第七章芳香胺类药物的分析

第七章芳香胺类药物的分析第一节芳胺类药物的分析第二节苯乙胺类药物分析第三节芳氧丙醇胺药物分析基本要求第一节芳胺类药物的分析芳胺类药物分为两类芳伯氨基未被取代芳伯氨基被酰化一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物COOR2NR1HCOOC2H5H2N苯佐卡因H2NCOOCH2CH2NC2H52.HCl盐酸普鲁卡因COOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl盐酸丁卡因CONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl盐酸普鲁卡因胺1.芳伯氨基特性：重氮化－偶合反应；（二）主要理化性质2.水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，3.弱碱性：二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物NHCR2OR1R3R4HONHCOCH3对乙酰氨基酚（扑热息痛）SOONHCOCH3CH3CONH醋氨苯砜NHCONC4H9CH3CH3HCl盐酸布比卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl盐酸利多卡因1.水解后显芳伯氨基特性：分子结构中含有芳酰氨基，酸水解后显芳伯氨基的特性反应。2.水解产物易酯化：对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋酸乙酯香味。（二）主要化学性质3.酚羟基特性：对乙酰基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸水解有酚羟基，可与FeCl3发生显色反应，4.弱碱性：利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，5.与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比卡因酰氨基上氮可与Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。三、鉴别试验（一）重氮化-偶合反应分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。Ar-NH2HClNaNO2重氮盐OH--萘酚橙黄~猩红色直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N－亚硝基化合物的乳白色沉淀。（二）与三氯化铁反应对乙酰氨基酚+FeCl3蓝紫色化合物NHCOCH3O-NHCOCH3OH3+FeCl33Fe+3HCl1.与铜和钴离子反应：利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物；与氯化钴生成亮绿色沉淀。（三）与金属离子反应2.羟肟酸铁盐反应基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构。NH2CONHCH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)23FeH2O2FeCl3紫红，暗棕色，棕黑色3.与汞离子反应盐酸利多卡因+H2NO3+Hg(NO3)2黄色对氨基苯甲酸酯＋H2NO3+Hg(NO3)2红色或橙黄色1.盐酸普鲁卡因的鉴别(四)水解产物反应盐酸普鲁卡因+NaOH普鲁卡因油状物对氨基苯甲酸钠+二乙氨基乙醇（使湿润的红色石蕊试纸变兰色）对氨基苯甲酸钠+HCl对氨基苯甲酸（白色）NH2COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2NH2COONaNaOHNaOH+HOCH2CH2N(C2H5)2NH2COONaNH2COOHNH2COOHHClHClHCl.2.苯佐卡因的鉴别苯佐卡因+NaOH乙醇乙醇+I2+NaOHCHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）(五)制备衍生物测熔点1.三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因NHCOCH2N(C2H5)2CH3H3CNO2NO2O2NOH.熔点为228℃～232℃CH3NHCOCH3NC4H9NO2NO2O2NOH.熔点为194℃2.硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNHC4H9COOCH2CH2N(C2H5)2HSCN.NH4SCNNHC4H9熔点为131℃(六)紫外特征吸收光谱法1.在λmax处测定供试液的百分吸收系数。例如：对乙酰基酚在0.4%NaOH中于λmax=240nm;E1%1cm=715在HCl(0.1nol/L)-甲醇于λmax=249nm;E1%1cm=8802.在规定的浓度测定λmax例如：醋氨苯砜5μg/ml;λmax=256nm;284nm再例如：盐酸普鲁卡因胺5μg/ml;λmax=280nm(七)红外吸收光谱法（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查1.乙醇溶液的澄清度与颜色：因其生产工艺用铁粉作还原剂，可能带入，致使乙醇溶液产生混浊，中间体对氨基酚易氧化产生有色化物，在乙醇溶液中显橙红色或棕色。四、特殊杂质检查检查方法：配制0.1g/ml本品乙醇溶液，溶液应澄清，无色；如显混浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准液比较，不得更深。2.有关物质检查：Ch.P是以对氯苯乙酰胺为对照品，采用TLC法中的杂质对照品法。3.对氨基酚检查：利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，采用比色法。(二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查为什么要检查？H2NH2NCOOH-CO2O==O[O]黄色怎样检查？采用TLC法中的杂质对照品法进行检查。（一）亚硝酸钠滴定法Ar-NH2;Ar-NHCOR;Ar-NO2均可采用此法Ch.P中的苯佐卡因；盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。五、含量测定NHCOR+H2ONH2+RCOOHH+△NO2+6[H]NH2+2H2O1.原理：Ar-NHCOR+H2OAr-NH2+RCOOHH+Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2+Cl-+NaCl+2H2O2.测定主要条件：(1)加KBr增加反应速度重氮化的反应历程为：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2ONN+Cl-快NNOH快NNOH慢NO+Cl-NH2KBr+HClHBr+KClHNO2+HClNOBr+H2OKKBr∵KHBr比KHCl大300倍∴生成NOBr量大得多∴加快反应速度(2)加过量HCl加速反应：①重氮化速度加快；②重氮盐在酸性介质中稳定；③防止生成氨基偶氮化合物。Ar-N2+Cl-+H2N-ArAr-N=N-NH-Ar+HCl一般摩尔比为Ar-NH2:HCl=1:2.5~6。(3)室温条件下滴定:温度高反应速度快；每升高10℃加快2.5倍太高,可使Ar-N2+Cl-+H2OAr-OH+N2+HCl(4)滴定管尖端插入液面下滴定3.指示终点的方法(1)用停滴定法溶液检流计终点前：无过量无电流HNO2终点时：有过量有电流（使指针偏离零HNO2永停在某一位置）(2)外指示剂法用KI-淀粉指示剂指示终点的原理：2NaO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O(二）非水溶液滴定法基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因侧链叔胺氮在滴定盐酸丁卡因时，因其在冰醋酸中碱性弱，加醋酐可增加其碱性。因醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强，可增加碱性。2(CH3CO)2O(CH3CO)3O++CH3COO-相当于［B]HCl+Hg(Ac)2[B]HAc+HgCl2[B]HAc+HClO4[B]HClO4+HAc1.对乙酰基酚原料的含量测定在0.4%NaOH介质中；257nmD%＝［E1%1cm]样／［E1%1cm]标×100％；E1%1cm＝7152.对乙酰基酚片溶出度测定（测定条件同上）1片＋稀HCl24ml+H2O1000ml精密量取5ml+0.4%NaOH10ml+H2O100mlλ257nm测定A。W×1／1000×5／100×100＝C（g/100ml)W(g)=200×C;C=A/715∴溶出度＝W／标示量×100％＞80％为合格（三）分光光度法中性条件下的重氮化反应（四）比色法盐酸普鲁卡因+1,2-蒽醌-4-磺酸钠pH4-9棕红色化合物，max482nm处测定A此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中常含有降解产物对氨基苯甲酸；可以苯甲酸为内标同时测定两者的含量，该法简单准确。色谱条件：色谱柱为μBondapakC18300mm×4mm流动相为甲醇－1％HAc(40:60);UV检测器250nm.（六）HPLC法第二节苯乙胺类药物的分析一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物R1CHCHNHR2OHR3*常见的苯乙胺类药物HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOHOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素（二）主要化学性质1.弱碱性本类药物结构中有烃氨基侧链，为仲胺氮显弱碱性。2.酚羟基特性本类药物结构中有酚羟基，可与FeCl3;发生氧化。3.光学活性多数药物结构中有手性碳原子，具有旋光性。二、鉴别试验(一)与三氯化铁反应Ar-OH＋FeCl3络合显色＋碱液紫红色。(二）甲醛－硫酸反应在此试剂中形成醌式结构而显色。药物三氯化铁甲醛－硫酸肾上腺素0.1mol/LHCl显绿色,甲氨试液显红－紫红红色重酒石酸去甲肾上腺素绿色,加NaCO3试液显紫色－红色淡红色盐酸去氧肾上腺素紫色玫瑰红橙红棕红盐酸异丙肾上腺素深绿色,加5％NaCO3试液显蓝紫色－红色棕色暗紫色(三）氧化反应本类药物具有Ar-OH，易被氧化剂I2,H2O2,K3Fe(CN)6氧化而显色，例如：肾上腺素在中性或酸性条件下，被I2,H2O2氧化后，生成肾上腺素红；盐酸异丙肾上腺素在酸性条件下，被I2氧化，生成异丙肾上腺素红。(四）紫外特征吸收与红外吸收光谱例如：盐酸异丙肾上腺素0.05mg/mlλmax=280nmA=0.50这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别(五）与亚硝基铁氰化钠(Rimini试验）是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应；可用于重酒石酸间羟胺鉴别。D＋亚硝基铁氰化钠＋丙酮＋Na2CO3红紫色(六)双缩脲反应是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱鉴别：D＋CuSO4+NaOH显蓝紫色＋乙醚，醚层(紫红色)水层(蓝色)(一)酮体检查本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢化不完全，易引入酮体杂质。采用UV法检查：利用酮体在310nm有吸收，本类药物无吸收。例如：肾上腺素本项检查配2.0mg/mlλ=310nmA＜0.05盐酸去氧肾上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA＜0.02盐酸异丙肾上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA＜0.15三、特殊杂质检查(二)有关物质的检查采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。(三)盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查采用PC法中的杂质对照法进行检查。(一)非水溶液滴定法本类药物的原料药多采用此法。本法重点将在第八章讨论。1.重酒石酸去甲肾上腺素的测定相当于［B］的有机酸盐可直接滴定。2.盐酸克仑特罗的测定相当于［B］的HX酸盐不能直接滴定，需加Hg(Ac)2处理后滴定。3.硫酸沙丁醇的测定相当于［B］的H2SO4盐可直接滴定,也可处理后滴定。四、含量测定(二)溴量法本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液用此法。基本原理：HOOHCH-CH2NHCH3+Br2HOOHCH-CH2NHCH3+3HBrBrBrBrBr2+2KI2KBr+I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6(三)比色法利用药物分子结构中的Ar-OH与Fe3＋络合显色，进行比色测定；也可利用药物分子结构中的Ar-NH2重氮化偶合显色，进行比色。Cl[N2]+Cl-CH(OH)CH2NHC(CH3)3ClClCH(OH)CH2NHC(CH3)3ClNHCH2CH2NH2+N=NNHCH2CH2NH2N-(1-萘基）－乙二胺500nm比色测定例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定上述偶合剂可与HNO2显色，干扰比色测定，可先加氨基磺酸铵分解过量的HNO2。HNO2＋2H2NSO3NH42N2+(NH4)2SO4+H2SO4+H2O(四)提取酸碱滴定法硫酸苯丙胺的含量测定：［B］H2SO4+NaOH+NaCl乙醚提取［B］