉剂治疗，但只能缓解腹痛，不能治疗便秘。而缓泻剂能缓解便秘，但不能缓解腹痛、腹胀，而且不能长期服用。因此，研究开发新的调节胃肠动力的药物有重要的社会效益和广阔的市场前景。背景知识背景知识甲氧氯普胺第一代第二代多潘立酮它可作用于胃肠道和中枢神经系统，兼有促动力和止吐的功效。可增加食管下端括约肌的张力，使其压力增加加强胃内固体和液体的排空，还可协调胃窦和十二指肠运动，对肠道无明显作用第三代西沙比利它对整个胃肠道包括从食管到肛门括约肌均有促动力作用，能增强生理反应，恢复正常的动力模式。临床常用促动力药中药百合、乌药、帜实、虎杖最突出的特点在于标本兼治，但作用机制不明确，组方尚缺少现代药理学研究的支持。通过离体胃肠平滑肌试验，探讨药物作用机制、组方依据，为新药提供线索。教学试验安排（一）教学分组在一个教学单元内，根据学生人数，将学生分为8组，每组2～5人，并分成上下两班，4组/班。（二）试验方案1．上半班采用胃平滑肌作为试验材料，建议受试物：百合、或乌药、或帜实、或虎杖、或四药合并的水提取物，也可采用各教学单位自行提取的物质，用于筛选。西药对照：胃复安、西沙必利。2．下半班采用肠平滑肌作为试验材料，建议受试物：百合、或乌药、或帜实、或虎杖、或四药合并的水提取物，也可采用各教学单位自行提取的物质，用于筛选。西药对照：胃复安、西沙必利。试验方法及步骤（一）试验材料1．动物：大鼠（220～280g/只），雄性。2．器材：恒温平滑肌槽1台、通气泵1个、铁支架1个、止水夹2个，生物信号采集处理系统，张力换能器，1ml注射器4个，培养皿1个，50ml烧杯1个，组织剪、眼科剪各1把，止血钳两个，镊子两个，丝线若干，移液器一个，砝码一个。3．试剂：台氏液。4．受试药：0.5%胃复安溶液；0.1%西沙必利溶液；20%百合水提取物；10%乌药水提取物；15%帜实水提取物；15%虎杖水提取物；15%四药合并的水提取物。试验方法及步骤（二）试验步骤1．对大鼠离体胃平滑肌正常张力的影响试验。（1）制备胃肌条标本：断头处死，立即剖取胃底部浸泡于台氏液液中，制备成“Z”型，长约2.5cm、宽约0.4cm的胃肌条标本。（2）冲洗浴槽，并在其中加入台氏液30ml（标线处），加热，维持水温在37℃～38℃。调节通气泵，缓慢通入气泡，并调节1～2个气泡/秒。（3）取标本，两端对角处用丝线结扎。一端挂在通气钩上，放入浴槽，另一端从张力换能器的弹簧片小孔中穿出并挂上1g砝码（给予负荷），打开计算机，进入生物信号采集系统，选择“张力通道”，观察活动曲线。待其平衡后，用丝线将挂砝码的丝线牢牢固定于弹簧片上，除去砝码。（4）待标本在浴槽内稳定10min左右，记录一段正常活动曲线，然后用注射器依次向浴槽中滴加药液0.2ml。每加一组药时立即标记，并观察、记录2min频率及收缩幅度。每次药物作用后，用温暖的台氏液冲洗2～3次，待张力恢复基线（约5min）后再试验其他药物。（5）停止记录曲线，保存数据。断电断气，取出回肠，冲洗浴槽。试验方法及步骤2．对大鼠离体胃平滑肌正常张力的影响试验。打开腹腔，找到回盲部，在离其2～3cm的回肠处剪断，取出回肠，置于盛有台氏液的培养皿中，沿肠壁分离并剪去肠系膜，将肠管剪成数段，轻轻冲出肠内容物，最后将肠管剪成2～3cm的小段备用。加样顺序与操作同上。试验结果的原始记录给药前1min内的平均值给药后第1min内的平均值给药后第2min内的平均值频率振幅频率振幅频率振幅0.5%胃复安溶液0.1%西沙必利溶液20%百合水提物10%乌药水提物15%帜实水提物15%虎杖水提物15%四药合并水提物表1药物对大鼠胃或肠平滑肌作用测定原始数据结果处理上下班分别收集4组试验结果，计算平均值及标准差，根据拟研究题目，设计表格，并与给药前相比，进行统计学差异检验。示范表格如下。促进率（%）=（给药后值-给药前值）/给药前值×100%收缩频率促进率（%）1min2min1min2min0.5%胃复安溶液0.1%西沙必利溶液20%百合水提物10%乌药水提物15%帜实水提物15%虎杖水提物15%四药水提物表2受试物对大鼠胃或肠平滑肌收缩频率的影响（χ±SD，n=4）试验报告内容及格式要求（一）题目根据你的理解或兴趣，可将报告题目拟定为：1．“胃复安、西沙必利对胃肠平滑肌作用特征比较”或2．“中药促胃肠动力药筛选及组方依据研究”或3．“中、西药促胃肠动力作用特征研究”或4．自定。（二）研究背景及意义根据选择的题目，说明研究背景、立题依据、研究意义。（三）试验方法根据选择的题目，描述试验方法（剔除不必要的试验方法）。（四）试验结果根据选择的题目，选择所需的试验数据，并进行统计处理，以图或表的形式描述结果。（五）讨论分析结果，引用相关文献，并进行充分讨论。注意事项1．冲洗和分离肠管时动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管。2．标本制备好后，放在盛有温暖台氏液的培养皿中保存，以免影响标本的反应性。在整个操作过程中，尽量使肠段在温暖的台氏液而不是在空气中。3．肠管两端穿线时，切勿将肠管缝死，只需穿过一层肠壁，靠端的位置恰到好处。4．通气时使气泡呈小米粒大小均匀上升，水泡不宜过多或过少。5．将肠管放入裕管时，注意肠管和连线都不要触及管壁；在用砝码标定后，调节连线松紧度，用线系牢，并且线应垂直桌面，加入的台氏液要超出肠管。6．加药时不要把药液直接加到回肠上，以免影响结果，最好直接加到台氏液中。7．换台氏液时，切勿使用冰冷台氏液。8．换液时应按“暂停”，以减少对张力换能器的影响。9．在整个过程中不要按“停止”，以免数据的丢失。10．原始记录数据表多采用“主题表格”，报告正文中的表格应采用“三线表”。