第06章芳酸类药物的分析

第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析既有苯环又有羧酸,绝大多数直接相连。COOH芳酸第一节典型芳酸类药物的结构与性质一、水杨酸类(一）典型药物COOHOH水杨酸（pKa2.98）COOHOCOCH3阿司匹林（pKa3.49）双水杨酯?COOHOOOH二氟尼柳二、邻氨基苯甲酸类典型药物（二）主要理化性质1、酸性2、吸收光谱特性（UV,IR）3、水解性4、基团或元素特性1.酸性芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在3～6之间，属中等强度的酸或弱酸；—X、—NO2、—OH等吸电子取代基存在使酸性增强—CH3、—NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。3.水解性2.吸收光谱特性4.基团或元素特性取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量；酮洛芬的二苯甲酮可与苯肼缩合显色。等第二节鉴别试验一、FeCl3反应具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物紫堇色铁配位化合物～6pH43FeClOHArOHR直接：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、二氟尼柳水杨酸ChP（2010）[鉴别]（1）取本品的水溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。间接：阿司匹林、贝诺酯水杨酸阿司匹林阿司匹林ChP（2010）[鉴别]（1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。赭色苯甲酸（钠）碱性或中性3FeClCOOHOH6+4FeCl3COO-O-2Fe3Fe+12HCl米黄色钠盐丙磺舒～30.60.5FeClpHNaOH二、缩合反应OHOONH-NH2NO2NO2H2SO4-H2ONHOONHNO2O2N橙色三、重氮化—偶合反应芳香第一胺类鉴别反应具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄～猩红色萘酚OH-NH2R直接：对氨基水杨酸钠间接：对乙酰氨基酚（贝诺酯）+H贝诺酯对氨基酚Cl-+22+2+++ArNH2NaNO2HClArNNNaClH2O四、氧化反应:甲酚那酸，吲哚美辛4SO2H甲酚那酸黄色且显绿色荧光甲酚那酸重铬酸钾深蓝色棕绿色吲哚美辛重铬酸钾紫色黄色H2SO4△吲哚美辛亚硝酸钠HCl绿色五、水解反应醋酸臭气）水杨酸（白色醋酸钠水杨酸钠阿司匹林硫酸CONa32可溶于醋酸铵（测定熔点），水杨酸白色双水杨酯稀盐酸NaOH1.氯元素的鉴别游离氯离子双氯酚酸纳3NaCO六、特征元素反应2.硫元素的鉴别硫化铅黑色沉淀美洛昔康2cb2SHAP七、光谱法（一）、UV1.最大吸收波长1贝诺酯240nm2氯贝丁酯226nm3羟苯乙酯259nm4丙磺舒249nm5双氯芬钠276nm6甲芬钠酸八、IR九、TLC与HPLC2.最大与最小吸收波长3.吸光度法4.吸光度比值法第三节特殊杂质及其检查一、阿司匹林及双水杨酯中水杨酸与有关物质的检查1.水杨酸的检查:杂质来源原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水解产生（贮存过程中水解产生）检查方法:对照法反应原理:三氯化铁反应限量:原料：0.1%；阿司匹林片：0.3%；阿司匹林肠溶片：1.5%；阿司匹林栓：1.0%（HPLC法）2.其他杂质:苯酚和其他杂质：醋酸苯脂，水杨酸苯酯，乙酰水杨酸酐（ASAN）、乙酰水杨酰水杨酸（ASSA）、水杨酰水杨酸（SSA）检查方法:检查方法:HPLC色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）流动相A:乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70）流动相B：乙腈梯度洗脱276nm检测波长3.双水杨酯中游离水杨酸的检查双水杨酯为水杨酰水杨酸，以水杨酸为原料经酯化而成。生产过程中酯化不完全、精制过程及贮存过程中水解产生均可以产生水杨酸检查方法:对照法反应原理:三氯化铁反应二、甲芬那酸中2,3-二甲基苯胺的检查1.合成工艺和杂质检查ClCOOH+NH2CH3CH3CuNHCOOHCH3CH3原料的2,3-二甲基苯胺容易发生残留，药典要求采用气相色谱法检查，限度要求为0.01%三、二氟尼柳中有关物质的检查ChP（2010）合成过程中可能产生多种苯或联苯类中间体及副产物，以及其他有关物质。CHp采用TLC和HPLC法高低浓度对比法(供试品自身对照法)1.TLC高低浓度对比法方法：对照溶液一定量供试品溶液供试品溶液稀释溶剂溶解S供试品溶液：10mg/ml对照品溶液：50ug/ml供试品对照品判断：②供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）①控制杂质斑点个数，控制杂质种类缺点：不同物质，不同Rf值比较，准确度差、直观性差。优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液；有关物质A:TLC:硅胶GF254,展开剂：正已烷-二氧六环-冰醋酸（85:10:5)供试品溶液：10mg/ml对照品溶液：50μg/ml2.HPLC有关物质B条件：C18柱（250mmХ4.6mm)流动相：H2O-MeOH-乙腈-冰醋酸（55：23：30：2）检测λ：254nm供试品溶液：10mg/ml对照品溶液：50μg/ml调灵敏度：对照品进样20μl,主峰高为满量程的20%测定：进对照品和供试品各20μl，记录谱图的保留时间是主成分出峰时间的2倍，供试品各杂质峰的面积的和不得大于对照品溶液主峰的面积。四、萘普生中6-甲氧基-2-2萘乙酮等有关物质的检查（一）合成工艺2-萘甲醚酰化6-甲氧基-2-乙酰萘（6-甲氧基-2-萘乙酮）羧化2-羟基-2-（6-甲氧基-2萘基）氢化萘普生杂质：2-萘甲醚和6-甲氧基-2-萘乙酮（二）有关物质检查（HPLC）条件：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱流动相：MeOH-0.01MKH2PO4（75：25），磷酸调至pH为3.0检测λ：240nm理论塔板数：不低于5000供试品溶液：0.5mg/ml对照品（6-甲氧基-2-萘乙酮）溶液：50μg/ml混合对照品和供试品，作为对照溶液，进样20μl,主峰高为满量程的20%测定：进对照品和供试品各20μl，记录谱图的保留时间是主成分出峰时间的2.5倍，供试品6-甲氧基-2-萘乙酮杂质峰的面积的不得大于对照溶液中杂质峰面积（0.1%）；其他杂质单个峰面积不得大于对照溶液杂质峰的2倍（0.2%）第四节含量测定一、酸碱滴定法1.直接滴定法pKa3～6终点滴定酚酞中性乙醇NaOHsolutionS应用：阿司匹林、苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯和布洛芬等阿司匹林ChP取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（1）测定方法及计算Ka=3.27×10-4反应摩尔比为1∶1（2）讨论①中性乙醇溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言②优点：简便、快速缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）酸性杂质干扰（如水杨酸）③适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定2.剩余滴定法应用范围美洛昔康显一价酸性，由于其甲醇、乙醇及水溶性欠佳，采用回滴法测定。0SBBBAV-VFT%=100%W（）含量（）3.水解后剩余滴定法酯的含量测定方法阿司匹林酯类供试品加入过量、定量的NaOH已知浓度的酸回滴过量NaOHCOOHOCOCH3+2NaOHCOONaOH+CH3COONa2NaOH（过量）＋H2SO4＝Na2SO4＋2H2O剩余滴定：水解：反应摩尔比为1∶2优点：消除了酯键水解的干扰缺点：酸性杂质干扰含量测定亦可用此法USP（32）方法：取本品约1.5g，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l）相当于45.04mg的C9H8O4。反应摩尔比为1∶2，F：硫酸浓度校正因数10.5180.1245.04(/)AaTmMbmgml0SBBBAV-VFT%=100%W（）含量（）3.两步滴定法阿司匹林片、阿司匹林肠溶片氯贝丁酯消除片剂中酸性降解产物及稳定剂对阿司匹林片的测定干扰而采用两步滴定法。取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O第一步中和酒石酸枸橼酸水杨酸醋酸+NaOH钠盐+H2O第二步水解后剩余滴定水解：COONaOCOCH3+NaOHCOONaOH+CH3COONa(定量过量）?©2NaOH（过量）＋H2SO4＝Na2SO4＋2H2O反应摩尔比为1∶1本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰剩余滴定：氯贝丁酯：消除供试品中共存的酸性杂质10.1180.1118.01(/)AaTmMbmgml片剂含量测定结果的计算0SBBBA0SBBBAV-VFT%=100%WV-VFTW%=100%WB（）含量（）（）标示量（）二、紫外分光光度法1.直接紫外-可见分光光度法二氟尼柳：对照法对照品：50μg/ml检测λ：315nm对供对供CCAA%100%标示量标示量对供WAWDCAR供试品溶液：10片研细，精密称取适量，置100ml量瓶中，…..取续滤液5ml,置100ml量瓶中,稀释定容至刻度,摇匀,检测λ：315nm按C13H19NO4S的吸收系数（）为745计算。%11cmE紫外分光光度法吸收系数法x1%1cmA=E100xcx1%1cmDW(%)=100%WBADW=100%E100WBxc标示量1001002000()5Dml100D=100=2005)0(ml丙磺舒片取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于丙磺舒60mg），置200m1量瓶中，加乙醇150ml与盐酸溶液（9→100）4m1，置70℃水浴上加热30min，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→100）2m1，用乙醇稀释至刻度，摇匀。于1cm吸收池中，以溶剂为空白，在249nm的波长处测定吸收度，按C13H19NO4S的吸收系数（）为338计算。%11cmE紫外分光光度法吸收系数法x1%1cmDW(%)=100%WBADW=100%E100WBxc标示量3.柱分配色谱—紫外分光光度法USP（32）阿司匹林胶囊和栓剂可消除辅料和降解产物的干扰（1）阿司匹林的测定色谱柱：硅藻土-碳酸氢钠洗脱液：先用三氯甲烷洗色谱柱出去中性或碱性杂质，用冰醋酸三氯甲烷溶液（150）10ml洗涤，后以冰醋酸-三氯甲烷溶液（1100）85ml洗脱，收集洗脱液于100ml容量瓶，稀释至刻度，于